苯并(a)芘和邻苯二甲酸二丁酯联合染毒对L02细胞STAT3及p-STAT3水平的影响

苯并(a)芘和邻苯二甲酸二丁酯联合染毒对L02细胞STAT3及p-STAT3水平的影响

论文摘要

目的探讨苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,BaP]和邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)体外染毒对人正常肝细胞(L02)细胞信号传导与转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的表达及其活化(p-STAT3)的影响。方法将体外培养的L02细胞分为对照组(0.1%DMSO)、BaP低、中、高剂量单独染毒组(12.5、25.0、50.0μmol/L BaP)、DBP低、中、高剂量单独染毒组(25.0、50.0、100.0μmol/L DBP)和BaP、DBP低、中、高剂量联合染毒组(12.5μmol/L BaP+25.0μmol/L DBP、25.0μmol/L BaP+50.0μmol/L DBP、50.0μmol/L BaP+100.0μmol/L DBP)。染毒72 h后,用倒置显微镜观察细胞形态,应用实时荧光定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测各染毒组STAT3 mRNA的表达水平,免疫印迹(Western blot)方法观察STAT3和p-STAT3蛋白的表达水平。结果细胞染毒72 h后,12.5μmol/L BaP、25.0μmol/L DBP和12.5μmol/L BaP+25.0μmol/L DBP低剂量染毒组的细胞形态改变不明显,仅少量细胞的细胞壁模糊;25.0μmol/L BaP、50.0μmol/L DBP和25.0μmol/L BaP+50.0μmol/L DBP中剂量染毒组细胞开始出现模糊,部分细胞由不规则形变为椭圆形,细胞间隙变大;50.0μmol/L BaP、100.0μmol/L DBP和50.0μmol/L BaP+100.0μmol/L DBP高剂量染毒组贴壁细胞数量减少,漂浮细胞增多,胞体缩小变圆,细胞间隙明显变大,细胞核增大;BaP、DBP联合染毒组较其对应的单独染毒组细胞形态学改变明显。与对照组相比,除12.5μmol/L BaP、25.0μmol/L BaP、25.0μmol/L DBP和12.5μmol/L BaP+25.0μmol/L DBP组外,其余各染毒组的STAT3 mRNA表达水平皆明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。BaP、DBP联合染毒组中,中剂量组(25.0μmol/L BaP+50.0μmol/L DBP)的STAT3 mRNA表达水平明显低于BaP中剂量单独染毒组(P<0.05),高剂量组(50.0μmol/L BaP+100.0μmol/L DBP)的STAT3 mRNA表达水平明显低于BaP、DBP高剂量单独染毒组(P<0.05)。与对照组相比,除12.5μmol/L BaP、25.0μmol/L BaP、25.0μmol/L DBP和12.5μmol/L BaP+25.0μmol/L DBP组外,其余各染毒组STAT3、p-STAT3蛋白的表达水平皆明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。BaP、DBP联合染毒组中,除低剂量组(12.5μmol/L BaP+25.0μmol/L DBP)外,中(25.0μmol/L BaP+50.0μmol/L DBP)、高(50.0μmol/L BaP+100.0μmol/L DBP)剂量组的STAT3、p-STAT3蛋白的表达水平皆明显低于各BaP、DBP中、高剂量单独染毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BaP、DBP染毒可下调L02细胞的STAT3转录表达水平,抑制STAT3的活化(p-STAT3)程度,尤以BaP、DBP联合染毒时抑制作用更为明显。此可能是BaP、DBP致肝细胞凋亡损伤的重要环节。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞来源
  •   1.2 主要仪器与试剂
  •   1.3 L02细胞培养及染毒
  •   1.4 L02细胞形态学观察
  •   1.5 L02细胞STAT3 mRNA表达水平的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测
  •   1.6 L02细胞STAT3、p-STAT3蛋白表达水平的蛋白免疫印迹(Western blot)法检测
  •   1.7 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 BaP和DBP染毒对L02细胞形态的影响
  •   2.2 BaP和DBP染毒对L02细胞STAT3 mRNA表达水平的影响
  •   2.3 BaP和DBP染毒对L02细胞STAT3、p-STAT3蛋白表达水平的影响
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘益宁,陈静,马叶梅,陈文彦,岑延利,王胜利,杨光红

    关键词: 细胞

    来源: 环境与健康杂志 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 预防医学与卫生学

    单位: 贵州医科大学公共卫生学院,贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(81760578),贵州省区域内一流学科建设项目-公共卫生与预防医学(黔教科研发[2017]85号)

    分类号: R114

    DOI: 10.16241/j.cnki.1001-5914.2019.11.009

    页码: 975-979

    总页数: 5

    文件大小: 2681K

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