人体皮肤成纤维细胞的快速分离及多向分化能力鉴定

人体皮肤成纤维细胞的快速分离及多向分化能力鉴定

论文摘要

目的建立快速分离人皮肤成纤维细胞的方法,并探讨成纤维细胞在成脂、成骨、成软骨和成神经的多向分化潜能。方法利用组织块培养法分离人体皮肤成纤维细胞,通过形态学观察、流式分析、Vimentin蛋白染色鉴定成纤维细胞;再利用生长曲线、核型分析、线粒体染色分析不同传代细胞的增殖速度,线粒体及染色体形态的改变;最后进行成纤维细胞成脂、成骨、成软骨和成神经的诱导分化实验,鉴定其多向分化潜能。两代细胞增殖速度及线料体相对量的比较采用t检验统计分析。结?果分离的皮肤成纤维细胞呈典型梭状及多角形;高表达细胞表面标记物CD90 (NCF1,NCF2占比分别为99.9﹪,98.7﹪)和CD73 (NCF1,NCF2占比分别为98.2﹪,85.6﹪),但极少表达造血干细胞标记物CD34 (NCF1,NCF2占比分别为1.8﹪,2.6﹪);细胞Vimentin蛋白表达呈阳性,阳性率为100﹪;对细胞生长曲线进行分析,表明分离后不同代次细胞增殖差异无统计学意义(t=1.586,P=0.1567);线粒体相对含量统计分析,同一株细胞系第5代(相对荧光强度值:6876±577.8)与第10代(相对荧光强度值:7371±471.9)之间的差异无统计学意义(t=0.664,P=0.543);核型分析分别显示传代后保持染色体数目为正常46条且形态无明显异常;经诱导后成纤维细胞可向成脂、成骨、成软骨和类神经分化。结论利用组织块培养法分离出的人体皮肤成纤维细胞状态稳定,增殖能力强,具有成脂、成骨、成软骨和成神经多向分化诱导潜能,为细胞移植修复骨损伤、软骨损伤和神经损伤性疾病的临床研究提供细胞来源及实验依据。

论文目录

  • 材料与方法
  •   一、材料
  •   二、方法
  •     (一)人体成纤维细胞的分离培养
  •     (二)细胞形态学观察及鉴定
  •     (三)分离细胞的多向诱导分化
  •   三、统计学分析方法
  • 结?果
  •   一、人体皮肤成纤维细胞的分离与鉴定
  •   (二)皮肤成纤维细胞的多向分化能力鉴定
  • 讨?论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 魏传飞,王伟,刘延明,段婧,芦现杰,王琰,张男,李孟鹏,陈超,章阳,佟加贝,韩发彬

    关键词: 皮肤成纤维细胞,组织块培养法,流式分析,多向分化

    来源: 中华细胞与干细胞杂志(电子版) 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 聊城大学/聊城市人民医院组织工程与再生医学研究所,山东大学第二医院转化医学研究所

    基金: 国家自然科学基金面上项目(81571241),山东省重点研发计划(公益类专项2017GSF18104)

    分类号: R329.2

    页码: 267-275

    总页数: 9

    文件大小: 5586K

    下载量: 201

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