论文摘要
目的:构建针对核受体结合SET结构域蛋白2（nuclearreceptorbindingSETdomainprotein2,NSD2）的短发夹干扰RNA（shorthairpinRNA,shRNA）慢病毒干扰载体,建立稳定干扰NSD2基因的MDA-MB-231三阴乳腺癌细胞株。方法:构建2条针对人源NSD2基因的shRNA（shNSD2-1#和shNSD2-2#）,连接到慢病毒载体（pGLV10/U6/RFP/Puro）并进行测序鉴定。将NSD2shRNA慢病毒载体与包装质粒共转染到293T细胞,慢病毒包装后进行滴度检测。将包装好的慢病毒转染至三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞中,嘌呤霉素筛选建立稳定转染NSD2 shRNA的细胞株。采用real-time PCR检测NSD2mRNA的表达变化,蛋白质印迹法检测NSD2及其特异性催化的组蛋白甲基化标志物H3K36me2蛋白水平的表达变化。结果:成功构建两个NSD2 shRNA慢病毒干扰载体;与阴性对照组相比,shNSD2-1#组和shNSD2-2#组MDA-MB-231细胞中NSD2 mRNA和蛋白水平均显著下调,NSD2催化的H3K36me2蛋白表达也随之下调。结论:本研究成功建立了shRNA慢病毒载体介导的稳定敲低NSD2的MDA-MB-231细胞株,证实干扰NSD2基因表达能有效抑制其对组蛋白H3K36的甲基化作用,为进一步研究NSD2在乳腺癌中的作用机制奠定了基础。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 刘秀敏,潘云,宁春萌,高波
关键词: 三阴乳腺癌,干扰,慢病毒
来源: 临床与病理杂志 2019年11期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 肿瘤学
单位: 大理大学第一附属医院病理科,大理大学基础医学院
基金: 国家自然科学基金(81660037),云南省应用基础研究计划青年项目(2016FD072),云南省高校重点实验室建设项目[云教科(2016)37号],大理大学肿瘤分子病理学创新团队建设项目[理大校发(2019)13号]~~
分类号: R737.9
页码: 2349-2355
总页数: 7
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