导读:本文包含了绵羊肺腺瘤病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:腺瘤,绵羊,病毒,蛋白,基因,转染,逆转录。
绵羊肺腺瘤病毒论文文献综述
王晶晶,路珍珍,杨涵羽璐,盛金良,万鹏程[1]（2018）在《NK-lysin在人工感染绵羊肺腺瘤病毒肺组织的表达及其在不同品种绵羊的多态性分析》一文中研究指出引言/目的 NK-lysin是由自然杀伤性细胞(NK细胞)和T淋巴细胞表达的一种具有抗微生物和抗肿瘤作用的活性蛋白,是机体天然免疫的重要成分。绵羊肺腺瘤病(OPA)是由世界动物卫生组织确定的B类传染病之一,是一种慢性、进行性、接触性传染的肺脏肿瘤性疾病。本研究以新疆两个绵羊品种(哈萨克羊、萨福克羊)为研究对象,通过测序分析NK-Lysin在品种(本文来源于《2018年全国养羊生产与学术研讨会论文集》期刊2018-08-16）
徐金霞,宁志军,李莉,张渝菡,黄旭[2]（2018）在《NK-lysin在人工感染绵羊肺腺瘤病毒肺组织的表达及其在不同品种绵羊的多态性分析》一文中研究指出通过分析新疆不同品种绵羊NK-lysin基因多态性,探讨新疆不同品种绵羊NK-lysin基因多态性与抗病力的关系。构建了对建立的绵羊肺腺瘤病人工感染模型肺组织提取总RNA,经实时荧光定量PCR方法检测发病和健康绵羊肺组织中NK-lysin基因的表达量,对比不同病理条件下绵羊NK-lysin基因的表达差异。结果表明:萨福克羊和哈萨克羊NK-lysin基因存在多态性以及突变。通过荧光定量RT-PCR检测,感染绵羊肺腺瘤病肺组织NK-lysin的表达水平明显低于健康绵羊,说明Nk-Lysin参与绵羊肺腺瘤的病理形成,为绵羊抗肿瘤分子机制研究提供理论依据。(本文来源于《现代牧业》期刊2018年02期）
徐先达[3]（2018）在《绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因原核表达质粒构建及表达》一文中研究指出绵羊肺腺瘤病(Ovine Pulmonary Adenocarc-inoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的一种慢性、渐进式、传染性羊肿瘤疾病。这种普遍的羊肺肿瘤疾病已在世界上许多国家出现,几乎所有养羊业发达的国家,包括我国黑龙江、内蒙古、新疆、山东都有该病的报道,严重影响世界范围内养羊业的发展~([74])。因此确诊该病对于控制和了解其分布具有重要的科学意义。由于OPA病羊体内检测不到循环抗体以及无法在体外建立病原的培养体系~([74]),常规的免疫学方法、病毒分离鉴定无法诊断。目前,实验室确诊该病主要利用PCR和免疫组织化学方法。本实验为实现免疫组织化学方法诊断该病进行了基础研究。首先根据Gen Bank上发表的绵羊肺腺瘤囊膜基因序列(登录号JQ837489.1)设计引物,对p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒(ex JSRV-env与真核表达载体p EGFP-C1的重组质粒)进行PCR、酶切、测序比对,确定该重组质粒含有完整ex JSRV-env基因;然后以p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒为模板扩增ex JSRV-env基因,构建绵羊肺腺瘤囊膜基因原核表达重组质粒命名为p ET-32a/ex JSRV-env,并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定;将p ET-32a/ex JSRV-env重组质粒转化到E.coli Transetta(DE3),用IPTG诱导表达,并对IPTG诱导融合蛋白表达的浓度进行了优化,SDS-PAGE分析表达蛋白的可溶性情况;最后用Western Blot对融合蛋白进行鉴定。结果表明:双酶切p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒出现约5500bp和2000bp大小的条带,p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明该质粒含有ex JSRV-env基因;双酶切p ET-32a/ex JSRV-env质粒出现约5900bp和1862bp大小的条带,p ET-32a/ex JSRV-env质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明成功构建了p ET-32a/ex JSRV-env原核表达质粒;在IPTG诱导下p ET-32a/ex JSRV-env重组质粒在E.coli Transetta(DE3)中表达出89k Da大小蛋白,最优IPTG诱导浓度为0.5mmol/L;SDS-PAGE电泳显示融合蛋白主要出现在菌液破碎的沉淀中,以包涵体的形式表达;Western Blot鉴定证明IPTG诱导表达蛋白。该蛋白可以用于制备JSRV Env多克隆抗体,为实现免疫组织化学方法诊断OPA奠定了实验基础。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
赵娟,徐斯日古楞,李慧萍,刘淑英[4]（2018）在《绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起绵羊绒毛膜滋养层细胞的恶性转化》一文中研究指出为了明确绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)的致瘤作用,将重组真核表达质粒pEGFP-C1/exJSRVenv和pEGFP-C1/enJSRV-env分别转染到永生化绵羊绒毛膜滋养层细胞(STCs)中,筛选最佳转染条件并利用软琼脂集落形成试验检测是否引起细胞的恶性转化;用平板克隆试验检测囊膜蛋白的表达对细胞增殖的影响。结果显示:在STCs中转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒后细胞在软琼脂中生长并产生集落,同时表现细胞接触抑制性消失;转染pEGFP-C1/enJSRV-env质粒的STCs则表现为不能在软琼脂中产生集落;平板克隆试验结果经SPSS软件分析,转染pEGFP-C1/exJSRV-env的绵羊绒毛膜滋养层细胞的克隆形成率显着高于转染pEGFP-C1/enJSRV-env细胞、pEGFP-C1空载体的细胞以及未转染的细胞(P<0.01)。exJSRV-Env的表达可以诱导STCs发生恶性转化以及细胞增殖。本试验可以为进一步探讨绵羊肺腺瘤逆转录病毒囊膜蛋白的功能提供理论依据,并为研究绵羊肺腺瘤病的致瘤机制提供新思路。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年05期）
吴丹丹,徐斯日古楞,李慧萍,鲁凤霞,刘淑英[5]（2018）在《蒙古绵羊内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因组序列测定与囊膜蛋白的表达分析》一文中研究指出为了克隆内源性绵羊肺腺瘤病毒(en JSRV)全基因组序列,针对env基因分析其结构并构建原核表达质粒,并诱导囊膜蛋白表达。根据Gen Bank中提供的en JSRV DNA序列(AF152615)设计引物,采用PCR方法进行序列扩增并克隆,并对克隆结果进行测序和生物信息学分析。然后将添加了Bam HⅠ和HindⅢ酶切位点的env基因片段克隆至p ET-32a载体构建表达质粒,并将质粒转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中诱导囊膜蛋白表达,最后利用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测、鉴定囊膜蛋白。结果显示,en JSRV序列长7 382 bp,其中env基因片段长1 836 bp,en JSRV与en JSRV-23的同源性为97.3%。PSORTⅡ及DNAStar等软件预测分析en JSRV囊膜蛋白主要定位于细胞质、线粒体内膜等位置,且存在多个抗原表位。在37℃条件下,0.5 mmol/L IPTG诱导转入p ET32-Env的E.coli BL21(DE3),8 h后可获得分子质量约为89 ku的以包涵体形式存在的囊膜蛋白。本试验测定了en JSRV全基因序列,并成功构建了表达囊膜蛋白的p ET32a-Env载体,为今后制备en JSRV-Env抗体奠定了试验基础,同时为囊膜蛋白生物学功能的深入探讨提供了理论参考。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2018年07期）
孙晓林[6]（2017）在《外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析》一文中研究指出绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)为β逆转录病毒,属于Retroviridae家族和Othoretrovirinae亚家族。JSRV是绵羊肺腺瘤病(OPA)的病原,OPA是一种传染性的绵羊肺癌。JSRV囊膜蛋白(Envelope,Env)主要激活细胞中的PI3K/Akt和MAPK信号通路。研究表明,细胞自噬在很多种类型的癌症中均受到抑制。细胞的自噬活性往往和肿瘤的恶性发展程度相反。但是仍没有关于自噬形成过程与OPA肿瘤的发展过程,以及JSRV Env诱导细胞转化的过程之间关联的研究。自噬在JSRV Env转化的细胞中是怎样受到信号通路调控的,以及激活的信号通路是否调控细胞自噬,均值得我们深入探讨。本研究检测了 Akt/mTOR信号通路和MAPK信号通路在自然感染OPA病肺组织、JSRV Env转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的激活情况。接着检测了自噬因子Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ在自然感染OPA肺组织、JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达水平,并进一步研究了 Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ是如何受到信号通路调控的,为探索JSRV-Env诱导转化细胞的致病机理奠定了研究基础。1.采集自然感染OPA绵羊病肺组织和作为阴性对照的健康绵羊肺组织,4%多聚甲醛固定的肺组织采用免疫组化法检测EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在OPA肺组织中阳性表达的定位情况,结果表明,OPA病肺组织中EGFR、p-Akt、p-mTOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK蛋白在腺瘤灶中大量表达,均定位于肿瘤细胞的细胞质和细胞核。-80 ℃保存的肺组织,提取总蛋白后采用Western blot法检测EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在OPA病肺组织中的激活情况,结果表明,EGFR、p-Akt、p-mTOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK 在 OPA 病肺组织中的磷酸化水平极显着高于健康肺组织。2.应用荧光定量qPCR的方法从采集的自然感染OPA病肺组织和作为阴性对照的健康肺组织的总RNA中扩增自噬因子Beclin-1和LC3的编码序列,分析Beclin-1和LC3在OPA病肺组织和健康绵羊肺组织中基因表达的差异,结果表明,Beclin-1和LC3在OPA病肺组织中的基因表达极显着低于健康肺组织中的表达。采用免疫组化法检测Beclin-1和LC3在OPA病肺组织中的阳性表达定位,结果表明,Beclin-1和LC3主要表达定位于OPA病肺组织的肿瘤细胞以及健康肺组织的肺泡上皮细胞和间质细胞中。采用Western blot法检测Beclin-1和LC3在OPA病肺组织和健康肺组织中蛋白表达的差异,结果表明,Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ在OPA肺组织中的蛋白表达均极显着低于健康肺组织中的表达。3.将本实验室保存的真核表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env瞬时转染NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞,分组实验为500 ng的重组表达质粒分别添加浓度梯度一为2μL、3μL、4μL、5μL,浓度梯度二为4μL、6μL、8μL、10μL的LTX,转染48 h后通过RT-PCR法和Western blot法检测最佳转染效率,结果表明,500ng的真核表达质粒中加入4 μL LTX为最佳转染浓度。4.应用Western blot法检测EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在JSRV Env转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的激活情况,结果表明,EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中均有不同程度的激活。5.应用qPCR法和Western blot法检测Beclin-1和LC3在JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达情况,结果表明,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ在JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞中的表达均极显着低于对照组细胞,Beclin-1在JSRVEnv诱导转化的绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达极显着低于对照组细胞,而LC3 Ⅱ/Ⅰ在JSRV Env诱导转化的绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达与对照组相比差异不显着。6.筛选mTOR抑制剂Rapamycin、ERK1/2抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125、p38抑制剂SB203580的最佳抑制条件,结果表明Rapamycin、PD98059、SP600125、SB203580均分别在浓度为20μmol/L,添加48h后抑制效果最佳。阻断MAPK信号通路和Akt/mTOR信号通路后,qPCR法检测Beclin-1和LC3的基因表达水平,Western blot法检测Beclin-1和LC3的蛋白表达水平,结果表明,JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中,阻断MAPK信号通路和Akt/mTOR信号通路后,Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达水平与对照组相比显着上调。本研究表明JSRV Env激活了靶细胞的MAPK和Akt/mTOR信号通路,并通过MAPK和Akt/mTOR信号通路的调节,抑制Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2017-06-01）
吴志强[7]（2017）在《绵羊肺腺瘤病毒斑点杂交检测方法的建立与初步应用》一文中研究指出绵羊肺腺瘤逆转录病毒(JSRV)是绵羊肺腺瘤病(OPA)的病原,为了实现早期对该病的诊断和防控而急需进行检测。为建立JSRV斑点杂交检测方法,本研究根据GenBank中已报道的外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)和内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)基因全序列,经过比对在exJSRV的囊膜基因(env)的TM区和长末端重复序列(LTR)的U3区分别设计2段特异性引物,以自然感染OPA病肺组织总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出env(164bp)、U3(176bp)片段并将其产物测序,序列分析表明这2段序列与引起该病的病原即外源性绵羊肺腺瘤病毒基因序列同源性分别为98.3%和99.4%。以纯化后的PCR产物为模板,用地高辛标记制备2段特异性探针,env、U3探针灵敏度分别为0.24ng/μL和0.21 ng/μL,以此建立了 JSRV的斑点杂交检测方法。经过优化,确定杂交液中探针的最佳浓度为50 ng/mL。通过对自然感染OPA的5份病肺组织和93份血样进行临床检测,把检测阳性的样品与本实验室建立的巢式RT-PCR检测结果进行比对,外周血样符合率达到92%,OPA病肺符合率100%。特异性试验结果表明,本研究标记的探针均不会与健康羊外周血、支原体、肺炎双球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌等病原体的基因组DNA进行斑点杂交得到阳性斑点。敏感性试验结果表明,该方法最低能够检测出1.335 ng的标准模板DNA。重复性试验表明,该方法具有良好的重复性和稳定性。这说明本试验所建立的方法,对于检测绵羊肺腺瘤病具有良好的临床应用价值,特异性好,灵敏性高。而且斑点杂交具有操作简单,快速的优点,这对绵羊肺腺瘤病的临床早期检测提供了一种方便、可靠、经济实用的诊断方法。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2017-06-01）
石晶,张宇飞,刘淑英[8]（2017）在《绵羊肺腺瘤病毒真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env引起体内和体外细胞发生的转化》一文中研究指出本试验旨在进一步全面研究绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白ENV的功能。使用本试验室已构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env转染NIH3T3细胞,并将此NIH3T3细胞接种到裸鼠体内;重组质粒经尾静脉注射到幼龄BALB/c小鼠体内。结果显示,真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env引起NIH3T3细胞发生转化,转染细胞接触抑制性消失,并形成大量的转化灶;pcDNA3.1(+)/exJSRV-env转染的NIH3T3细胞接种裸鼠使裸鼠致瘤,即引起NIH3T3细胞发生癌变。JSRVenv基因在小鼠体内表达,肝脏细胞出现大面积弥散性坏死,脾脏白髓严重坏死,心肌细胞明显颗粒样变性,肺间质细胞增生,肾小管上皮细胞轻度颗粒样变性。结果表明,绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白可以引起鼠NIH3T3细胞发生转化和癌变,使小鼠各脏器出现不同程度的病变。本试验为进一步探索JSRV ENV的致瘤机制奠定基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2017年05期）
孙晓林,刘淑英[9]（2017）在《外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR信号通路及调控Beclin1的研究》一文中研究指出为进一步探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机制,本研究检测了自然感染绵羊肺腺瘤病(OPA)的绵羊肺组织中p-Akt和p-mTOR的表达定位、Akt和mTOR在肺组织中的磷酸化水平以及Beclin1在病肺组织中的表达水平,同时通过表达exJSRV-env的重组表达质粒诱导转化NIH3T3细胞,检测诱导转化的细胞中Akt和mTOR的磷酸化水平、Beclin1的表达水平。此外,在诱导转化的细胞中添加mTOR抑制剂Rapamycin后,检测其对Beclin1表达的影响。结果显示,p-Akt和p-m TOR主要表达于自然感染OPA病变肺组织的肺泡上皮细胞和肿瘤细胞中,与健康肺组织比较,在自然感染OPA病变肺组织中的二者磷酸化水平升高显着(p<0.05),而Beclin1在自然感染OPA病肺组织中的表达降低显着。p-mTOR在转染env的NIH3T3细胞中的磷酸化水平极显着高于对照组细胞(p<0.01),Beclin1在转染env的NIH3T3细胞中的表达量极显着低于正常的NIH3T3细胞(p<0.01)。而添加mTOR抑制剂Rapamycin后转染env的NIH3T3细胞与对照组细胞相比,Beclin1的表达水平显着上调(p<0.05)。结果表明,自然感染OPA的病肺组织和转染env的NIH3T3细胞的Akt/mTOR信号通路被激活,并通过该通路抑制自噬,提示exJSRV-env可能通过抑制病变细胞的自噬促进肿瘤的形成。本研究为进一步探索JSRV Env诱导转化细胞及与细胞自噬之间的关系的研究奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2017年04期）
张月梅,马学恩,么宏强,赵世华[10]（2017）在《绵羊肺腺瘤病毒缺失型SU蛋白真核表达载体的构建》一文中研究指出试验证明绵羊透明质酸酶2(hyaluronidase 2,Hyal-2)可以作为绵羊肺腺瘤病毒的受体与绵羊表面蛋白(surface protein,SU)亚基结合。为了进一步研究绵羊Hyal-2与SU蛋白可能结合的区域,运用生物信息学软件预测了SU蛋白的膜外区部分,然后分别构建了一系列缺失型真核表达载体,将缺失型SU蛋白真核表达载体pEGFP-C1-(su1~su5)转染293T细胞,激光共聚焦显微镜观察结果显示:SU1-SU5融合蛋白定位于细胞质,Western blot结果显示在66 000处出现阳性条带,表明成功构建了SU蛋白缺失型真核表达载体。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2017年03期）
绵羊肺腺瘤病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过分析新疆不同品种绵羊NK-lysin基因多态性,探讨新疆不同品种绵羊NK-lysin基因多态性与抗病力的关系。构建了对建立的绵羊肺腺瘤病人工感染模型肺组织提取总RNA,经实时荧光定量PCR方法检测发病和健康绵羊肺组织中NK-lysin基因的表达量,对比不同病理条件下绵羊NK-lysin基因的表达差异。结果表明:萨福克羊和哈萨克羊NK-lysin基因存在多态性以及突变。通过荧光定量RT-PCR检测,感染绵羊肺腺瘤病肺组织NK-lysin的表达水平明显低于健康绵羊,说明Nk-Lysin参与绵羊肺腺瘤的病理形成,为绵羊抗肿瘤分子机制研究提供理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
绵羊肺腺瘤病毒论文参考文献
[1].王晶晶,路珍珍,杨涵羽璐,盛金良,万鹏程.NK-lysin在人工感染绵羊肺腺瘤病毒肺组织的表达及其在不同品种绵羊的多态性分析[C].2018年全国养羊生产与学术研讨会论文集.2018
[2].徐金霞,宁志军,李莉,张渝菡,黄旭.NK-lysin在人工感染绵羊肺腺瘤病毒肺组织的表达及其在不同品种绵羊的多态性分析[J].现代牧业.2018
[3].徐先达.绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因原核表达质粒构建及表达[D].内蒙古农业大学.2018
[4].赵娟,徐斯日古楞,李慧萍,刘淑英.绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起绵羊绒毛膜滋养层细胞的恶性转化[J].畜牧兽医学报.2018
[5].吴丹丹,徐斯日古楞,李慧萍,鲁凤霞,刘淑英.蒙古绵羊内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因组序列测定与囊膜蛋白的表达分析[J].中国兽医科学.2018
[6].孙晓林.外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析[D].内蒙古农业大学.2017
[7].吴志强.绵羊肺腺瘤病毒斑点杂交检测方法的建立与初步应用[D].内蒙古农业大学.2017
[8].石晶,张宇飞,刘淑英.绵羊肺腺瘤病毒真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env引起体内和体外细胞发生的转化[J].中国兽医学报.2017
[9].孙晓林,刘淑英.外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR信号通路及调控Beclin1的研究[J].中国预防兽医学报.2017
[10].张月梅,马学恩,么宏强,赵世华.绵羊肺腺瘤病毒缺失型SU蛋白真核表达载体的构建[J].中国兽医学报.2017
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