人IL-12基因载体的构建及其在T细胞中的表达研究

人IL-12基因载体的构建及其在T细胞中的表达研究

论文摘要

目的:探究T细胞携载人IL-12基因对T细胞生长和功能的影响。方法:构建表达人IL-12基因的PiggyBac转座子载体,在电转下,将携载IL-12基因的转座子系统导入新鲜分离的淋巴细胞获得持续稳定表达。通过T细胞表型分析及体外功能实验研究初步探讨T细胞携载IL-12基因的可行性。结果:借助电转可将携载有IL-12基因的PiggyBac转座子系统高效导入新鲜分离的淋巴细胞并获得高效稳定表达;IL-12的分泌可促进T细胞增殖,增加CD4阳性细胞百分比;携载IL-12基因的T细胞在肿瘤细胞刺激下可进一步促进IL-12分泌,增强T细胞的杀瘤活性。结论:在电场作用下,Piggybac转座子系统可将人IL-12基因高效载入并整合至T细胞基因组获得持续稳定表达,分泌的功能性IL-12可促进T细胞增殖,增强杀瘤活性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 IL-12过表达载体的构建
  •     1.2.2 IL-12与PiggyBac转座子系统连接的克隆形成
  •     1.2.3 IL-12阳性克隆的鉴定
  •     1.2.4 人外周血PBMC的分离
  •     1.2.5 PBMC的电转及T细胞的体外扩增
  •     1.2.6 IL-12在T细胞中的表达检测
  •     1.2.7 T细胞表型分析
  •     1.2.8 T细胞杀伤能力检测
  •   1.3 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 IL-12载体的成功构建
  •   2.2 构建的IL-12可在T细胞中形成具有生物学活性的IL-12蛋白
  •   2.3 T细胞表型分析
  •   2.4 IL-12分泌可促进T细胞的杀伤能力
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 邹云莲,胡边,张李琛,张进萍,朱学锴,黄行许,严新民

    关键词: 基因工程,细胞,转座子

    来源: 中国免疫学杂志 2019年21期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 昆明理工大学医学院,上海科技大学,昆明理工大学附属昆华医院

    基金: 云南省科技厅-昆医联合专项(2015FB102),云南省卫生厅内设机构项目(2017NS226,2018NS0247),云南省临床病毒学重点实验室子课题(2018DG010),昆明市肿瘤分子与免疫防治重点实验室项目(2018-1-A-17334),云南省第一人民医院小肠疾病临床诊疗及研究省创新团队项目(2018HC006)资助

    分类号: R392

    页码: 2651-2655

    总页数: 5

    文件大小: 606K

    下载量: 138

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