导读:本文包含了活化素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:受体,激酶,白介素,血管,蛋白,创伤,体外循环。
活化素论文文献综述
王雪儿,张琳[1]（2019）在《mDia1调节活化素B诱导的骨髓间充质干细胞迁移和皮肤创伤修复》一文中研究指出骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,BMSC)是目前临床和基础研究中应用最为广泛的多能成体干细胞,应用BMSC治疗皮肤创伤修复已显示出良好的治疗效果。课题组前期研究表明,生长因子activin B可以提高BMSC移植效率,促进皮肤创伤愈合;体外细胞学研究发现,activin B诱导BMSC迁移。RhoA是Rho GTP酶蛋白家族成员,前期研究发现RhoA在activin B(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
罗清琼,王逸亭,王涵,陈福祥,许丽莉[2]（2018）在《活化素A在原发性干燥综合征患者中的表达分析研究》一文中研究指出本研究旨在初步探讨活化素A在原发性干燥综合征(primary Sj?gren's syndrome, pSS)患者唇腺组织及外周血中的表达情况。选择上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔黏膜科收治的60例pSS患者和30例对照者作为研究对象,采用ELISA检测血清活化素A的表达情况;采用实时荧光定量PCR分析PBMC中活化素A及相关受体mRNA的表达情况;采用免疫组织化学染色法分析唇腺组织样本中活化素A的表达情况。结果显示pSS患者血清及唇腺组织中活化素A的水平明显高于对照者(P <0.05);pSS患者PBMC活化素AβA亚基mRNA表达水平显着升高(P <0.01),但活化素Ⅰ型受体(activin receptorⅠ, ACVRⅠ)A和活化素Ⅱ型受体(activin receptorⅡ, ACVRⅡ)A的mRNA表达水平明显低于对照者(P <0.05),而ACVRⅠB、ACVRⅡB及其信号通路相关分子Smad2和Smad3的mRNA表达水平与对照者差异无统计学意义(P> 0.05)。研究结果表明活化素A在pSS患者组织和外周血中表达异常,可能参与了pSS的发生、发展。(本文来源于《现代免疫学》期刊2018年06期）
武薇,曾惠昆,张敏,张琳[3]（2018）在《活化素B促进皮肤伤口部位血管的再生》一文中研究指出目的探讨活化素B(Activin B)在活体水平上对小鼠皮肤创伤愈合过程中血管再生的影响。方法采用小鼠全层皮肤切除模型,Activin B组创面注射Activin B,PBS组用PBS处理后,观察其伤口愈合,测定创面愈合率,观察肉芽组织形成,免疫组化分析血管再生,血流分析仪器检测伤口部位肉芽组织血流量。结果 Activin B处理后,创面愈合速率加快,创面肉芽组织中血管再生数量增多,肉芽组织平均血流量较高。结论 Activin B可以促进创面肉芽组织中血管的再生,从而加速创面的愈合。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2018年22期）
熊若琦,涂江华,胡长平[4]（2018）在《活化素受体样激酶1与心血管疾病研究进展》一文中研究指出活化素受体样激酶1(ALK1)是转化生长因子β(TGFβ)受体超家族的一种跨膜丝氨酸/苏氨酸受体激酶。ALK1主要在内皮细胞中表达,在内皮细胞生物学和血管再生中的作用已得到广泛研究。最近研究提示,ALK1在心血管内稳态中发挥重要作用,与心血管疾病的发生发展密切相关。本文旨在描述ALK1信号传导的机制,讨论其在心血管内稳态中的作用及其与心血管疾病发生、发展间的联系,从而为心血管疾病的防治疗提供潜在的新靶点和新策略。(本文来源于《中南医学科学杂志》期刊2018年04期）
林比霖,徐方云,黄永红[5]（2018）在《活化素受体样激酶1及其在血管生成中的作用》一文中研究指出血管生成是指新的血管从已存在的毛细血管网生成的过程,受血管生成促进因子和抑制因子的严格调控。通常,血管生成发生于胚胎和出生后早期血管的发育过程中,除女性生理周期和伤口愈合等过程外,在成年阶段血管生成已处于静息状态。但是,在发生某些疾病如肿瘤、糖尿病视网膜病变、心血管疾病及类风湿性关节炎[1-2]时,血管生成过程被异常激活。活化素受体样激酶1(activin receptor-like(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2018年06期）
孟祥珍,韩月肖,张方琪,李志奎[6]（2015）在《联合应用白介素-4突变体及白介素-5可溶性受体对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液及血清中转化生长因子-β1、活化素-A水平的影响》一文中研究指出目的探讨联合应用白介素-4突变体(IL-4MT)及白介素-5可溶性受体(s IL-5Rα)对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、活化素-A(Act-A)水平的影响。方法50只雌性BALB/c小鼠被随机分为对照组、哮喘组、IL-4MT治疗组、s IL-5Rα治疗组、联合IL-4MT及s IL-5Rα治疗组(简称联合治疗组);哮喘组和各治疗组分别给予卵蛋白(OVA)致敏和激发。其中,各治疗组(IL-4MT治疗组、s IL-5Rα治疗组、联合治疗组)分别于激发前30 min腹腔注射IL-4MT 100μg、s IL-5Rα100μg及IL-4MT、s IL-5Rα各100μg进行干预,对照组和哮喘组给予生理盐水代替;末次激发后收集小鼠BALF、血清;用ELISA法比较各组(BALF)及血清中TGF-β1、Act-A的水平变化。结果与对照组比较,哮喘组小鼠BALF及血清中的TGF-β1、Act-A水平显着升高(P<0.01);与哮喘组比较,各治疗组BALF及血清中TGF-β1、Act-A水平明显下降(P<0.01);与单独治疗组相比,联合治疗组BALF及血清中的TGF-β1、Act-A水平下降地更明显(P<0.05)。结论联合应用IL-4MT及s IL-5Rα可明显降低哮喘小鼠BALF及血清中TGF-β1、Act-A水平,在减轻哮喘小鼠气道重塑方面可能发挥了重要作用。(本文来源于《中华肺部疾病杂志(电子版)》期刊2015年03期）
夏希纯[7]（2015）在《活化素C在核心蛋白聚糖缺失诱发的结直肠癌发生发展中的作用研究》一文中研究指出结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病是多因素、多基因、多分子信号参与的渐进性累积过程。《2014年世界癌症报告》中指出,在所有癌症中结直肠癌的全球病发率位居第叁。在我国,结直肠癌的发病率逐呈年增高趋势并且已和世界平均水平相当,而治愈率未见明显改善。目前认为靶向蛋白分子药物的开发是治疗结直肠癌的新研究方向。核心蛋白聚糖是富含亮氨酸的小分子蛋白聚糖家族成员之一,作为抑癌因子与多种生长因子、细胞因子或细胞膜受体相互作用进而抑制肿瘤细胞生长、增殖,肿瘤血管生成,肿瘤迁徙和转移以及促进肿瘤细胞凋亡和自噬。机制研究表明,DCN与EGFR或ErbB2/4结合抑制肿瘤增殖和促进肿瘤细胞凋亡;与TGF-β结合抑制肿瘤血管生成;与Met受体结合或与E-cadherin结合抑制肿瘤细胞增殖和转移;与VEGFR2结合诱导肿瘤细胞自噬。由此可见,DCN的抗肿瘤作用是通过多信号通路实现的,对抑制肿瘤的发生发展具有重大作用。活化素C是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一,由于发现较晚,对其生物学活性研究也相对较少且主要集中于肝脏。认为活化素C具有促进肝脏细胞DNA合成和肝再生的功能。近些年,活化素C在其它组织中的生物学功能相继被报道,然而在结直肠癌中对其生物学活性的研究未见报道。本实验组的早期研究数据表明,DCN缺失小鼠易形成自发性肠道肿瘤,而体外转染DCN表达质粒显着抑制结直肠癌细胞的增殖和转移。本研究作为一项延续性研究,进一步探究DCN抑制结直肠癌发生发展的新机制。基于活化素C介导的Activins/Smad信号通路和TGF-β1介导的TGF-β信号通路在结直肠癌细胞中都为失活状态以及DCN直接结合TGF-β1抑制其促进结直肠癌细胞的增殖和血管生成的理论依据,我们展开对DCN与活化素C的调控关系研究。分别在体内体外探讨DCN缺失和转染DCN表达质粒对活化素C及相关蛋白的影响;以及在体外分别探讨活化素C在结直肠癌中的生物学活性及可能机制、DCN是否及如何影响活化素C介导的信号转导通路相关蛋白及二者之间的分子交互作用。结果表明:(1)DCN负调节活化素C首先,采用DCN缺失小鼠模型探究DCN缺失对活化素C及相关蛋白的影响。Western blot检测发现,DCN缺失小鼠的肠上皮细胞中活化素C蛋白水平显着升高。进一步采用转染DCN表达质粒的方法在HCT116和HEK293细胞中研究DCN对活化素C表达及蛋白稳定性的影响,发现在这两种细胞中转染DCN表达质粒均可明显抑制活化素C的表达并且促进活化素C蛋白的降解。因此,结合体内外数据证明DCN负调节活化素C。(2)活化素C激活MAPK上调AP-1促进HCT116细胞增殖、迁徙和转移我们采用重组活化素C蛋白处理、活化素C表达质粒转染以及RNA干扰叁个层面来探究活化素C对HCT116细胞的生物学活性及可能机制。MTT联合细胞周期检测、划痕和细胞小室实验证明重组活化素C和转染活化素C表达质粒均能上调CDK4和Cyclin D1,促进划痕愈合和细胞转移,而RNA干扰活化素C得到相反结果,揭示活化素C促进HCT116细胞增殖、迁徙和转移。在机制研究中发现,活化素C并非通过Activins/Smad信号通路,而是通过ERK/c-Fos和JNK/c-Jun信号通路上调AP-1,继而促进HCT116细胞增殖、迁徙和转移,并且活化素C上调AP-1与caveolin-1相关。(3)部分活化素C参与DCN负向调控ERK/c-Fos和JNK/c-Jun信号通路首先,采用转染DCN表达质粒的方法研究DCN对活化素C介导的信号通路的影响。Western blot检测发现,在HCT116和HEK293细胞中转染DCN表达质粒明显降低ERK磷酸化水平并且下调AP-1蛋白表达,表明DCN负向调控ERK/c-Fos和JNK/c-Jun信号通路。此外,采用转染DCN表达质粒结合RNA干扰活化素C的方法进一步研究DCN抑制活化素C与负向调控ERK/c-Fos和JNK/c-Jun信号通路的关系,发现RNA干扰活化素C后,DCN仍然下调AP-1蛋白的表达,同时caveolin-1大幅度增加,表明DCN负向调控ERK/c-Fos和JNK/c-Jun信号通路是通过部分抑制活化素C实现的,并且与caveolin-1相关。(4)DCN与活化素C相互结合采用免疫共沉淀的方法,研究DCN与活化素C的分子交互作用,结果表明DCN与活化素C相互结合。进一步采用荧光共定位的方法研究这种结合在细胞中的发生部位。我们将HCT116细胞共转染红色荧光蛋白标记的DCN表达质粒与绿色荧光蛋白标记的活化素C表达质粒,激光共聚焦显微镜分析表明,DCN与活化素C的相互结合发生于HCT116细胞的外基质中。综上所述,本研究首次发现了活化素C在结直肠癌中的生物学活性及机制,认为活化素C通过激活ERK/c-Fos和JNK/c-Jun信号通路上调AP-1,促进人结直肠癌HCT116细胞的增殖、迁徙和转移。此外,DCN结合于活化素C促进活化素C蛋白降解,通过部分抑制活化素C负向调控ERK/c-Fos和JNK/c-Jun信号通路并且与caveolin-1相关。因此,DCN抑制结直肠癌细胞增殖、迁徙和转移与活化素C相关。(本文来源于《辽宁大学》期刊2015-05-01）
刘丹荣,程华丽[8]（2015）在《神经细胞活化素治疗121例急性脑血管病临床分析》一文中研究指出目的:探讨神经细胞活化素急性脑血管病的可行性,从而为临床提供可靠的数据。方法:回顾性分析我院自2013年1月至2014年5月间收治的242名急性脑血管病的临床资料,随机分为实验组和对照组2组,每组121例患者,其中,对实验组的患者在传统常规治疗的基础上,增加了采用神经细胞活化素治疗的方法,对照组患者仅采用降低血压,降低颅内压,抗水中,维持水电解质平衡等传统常规治疗的方法,通过对比观察两组患者在治疗总有效率,治疗后神经功能缺损平均减少的积分数进行对比实验,做出统计学分析。结果:实验组中的患者治疗的总有效率为81.0%,对照组患者治疗的总有效率为66.2%,实验组神经功能缺损平均减少(12.85±5.21)分,对照组神经功能缺损平均减少(9.06±3.49)分,与对照组相比,实验组的疗效明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在临床中使用神经细胞活化素治疗急性脑血管病可以使得患(本文来源于《中国转化医学和整合医学学术交流会（上海站）论文汇编》期刊2015-02-01）
余莉,许峰[9]（2014）在《体外循环期间活化素A变化的意义及与神经元特异性烯醇化酶的关系》一文中研究指出目的观察体外循环手术期间血浆活化素A(Activin A ACTA)的浓度变化及其与神经元特异性烯醇化酶(Neuronspecific Enolase,NSE)的关系。方法选择20例先天性心脏病行体外循环手术的患儿。分别在转机前、体外循环停止后即刻、体外循环停止后1 2h及体外循环停止后24h,总共4次经静脉置管采集血液标本。分别用酶免法及放免法测定血浆活化素A浓度及神经元特异性烯醇化酶浓度。(本文来源于《中华医学会急诊医学分会第17次全国急诊医学学术年会论文集》期刊2014-08-07）
刘琳[10]（2014）在《活化素受体样激酶7与糖尿病心肌病关系的实验研究》一文中研究指出背景糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy, DCM)是一种独立于糖尿病大血管并发症的心肌结构和功能改变的疾病,与糖尿病特有的代谢异常相关,以左室舒张和/或收缩功能障碍为主要的临床表现,是糖尿病患者高心力衰竭发生率和高死亡率的主要原因。糖尿病心肌病的主要病理变化包括细胞肥大、凋亡、变性、坏死和心肌间质的纤维化。心肌细胞凋亡是DCM发生发展的重要病理生理机制,心肌细胞凋亡在DCM进程中的作用为：1.减少心肌细胞数量,使心肌收缩单位逐步减少,导致心脏收缩功能障碍；2.由于心肌收缩单位减少,促进心肌细胞代偿性增生,引起心室肥厚及心脏重构,导致心脏舒张功能不全。Smad2/3在将TGF-p信号从细胞表面受体传导至细胞核的过程中起到关键性作用,是调控细胞增殖分化非常重要的信号分子。研究表明,多种刺激如活化蛋白-1、血管紧张素和一氧化氮均可激活Smad2/3,活化的Smad2/3与Smad4结合后形成异源寡聚物转移到细胞核内,激活凋亡相关基因如caspase-3/6/9等的转录,从而引起细胞凋亡,然而Smad2/3在高糖诱导的心肌细胞凋亡中的作用仍不清楚。ALK7是Ⅰ型活化素(Activin)受体家族新成员,它是有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的细胞膜孤儿受体,由跨膜区、丝氨酸/苏氨酸激酶区和两者之间的GS区及胞外配体结合区组成,目前已知配体有和生长/分化因子3、Nodal、Activin AB和Activin B。在信号转导过程中上述配体首先和Ⅱ型Activin受体结合,而后ALK7和它们形成复合物,其GS区被Ⅱ型Activin受体磷酸化,激酶区则使受体激活型Smad2/3磷酸化,进而通过Smads信号通路参与细胞粘附、增殖、分化、凋亡等的调控。ALK7在人胰脏、脑组织、脂肪组织、肝脏、肠道和心脏中均有表达,现有研究证实,ALK7介导下游促凋亡信号通路参与人卵巢上皮细胞、肝癌细胞、胰岛细胞的增殖凋亡的调控,但ALK7在心肌细胞凋亡中的作用仍不清楚。结合上述研究,本课题将探讨ALK7-Smad2/3信号转导通路在高糖诱导的心肌细胞凋亡中的作用。目的1.探讨高糖对心肌细胞凋亡的影响；2.探讨Smad2/3在高糖诱导的心肌细胞凋亡中的作用；3.探讨高糖对心肌细胞ALK7表达水平的影响；4.探讨ALK7在高糖诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其信号转导机制。材料方法本研究以H9c2大鼠心肌细胞系及原代培养的新生大鼠心肌细胞为研究对象,应用实时定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)、蛋白免疫印迹(western blotting)、流式细胞术(flow cytometry)及细胞转染小干扰RNA(siRNA)等实验方法,分别观察：1.体外模拟糖尿病高糖状态,分为低糖组、高渗组和高糖组,分别给予葡萄糖(5.5mmol/L)、葡萄糖+甘露醇(5.5mmol/L+33mmol/L)和葡萄糖(33mmol/L)孵育H9c2细胞,检测cleaved Caspase3和Bcl2蛋白水平的表达,流式细胞术测早晚期凋亡率；2.高糖、高渗和低糖培养心肌细胞,观察ALK7mRNA.蛋白的表达水平,及Smad2/3磷酸化水平的变化；3.设计、化学合成Smad2、Smad3siRNA,采用脂质体转染大鼠H9c2心肌细胞分别抑制Smad2、Smad3的表达,观察高糖对心肌细胞凋亡的影响；4.设计、化学合成ALK7siRNA,构建质粒,采用脂质体转染大鼠H9c2心肌细胞,观察ALK7抑制后,Smad2/3磷酸化水平的变化,以及cleaved Caspase3、 Bc12蛋白水平和细胞凋亡率的变化。结果1.33mmol/L的高糖上调H9c2细胞ALK7的表达。琼脂糖凝胶电泳结果和Western blotting结果证实ALK7在H9c2细胞系及原代大鼠心肌细胞上均有表达。分别以5.5mmol/L、11mmol/L、22mmol/L、33mmol/L和38.5mmol/L的葡萄糖孵育H9c2心肌细胞24h,结果显示33mmol/L的糖浓度刺激下,ALK7的表达水平较对照组显着增加(P<0.05),因此选用33mmol/L的葡萄糖作为高糖刺激浓度；2.33mmol/L的高糖诱导H9c2细胞凋亡。分别以低糖、高渗、高糖孵育H9c2心肌细胞0h、4h、8h、12h、24h、48h,与低糖组相比,高糖刺激24h,心肌细胞cleaved Caspase3表达增加至1.84倍(P<0.001),Bcl2表达降低至51%(P<0.001),高糖刺激48h,心肌细胞cleaved Caspase3表达增加至2.41倍(P<0.001),Bcl2表达降低至43%(P<0.001),高渗组无显着变化。Annexin V/PI双染流式测凋亡结果显示,高糖刺激24h,心肌细胞出现凋亡增加,以早期凋亡为主,48h出现以晚期为主的凋亡增加；3. Smad2/3参与高糖诱导的H9c2细胞凋亡。低糖、高渗、高糖分别孵育H9c2心肌细胞0h、4h、8h、12h、24h、48h,高糖刺激12h-48h,Smad2/3的磷酸化水平呈时间依赖性增高,48h达高峰,低糖组和高渗组Smad2/3的磷酸化水平无显着变化。Smad2-siRNA与Smad3-siRNA分别转染H9c2心肌细胞,高糖培养48h,与转染无意义序列组(NS组)相比,cleaved Caspase3的表达分别降低至NS组的58%和52%(P<0.05, P<0.05), Bcl2的表达增高至NS组的2.04倍和2.01倍(P<0.01,P<0.001),流式测细胞凋亡率降低至58%和55%(P<0.01,P<0.01)。实验同样探讨了高糖对原代大鼠心肌细胞Smad2/3磷酸化水平的影响,结果显示,25mmol/L的葡萄糖浓度可显着提高原代心肌细胞Smad2/3的磷酸化水平；4.高糖培养不同时间对H9c2细胞及原代大鼠心肌细胞ALK7表达水平的影响。低糖、高渗和高糖培养H9c2细胞0h、0.5h、1h、4h、8h、12h、24h、48h, RT-PCR结果显示,高糖刺激H9c2细胞1h, ALK7mRNA表达水平增加,8h达高峰,增至低糖组的2.98倍(P<0.01),后逐渐下降,但仍高于低糖组。Western blot结果显示,高糖刺激H9c2细胞12h, ALK7表达水平开始增加,24h达高峰,增至低糖组的2.06倍(P<0.001),48h和24h无显着差异。高渗组ALK7mRNA和蛋白水平无显着变化。实验同样探讨了高糖对原代大鼠心肌细胞ALK7表达水平的影响,结果显示,25mmol/L的葡萄糖浓度可显着上调原代心肌细胞ALK7的表达水平；5.ALK7通过Smad2/3信号转导通路调控高糖诱导的H9c2细胞凋亡。应用ALK7-siRNA转染心肌细胞,与转染阴性对照质粒组(NS组)相比,cleaved Caspase3表达减少至76%(P<0.01),Bcl2表达增加至3.42倍(P<0.05),心肌细胞凋亡率减少至62%(P<0.01)；应用siRNA抑制ALK7表达后,Smad2/3的磷酸化水平分别降至65%和73%(P<0.01,P<0.05)。结论1.33mmol/L葡萄糖可以诱导H9c2细胞凋亡；2.Smad2/3参与高糖诱导的H9c2细胞凋亡的调控；3.高糖可以促进ALK7的表达；4.ALK7通过Smad2/3信号转导通路参与调控高糖诱导的H9c2细胞凋亡。背景糖尿病心肌病(DCM)是独立于糖尿病其他大血管并发症的心脏结构和功能改变的疾病,是糖尿病患者高病死率的主要原因。糖尿病心肌病的发病机制复杂,主要涉及：胰岛素抵抗、高血糖、氧化应激、炎症和脂质沉积等,左室舒张和收缩功能不全是DCM的主要临床表现。心肌细胞凋亡和间质纤维化是DCM心功能不全的重要病理机制,心肌细胞凋亡使心肌收缩单位逐步减少,间质纤维化则引起心室肥厚及心脏重构,两者最终导致心脏功能不全的发生。然而,目前关于DCM心肌细胞凋亡和间质纤维化的分子病理学机制仍不甚清楚。活化素受体样激酶7(ALK7)是Ⅰ型转化生长因子-β (TGF-β)受体家族的新成员,研究证实ALK7参与了多种细胞增殖、分化和凋亡的调控。近来在小鼠上的研究表明,ALK7的无意义突变可以改善脂肪蓄积以及肥胖所导致的糖耐量异常和胰岛素抵抗。胰岛素抵抗和脂质代谢紊乱是糖尿病发生的重要诱因,由此我们推测,ALK7在糖尿病的发生发展中起重要作用。我们第Ⅰ部分的实验结果证实,高糖可以上调H9c2细胞中ALK7的表达,但是ALK7在糖尿病心肌组织中的病理生理作用仍待进一步阐明。Smad2/3和Akt是ALK7重要的下游信号分子。现有研究证实,Smad2/3在血管紧张素Ⅱ和晚期糖基化终产物等纤维化因子引起的组织纤维化中起关键作用。Akt则在维持葡萄糖稳态和选择性胰岛素抵抗方面发挥重要作用,Akt活性的降低是胰岛素抵抗的潜在诱因之一。此外,ALK7-Smad2/3和ALK7-Akt信号转导通路都参与了细胞凋亡的调控。综合上述研究,我们提出如下假说：2型糖尿病上调心肌ALK7的表达,ALK7过表达引起心肌细胞凋亡和间质纤维化进而影响DCM的发生发展。在本实验中我们建立了2型糖尿病大鼠的动物模型并通过ALK7-siRNA特异性抑制大鼠体内ALK7基因的表达来探讨ALK7在DCM中的作用,实验结果将为DCM的治疗提供新的潜在靶点。目的1.观察ALK7基因沉默对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及胰岛素敏感度的影响；2.观察ALK7基因沉默对2型糖尿病大鼠心脏整体结构和功能的影响；3.观察ALK7基因沉默对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡和间质纤维化的影响；4.观察ALK7基因沉默对下游信号分子Smad2/3和Akt磷酸化水平的影响。材料方法1.2型糖尿病大鼠动物模型的建立60只体重120g±20g左右(约5周龄)的雄性SD大鼠,适应性喂养1周行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和腹腔胰岛素耐量试验(IPITT)后随机分为4组：对照组(Control)、糖尿病组(DM)、糖尿病+ALK7-siRNA腺病毒干预组(ALK7-siRNA组)和糖尿病+腺病毒空载体组(Vehicle)。 Control组大鼠喂以基础饲料,剩余叁组大鼠喂以高糖高脂高热量饲料。4周后重复IPITT和IPGTT,对于高脂喂养大鼠出现胰岛素抵抗者一次性给予腹腔注射STZ30mg/kg。STZ注射12周后,ALK7-siRNA组和Vehicle组大鼠经颈静脉分别给与2.5×1010PFU的ALK7-siRNA腺病毒或空载体,2周后重复腺病毒或空载体的注射。距第1次腺病毒注射4周后处死大鼠,留取标本。2.腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和腹腔胰岛素耐量试验(IPITT)IPGTT:大鼠禁食12h,测定空腹尾静脉血糖浓度后,给予一次性腹腔注射葡萄糖1g/kg体重,分别于葡萄糖注射15min、30min、60min和120min时从尾静脉取血测定血糖浓度,并通过个时间点血糖值计算血糖曲线下面积(AUC)。IPITT:大鼠禁食4h,测定尾静脉血糖浓度后,给予一次性腹腔注射胰岛素1unit/kg体重,血糖测定及AUC计算方法同IPGTT。3.血生化检测分离血清,应用Bayer1650血生化分析仪检测血清血糖水平(FBG)、总胆固醇水平(TC)和甘油叁酯(TG)水平；应用酶联免疫法测定空腹胰岛素水平(FINS)。4.血压和心率的监测利用大鼠尾动脉血压测量仪监测大鼠尾动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MBP)和心率,每只大鼠测量3次,取3次平均值。5.血流动力学监测将充有肝素钠生理盐水的塑料导管插入大鼠右侧颈总动脉并沿主动脉插入左室(主动脉瓣开放时插入),记录左室舒张末期压力(LVEDP)和左室收缩压(LVSP)。6.腺病毒注射STZ注射12周后(第17周),经颈静脉分别给与ALK7-siRNA组和Vehicle组大鼠2.5×1010PFU的ALK7-siRNA腺病毒或空载体,2周后重复腺病毒或空载体的注射。7.心肌组织的留取制作5μm厚的组织石蜡切片以备组织病理学染色用；留取左室心肌组织冻入-80℃冰箱,以备RT-PCR及Western blotting用。8.组织和形态学分析石蜡切片H&E染色,观察左室大体形态；石蜡切片经Masson叁色染色和天狼猩红染色,观察左室管周纤维化和间质纤维化情况,显微镜下拍照后应用Image-Pro Plus5.0软件对图片进行分析。9.心肌细胞凋亡的检测利用TUNEL法检测左室心肌细胞的凋亡率,凋亡率%=每个视野观察到的阳性细胞数目/该视野的细胞总数。10.免疫组织化学染色组织石蜡切片滴加兔抗大鼠Collagen Ⅱ和Collagen Ⅲ一抗,4℃孵育过夜,滴加生物素标记的山羊抗兔二抗,DAB显色,苏木素复染细胞核,显微镜下拍照后应用Image-Pro Plus5.0软件对图片进行分析。11.实时定量RT-PCR实验用Trizol提取大鼠心肌组织的总RNA,经逆转录和PCR扩增后,采用β-actin作为内参,计算目的基因的相对表达,起始模板的相对浓度＝2-△△CT(注：△ACT=(CT处理组目的基因-CT对照组目的基因)-(CT处理组内参基因-CT对照组内参基因)。12. Western blotting实验每孔加蛋白样品15μg,10%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳直至蓝色染料至分离胶底部；将待转凝胶切下,200mA电转至PVDF膜上。将PVDF膜封闭后浸入含一抗反应液的平皿中,4℃振荡孵育过夜,洗膜后浸入HRP结合的二抗,室温下孵育1-2h。 ECL发光,应用Photoshop CS4图像分析系统对Western Blotting图片进行分析,各组样品的目的蛋白条带与β-actin条带的相对光密度比值作为各目的蛋白的相对含量。13.统计分析计量资料以均数±标准差表示,两组间均数差异比较采用独立样本t检验,多组间均数差异比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。所有分析均采用SPSS17.0统计软件包进行,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.ALK7基因沉默改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗。高脂喂养大鼠4周,行IPGTT及IPITT试验,结果显示高脂喂养4周大鼠各个时间点的血糖浓度及血糖曲线下面积(AUC)均较基线水平显着升高；实验末IPGTT及IPITT试验显示,与空载体组比较,ALK7-siRNA组大鼠各时间点的血糖水平显着降低(P<0.01, P<0.01), ALK7-siRNA组大鼠的胰岛素敏感指数(ISI)较空载体组显着增加(P<0.001)。2.ALK7基因沉默改善2型糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱。实验结果显示：DM组大鼠的总胆固醇(TC)、甘油叁酯(TG)和空腹血糖(FBG)水平较正常组明显增高,TC和TG在高脂喂养4周后(4周时)开始显着升高,而FBG在STZ腹腔注射后(5周时)开始显着升高,上述糖尿病组大鼠的糖脂代谢异常一直持续到实验结束。抑制ALK7的表达后,与空载体组比较,ALK7-siRNA组大鼠的TC、TG和FBG的水平显着降低(P<0.001,P<0.01,P<0.001)。3.ALK7基因沉默改善2型糖尿病大鼠的心功能不全。DM组大鼠左室舒张及收缩功能较正常组大鼠明显降低,表现为心导管测左室舒张末期压力(LVEDP)增高(7.14±0.90vs.23.43±1.81mmHg,P<0.001)而收缩末期压力(LVSP)降低(109.29±9.78vs.88±10.6mmHg, P<0.01).抑制ALK7的表达后,ALK7-siRNA组大鼠的LVEDP较空载体组显着降低(12.43±1.62vs.22.85±2.91mmHg, P<0.001),而LVSP的改变并无统计学意义。4.ALK7基因沉默改善2型糖尿病大鼠的左室重构。DM组大鼠的心脏重量/体重(HW/BW)较正常组增加22%,抑制ALK7的表达后,ALK7-siRNA组大鼠的HW/BW较空载体组显着降低(2.82±0.33vs.3.19±0.27mg/g, P<0.05).DM组大鼠的心脏明显扩大,左室室壁增厚,镜下观察,心肌细胞肥大,扭曲,排列紊乱,间隙增大,断裂细胞增加。抑制ALK7的表达后,与空载体组比较,ALK7-siRNA组大鼠的心腔变小,室壁厚度变薄,心肌细胞的排列较整齐,断裂细胞明显减少,心肌细胞的面积也显着减小(0.35±0.03vs.0.50±0.04mm2,P<0.001)。5.ALK7基因沉默抑制2型糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡。DM组大鼠的心肌细胞凋亡率(TUNEL法测)较正常大鼠明显增加(P<0.001), cleaved Caspase3和Bax/Bcl2的表达也明显升高(P<0.001,P<0.001)；抑制ALK7的表达后,ALK7-siRNA组大鼠的心肌细胞凋亡率及cleaved Caspase3和Bax/Bc12的表达均较空载体组显着降低(P<0.001,P<0.001,P<0.001)。6.ALK7基因沉默改善2型糖尿病大鼠的心肌纤维化。Masson及天狼猩红染色显示：与正常组比较,DM组大鼠的心肌间质及管周的胶原沉积增加,胶原纤维排列紊乱,胶原容积分数(CVF%)和血管周围胶原面积/管腔面积(PVCA/LA)均有明显增加(P<0.001,P<0.001)。抑制ALK7的表达后,大鼠的心肌间质及管周的胶原沉积减少,胶原纤维排列较为有序,CVF%和PVCA/LA均有明显降低(P<0.01,P<0.001)。免疫组织化学染色结果显示：DM组大鼠的胶原Ⅰ/Ⅲ较正常组大鼠显着升高(P<0.001),而ALK7-siRNA组大鼠胶原Ⅰ/Ⅲ较空载体组显着降低(P<0.01)。 Western blotting结果同样显示：ALK7-siRNA组大鼠的胶原Ⅰ、胶原Ⅲ和胶原Ⅰ/Ⅲ的水平较空载体组降低(P<0.001,P<0.01,P<0.01)。7.ALK7基因沉默增加Akt的磷酸化,抑制Smad2/3的磷酸化。DM组大鼠心肌组织的磷酸化Smad2(p-Smad2)和磷酸化Smad3(p-Smad3)的表达较正常组增加(P<0.001,P<0.001),而磷酸化Akt (p-Akt)的表达则较正常组明显降低(P<0.001); ALK7基因沉默则显着增加了p-Akt的水平,p-Smad2和p-Smad3的水平则分别较空载体组降低62%和37%。结论抑制ALK7的表达可以改善2型糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡、间质纤维化和胰岛素抵抗从而减缓DCM的发生和发展。本研究为DCM的治疗提供新的潜在靶点。(本文来源于《山东大学》期刊2014-05-10）
活化素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究旨在初步探讨活化素A在原发性干燥综合征(primary Sj?gren's syndrome, pSS)患者唇腺组织及外周血中的表达情况。选择上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔黏膜科收治的60例pSS患者和30例对照者作为研究对象,采用ELISA检测血清活化素A的表达情况;采用实时荧光定量PCR分析PBMC中活化素A及相关受体mRNA的表达情况;采用免疫组织化学染色法分析唇腺组织样本中活化素A的表达情况。结果显示pSS患者血清及唇腺组织中活化素A的水平明显高于对照者(P <0.05);pSS患者PBMC活化素AβA亚基mRNA表达水平显着升高(P <0.01),但活化素Ⅰ型受体(activin receptorⅠ, ACVRⅠ)A和活化素Ⅱ型受体(activin receptorⅡ, ACVRⅡ)A的mRNA表达水平明显低于对照者(P <0.05),而ACVRⅠB、ACVRⅡB及其信号通路相关分子Smad2和Smad3的mRNA表达水平与对照者差异无统计学意义(P> 0.05)。研究结果表明活化素A在pSS患者组织和外周血中表达异常,可能参与了pSS的发生、发展。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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