王鹏程[1]2003年在《利用RNAi技术沉默拟南芥MAPK2基因筛选mapk2突变体》文中认为在植物的整个生命历程中，植物需要不断的感受其生活环境中的各种变化和刺激，通过一系列的信号级联过程传递到细胞内，并通过调整细胞内相应生理过程和基因表达，从而对刺激产生各种适应性的反应。在这一过程中，促分裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase, MAPK）及其信号级联途径扮演了重要角色，目前已经发现，MAP激酶级联途径与植物对干旱、高盐、低温、激素（乙烯、脱落酸、赤霉素、生长素）、创伤、病原反应以及细胞周期调节等多种反应的信号传递有关。根据序列同源性比较分析，在拟南芥基因组中，至少存在有20个不同的MAPK基因，这些根据序列和催化位点的结构的相似性，拟南芥所有的MAPK基因可以分为四个亚族，到目前为止，人们研究较多的MAPK大都集中于A，B两个亚族，发现它们可能参与了植物对环境刺激和激素的反应、细胞分裂等过程，但对于其他亚族的MAPK，尤其是C亚族MAPK的功能几乎是一无所知RNA干涉是广泛存在于真菌、植物和动物中的一种转录后水平的基因沉默机制，可能在病毒防御、抵御转座子及重复序列带来的基因组的不稳定性，及发育调控中可能扮演着重要的角色。由于RNA干涉能够在不改变生物的基因组结构的情况下，以少量dsRNA分子，高效地抑制相同序列内源基因的表达，所以，RNA干涉一经发现，便被广泛应用于基因功能的研究中，成为一种新的反向遗传学技术。从而也为研究植物信号转导过程中的一些重要基因的功能的研究提供一种简便而高效的方法。本实验利用PCR技术，克隆拟南芥的MAPK2基因（AT1G59580）中的一端序列（650 bp），并将这一基因片段分别以正向和反向插入双源载体pFGC5941的两个多克隆位点中，构建pFGCmpk2ds。并将其转入农杆菌菌株LBA4404中，通过Floral dip法转化拟南芥。收获后的种子形成植株后用PPT进行筛选，获得25株潜在的转基因植株。通过对其MAPK2基因mRNA水平的检测表明，其mRNA含量明显减少，说明其即为RNA干涉。与同条件下正常生长的野生型相比，所获得的突变体大都表现出与野生型不同的形态特征，表现为莲座叶增多、或分层，花芽萌发时缺乏顶端优势，次级花序生长增强等。这些差异可能暗示了MAPK2在发育<WP=8>过程中的作用，以及这种差异与生长素的信号转导途径的关系，但其作用机制仍需进一步研究。
林俊俊, 郭怀刚, 董洁静, 杨克军, 张海燕[2]2019年在《高粱AGO蛋白家族基因鉴定及表达分析》文中提出Argonaute (AGO)蛋白是RNA介导的沉默复合物RISC的核心成分,在小RNA、Dicer-like酶等的协同下共同激发RNA沉默反应。为阐明高粱中AGO蛋白的功能,本研究采用生物信息学的方法首次在高粱全基因组水平鉴定15个Sb AGOs,分别定位于高粱的7条染色体上,根据氨基酸序列将其划分为叁个亚家族。亚家族Ⅲ中Sb AGO7和Sb AGO3都含有3个外显子,亚家族Ⅱ中Sb AGO4和Sb AGO6都具有22个外显子,成员最多的亚家族Ⅰ中基因外显子数量介于19～24之间。其中,亚家族Ⅰ中Sb AGO1-1和Sb AGO1-3、Sb AGO1-3和Sb AGO1-4、Sb AGO5-2和Sb AGO5-4发生过基因复制事件,可能存在功能冗余现象。NCBI表达谱数据库分析发现,Sb AGO1-1、Sb AGO1-2、Sb AGO1-3和Sb AGO4在高粱不同组织器官和生长发育阶段均有较高表达,其中Sb AGO1-1和Sb AGO1-2、Sb AGO1-3和Sb AGO4表达时期和表达量基本一致,可能在调控高粱生长发育方面发挥协同作用。高温、干旱及高温与干旱复合逆境表达谱芯片数据分析发现,高温处理引起5个Sb AGOs基因差异表达,干旱处理Sb AGOs表达变化不明显,复合逆境引起7个Sb AGOs基因差异表达; 2个处理共同差异表达基因为Sb AGO1-3、Sb AGO1-1、Sb AGO5-2和Sb AGO3,表达量变化趋势相近。其中Sb AGO1-1、Sb AGO1-2、Sb AGO1-3和Sb AGO5-6下调表达,Sb AGO3、Sb AGO5-2、Sb AGO1-4和Sb AGO10上调表达。本研究结果为揭示Sb AGO蛋白功能和发掘高粱的抗逆育种靶向基因资源提供了一定的理论依据。
参考文献：
[1]. 利用RNAi技术沉默拟南芥MAPK2基因筛选mapk2突变体[D]. 王鹏程. 河南大学. 2003
[2]. 高粱AGO蛋白家族基因鉴定及表达分析[J]. 林俊俊, 郭怀刚, 董洁静, 杨克军, 张海燕. 核农学报. 2019