猫源犬细小病毒的分离鉴定及其IgGF（ab’）2的制备与紧急预防和治疗效果的初步评价

论文摘要

犬细小病毒（Canine Parvovirus,CPV）属细小病毒科细小病毒属成员,可引起犬科等动物急性出血性肠炎、心肌炎、呕吐、厌食等全身性感染症状,最终导致动物死亡的一种急性、烈性传染病。近年来,由于CPV迅速传播和基因突变,导致病毒产生较强的致病力和抗原漂移现象,目前已经演变出CPV-2、CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c、New CPV-2a和New CPV-2b等多种亚型。细小病毒宿主范围也在不断扩大更新,目前在世界范围内已成为猫科、犬科、经济动物和珍稀野生动物的主要病原之一。猫感染CPV后会导致幼猫出现腹泻等类似犬细小病毒肠炎的症状,还会使猫成为病毒传播的中间宿主,危害其他动物健康。因此,分析猫源犬细小病毒的变异情况,制备针对猫源犬细小病毒的特异性治疗制剂尤为重要。本实验从疑似细小病毒病猫的肛门拭子中,采集到样品,用F81细胞对病毒进行分离,使用PCR检测、免疫学实验、电镜负染观察,对病毒进行鉴定,成功分离到一株猫源犬细小病毒,命名为CN/C/JL-5。稳定传代该分离株至第五代,病变时间维持在36 h左右,血凝效价为1:256,TCID50为105.15/mL,免疫荧光鉴定结果呈阳性。使用5对犬细小病毒全长引物对病毒全长基因进行扩增,共获得全长基因4 974bp。对病毒VP2基因分析,发现分离株共存在11处碱基突变、4处氨基酸变异,其中225位Thr→Ala、472Lys→Glu两处变异是CN/C/JL-5分离株独有的变异。分离株经浓缩后与氢氧化铝9:1混合,灭活后制成抗原免疫犬,在血清抗体效价达到最高时采血。经饱和硫酸铵盐析法分离血清中的IgG,胃蛋白酶37℃酶切2 h切除Fc片段,Protein-A、Protein-G柱纯化、SDS-PAGE检测F（ab’）2纯度,IgG在170 KD处出现目的蛋白,重链58 KD、轻链27 KD、F（ab’）2在120 KD左右出现目的蛋白,实验获得完整纯化的F（ab’）2片段。F（ab’）2中和效价为1:836。通过动物实验检测F（ab’）2的紧急预防效果和治疗效果。每个实验设置0.5 mg/kg、1 mg/kg和1.5 mg/kg F（ab’）2三个实验组以及对照组,对照组仅注射犬CPV抗体阴性血清。以CPV CN/C/JL-5攻毒后,对各实验组体温、体重、临床症状、粪便性状进行综合考察及评分,使用荧光定量PCR对粪便排毒量定量检测,结果显示,实验组各项数据及临床评分均低于对照组,证明制备的特异性F（ab’）2片段对猫源犬细小病毒感染具有一定的紧急预防及治疗效果,能够缓解病毒带来的临床症状,减少排毒量及死亡率。本实验成功分离一株猫源犬细小病毒并制备了犬源抗CPV IgG F（ab’）2片段,证明其具有紧急预防与治疗效果,为猫犬细小病毒感染特异性治疗制剂的研制提供数据支持。

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摘要

Abstract

缩写词

前言

第一篇文献综述

1.1 概述

1.2 犬细小病毒的形态与结构特点

1.3 犬细小病毒流行病学

1.4 犬细小病毒的检测方法研究进展

1.5 犬细小病毒病特异性治疗制剂的研究进展

1.6 目的及意义

第二篇研究内容

第一章猫源犬细小病毒的分离鉴定

1.1 材料

1.2 方法

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 小结

2 的制备与纯化'> 第一章犬抗猫源犬细小病毒Ig G F（ab'）₂的制备与纯化

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

2 紧急预防和治疗效果的初步评价'> 第三章犬抗猫源犬细小病毒 IgGF（ab'）₂紧急预防和治疗效果的初步评价

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

结论

参考文献

作者简介

致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 孙明洁

导师: 胡桂学

关键词: 猫源犬细小病毒,基因变异,制备,紧急预防与治疗试验

来源: 吉林农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学

分类号: S852.65

DOI: 10.27163/d.cnki.gjlnu.2019.000572

总页数: 68

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猫源犬细小病毒的分离鉴定及其IgGF（ab’）2的制备与紧急预防和治疗效果的初步评价

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