生物转化合成N-乙酰神经氨酸的关键因素

生物转化合成N-乙酰神经氨酸的关键因素

论文摘要

在前期工作中已构建了一株能以外源N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和胞内磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)为底物,生物转化合成N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)的重组大肠杆菌,但其合成Neu5Ac的效率有待进一步提高。通过调整生物转化阶段培养基中氮源和碳源的组成,探寻Neu5Ac合成过程中的关键限制性因素。结果表明,增加唾液酸合成酶NeuB活性的措施没有提高Neu5Ac的产率,而底物之一胞内PEP的供给不足是限制Neu5Ac合成的关键性因素。通过限制转化培养基中的氮源,抑制重组大肠杆菌的生长,避免了PEP被用于细胞自身生长而更多地流向Neu5Ac合成方向;通过改用不依赖PTS跨膜转运系统的甘油作为碳源,在甘油/无氮转化培养基中Neu5Ac合成量最终达到(4.42±0.08) g/L,比初始合成条件高出10.3倍。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株和试剂
  •   1.2 生物转化合成Neu5Ac流程
  •     1.2.1 菌体生长阶段
  •     1.2.2 生物转化阶段
  •   1.3 分析方法
  •     1.3.1 生物量测定方法
  •     1.3.2 蛋白质测定方法
  •     1.3.3 Neu5Ac测定方法
  •     1.3.4 NeuB活性测定方法
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 双阶段生物转化合成Neu5Ac过程
  •   2.2 氮源对全细胞生物转化合成Neu5Ac的影响
  •     2.2.1 胰蛋白胨作为氮源对重组大肠杆菌合成Neu5Ac的影响
  •     2.2.2 硫酸铵作为氮源对重组大肠杆菌合成Neu5Ac的影响
  •     2.2.3 重组大肠杆菌在无氮培养基中合成Neu5Ac
  •   2.3 不同类型碳源对全细胞生物转化合成Neu5Ac的影响
  • 3 结语
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 朱德强,詹晓北,吴剑荣,郑志永,赵忠胜,王永远

    关键词: 唾液酸,乙酰神经氨酸,磷酸烯醇式丙酮酸,乙酰氨基葡萄糖,全细胞生物转化

    来源: 食品与生物技术学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室

    基金: 国家863计划项目(2012AA021505),中国博士后科学基金项目(2012M520996)

    分类号: Q78

    页码: 64-70

    总页数: 7

    文件大小: 2132K

    下载量: 110

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