苏红曾四海李志黄可君（广州血液中心广东广州510095）
【摘要】目的通过分析离心法和虹吸法制备冷沉淀（同批次制备）的质量，选择更加优化的冷沉淀制备方法。方法取同一制备日期的冷沉淀原料血浆，分别采用冷藏融化离心法、水浴融化离心法（两种温度条件）、水浴融化虹吸法制备冷沉淀，分别按照机械抽样法抽样样品，检测冷沉淀中FⅧ含量并进行统计分析。结果4℃冷藏融化离心法的FⅧ含量为65.17±27.39（IU／袋），合格率为40%（8／20）；4℃水浴融化离心法的FⅧ含量为89.67±39.96（IU／袋），合格率为60％（12／20）；2℃水浴融化离心法的FⅧ含量为84.33±30.57（IU／袋），合格率为：55％（11／20）；4℃水浴融化虹吸法FⅧ含量为108.85±42.41（IU／袋），合格率为83.3％（25／30）。经单因素方差分析，4℃水浴融化虹吸法的质量水平明显优于其他三种方法。结论水浴融化虹吸法制备冷沉淀操作简便、快捷，FⅧ合格率高，明显优于冷藏融化离心法和水浴融化离心法，值得推广应用。
【关键词】冷沉淀凝血因子Ⅷ【中图分类号】R197.38【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）36-0061-02冷沉淀是采用特定的方法将保存期内的新鲜冰冻血浆（freshfrozenplasma，FFP）在1℃～6℃融化后，分离出大部分的血浆，并将剩余的冷不溶解物质在1小时内速冻成固态的成分血[1]。根据冷沉淀在低温条件下不融化的特性，可制定不同的制备方法，目前血站常用的制备方法主要有：离心法，原料血浆放置于4±2℃冰箱或在4±2℃恒温水浴箱中融化，待基本融化后，在4±2℃重离心，分离出上层血浆，剩下少量血浆和沉淀物，制成冷沉淀；虹吸法，在4±2℃恒温循环解冻箱中放入原料血浆，转移空袋置于箱体外低位，松开止血夹，启动循环水流和震荡摇摆，血浆融化过程中，随时被虹吸至转移空袋中，当融化至剩下约少量血浆与沉淀物时，闭合导管，阻断虹吸，定量，制成冷沉淀[2]。
本文旨在利用同一批原料血浆使用不同的制备方法制备冷沉淀，通过分析凝血因子Ⅷ的质量水平，选择更高效的冷沉淀制备方法。
1.材料与方法1.1冷沉淀原料血浆本中心体检采血科采集的400ml四联袋全血，要求在采血后6小时之内制备并冻结成固态且各项检测合格的新鲜冰冻血浆。
1.2仪器设备美国SORVALLRC-12BP大容量冷冻离心机，费森尤斯CompomatG4血液分离机，低温操作台，-20℃低温冰箱，4℃贮血冰箱，恒温循环解冻箱，MBF21平板速冻机1.3制备冷沉淀的方法1.3.1冷藏融化离心法（A组）将40份原料血浆置于4℃贮血冰箱中过夜（10-l2h），待其融化到剩下少量冰碴时取出，在已预温的离心机中离心（4℃、4000g、8min），分离出上层血浆，下层剩下约30ml带小量冰碴或絮状物的糊状液体，定量，热合封口后将冷沉淀迅速置于平板速冻机内冻结成固态。
1.3.2水浴融化离心法（B组、C组）将血浆轻放入已预热的恒温循环解冻箱中（温度分别设定为2℃及4℃），血浆按照错位排列的方式放入，每个恒温循环解冻箱中放入30袋，启动循环水流和震荡摇摆，盖上箱盖。待其融化到剩下少量冰碴时取出并尽快装杯并配平，在已预降温的离心机中离心（4℃、4000g、8min），分离出上层血浆，下层剩下约30ml带小量冰碴或絮状物的糊状液体，定量，热合封口后将冷沉淀迅速置于平板速冻机内冻结成固态。血浆融化需时100-110min（2℃水温）或75-80min（4℃水温）。
1.3.3水浴融化虹吸法（D组、D1组、D2组）将血浆轻放入已预热的恒温循环解冻箱中（温度设定为4℃），血浆按照错位排列的方式放入，每个恒温循环解冻箱中放入30袋，转移空袋置于箱体外低位，松开止血夹，启动循环水流和震荡摇摆，盖上箱盖。血浆融化过程中，随时被虹吸至转移空袋中。当融化至剩下约30ml血浆与沉淀物时，闭合导管，阻断虹吸，定量，热合封口后将冷沉淀迅速置于平板速冻机内冻结成固态。血浆融化需时50-60min。
1.3.4质量标准由200mlFFP制备的冷沉淀：FⅧ含量≥80IU/袋[1]。
1.4抽样采用机械抽样法，在成品中取得A组、B组、C组（各20份）和D组、D1组、D2组（各10份）样品。
1.5凝血因子Ⅷ检测采用BECKMANCOULTER血凝仪（ACL7000）检测。
1.6统计学处理采用SPSS18.0对数据进行单因素方差分析及t检验处理。
2.结果2.14种方法制备冷沉淀的FⅧ含量见表1。
表14种方法制备冷沉淀FⅧ含量（IU／袋）
2.1.1将相关数据录入SPSS18.0中，并进行单因素方差分析（显著性水平为0.05）。方差齐性检验：ρ＝0.265（＞0.05），各组实验值通过方差齐性检验，即可以认为各实验组的数据来源于相同方差的不同总体，满足方差分析的前提。
2.1.2单因素方差分析：F＝6.126（＞ρ＝0.01），可以认为不同实验组结果间存在显著差异。
2.1.3采用LSD检验（最少显著性差异法），用T检验完成各组间的配对比较：结果表明，在均值差的显著性水平为0.05时，D组的数据与A组、B组、C组有显著性差异，ρ值分别为0.000、0.016、0.006，均小于0.05，D组的实验结果明显优于其他三组。
2.2不同批次虹吸法制备冷沉淀的FⅧ含量见表2表2不同批次虹吸法制备冷沉淀FⅧ含量（IU／袋）
三组数据间不存在显著性差异，证明虹吸法制备冷沉淀的工艺是稳定、可靠的，制备结果是可重现的。
3.讨论成分输血已广泛应用于临床，冷沉淀是临床常用的成分血，其中含有丰富的的凝血因子，主要含有5种成分：丰富的FⅧ、丰富的Fg、血管性血友病因子、因子Ⅻ、纤维结合蛋白（纤维粘连蛋白）。输注后具有显著的止血和促进创伤组织修复的功能。目前冷沉淀在临床的应用越来越广泛，用于治疗儿童和成人血友病甲，补充纤维蛋白原，治疗血管性血友病，治疗因子缺乏症和补充纤维结合蛋白等[3]。还常用于促进创伤烧伤愈合、防止伤口感染和阻止DIC扩展，以及用于恶性肿瘤手术和腹腔镜等手术，以减少出血、促进愈合和防止黏连[4，5]。因此优质高效的冷沉淀，对保证其临床疗效、充分地发挥其重要功能。
FFP内含有全部的凝血因子，包括不稳定FⅧ。FⅧ在体外的半衰期较短，多为8-12h，其活性易丧失[6]。FFP融化后，FⅧ活性随着时间的延长而有明显的降低，其活性衰减了41.17％[7]。我们的检测结果表明，水浴融化虹吸法制备的冷沉淀FⅧ的含量和合格率均高于冷藏融化离心法和水浴融化离心法,这是因为冷藏融化离心法（需在4℃冰箱中经过14-18h缓慢融化）和水浴融化离心法制作冷沉淀，均需再经离心分离，耗时均比水浴融化虹吸法长，FⅧ衰减较多，且离心时不可避免的温度上升，均导致FⅧ一定程度的丧失[7]。而水浴融化虹吸法制备的冷沉淀只需约1h即可完成整个制备过程，需时较少，从而获得较高的FⅧ含量和合格率，且具有操作简便、制备时间短、制备温度恒定等优点，制备的冷沉淀质量明显优于冷藏融化离心法和水浴融化离心法。
参考文献[1]陈小伍，于新发，田兆嵩.输血治疗学.北京：科学出版社，2012：188[2]中华人民共和国卫生部.血站技术操作规程（2012版）.2012-01[3]江朝富，崔徐江，汪传喜.现代成分输血与临床.天津：天津科学技术出版社，2003：254[4]陈小伍，于新发，田兆嵩.输血治疗学.北京：科学出版社，2012：194-196[5]杨孝顺，安梅，阮光萍，等.冷沉淀在临床外科手术中的应用.中国输血杂志，2005，18（3）：255-257[6]杨江存，李芒会，于青，等.新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化.中国输血杂志，2005，18（3）：2l1-2l2[7]李静旗，张丽，宫本兰，等.冷链对新鲜冰冻血浆FW活性的影响.临床输血检验，2003，5（3）：192-193