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猪伪狂犬病毒环介导等温扩增技术检测方法的建立

2020-12-02阅读(758)

猪伪狂犬病毒环介导等温扩增技术检测方法的建立

论文摘要

为建立通用性猪伪狂犬病毒（PRV）环介导等温扩增快速检测方法,本实验根据PRV gB基因序列的保守区段设计四套特异性引物,基于环介导等温扩增技术引入环引物,筛选出特异性引物PRV-1,对其特异性、灵敏度进行评估,进行临床样本和人工干扰样本检测试验,并与实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,qPCR）检测结果进行比较分析。结果表明该检测方法能够特异性的检出PRV的存在,具有良好的特异性;灵敏度检测下限为10fg/μL;且本文建立的检测方法其结果与临床样品和人工干扰样本qPCR检测结果具有高度的一致性。因此,本实验建立的PRV环介导等温扩增检测方法特异性强、灵敏度高,具有较好的稳定性,并且操作安全、简便、高效,该方法的建立为猪伪狂犬病的快速诊断和基层检疫提供了新的选择。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •     1.1.1 实验材料
  •     1.1.2 主要试剂盒耗材
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 引物设计
  •     1.3.2 病毒DNA的提取
  •     1.3.3 含伪狂犬病毒靶基因的阳性质粒的构建
  •     1.3.4 PRV LAMP检测方法反应体系的建立
  •     1.3.5 PRV LAMP特异性实验
  •     1.3.6 PRV LAMP灵敏度实验
  •     1.3.7 临床样品检测
  •     1.3.8 人工干扰实验
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 PRV引物筛选和反应体系的建立
  •   2.2 恒温检测PRV的特异性
  •   2.3 恒温检测PRV的灵敏度
  •   2.4 临床样品检测
  •   2.5 人工干扰样本检测
  • 3 总结

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈珍金,曹炜伟,石磊,叶蕾

    关键词: 猪伪狂犬病毒,基因,环介导等温扩增技术

    来源: 现代食品科技 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 暨南大学食品安全与营养研究院

    基金: 广东省自然科学基金项目(2017A030310175),国家重点研发计划畜禽养殖专项(2016YFD0500600)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.9.036

    页码: 277-282+290

    总页数: 7

    文件大小: 1942K

    下载量: 178

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