通过优化gRNA设计提高CRISPR/Cas9系统中基因编辑效率的方法

论文摘要

CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于动物、植物、真菌、细菌的新一代基因定点编辑技术,如何提高g RNA的编辑效率是该技术的关键点也是许多研究者关注的焦点。本研究利用CRISPR/Cas9技术对番茄miR167a前体序列进行基因编辑,根据番茄miR167a前体序列在线设计候选g RNA,同时结合体外编辑检测的方法筛选出能够在体外成功编辑的g RNA-G1,把其连接到含有荧光标记的pP1C.1C表达载体,转化番茄子叶,产生愈伤组织数116个,得到5个含有表达载体的材料,经测序发现,其中3个材料发生了编辑。结果表明,通过体外检测和在线软件设计相结合的方法来快速检测g RNA的编辑效率,能筛选出最优的g RNA用于载体的构建,与未采用体外编辑检测来设计g RNA的方法相比,显著提高了CRISPR/Cas9的编辑效率。本研究通过优化g RNA,创新了一种高效利用CRISPR/Cas9进行基因编辑的方法。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李秋月,王小柯,张亚飞,孙珍珠,王旭,江东

关键词: 设计,体外检测,基因编辑

来源: 分子植物育种 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 西南大学柑桔研究所

基金: 重庆市科技创新专项(cstc2016shmsztzx0010),江西地方特色果树种质资源创新与利用专项(S2016NYZPF-0208)共同资助

分类号: Q78

DOI: 10.13271/j.mpb.017.003274

页码: 3274-3282

总页数: 9

文件大小: 2654K

下载量: 691

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标签：设计论文;  体外检测论文;  基因编辑论文;