导读:本文包含了抗癌多肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:多肽,纳米金,抗菌,抗肿瘤
抗癌多肽论文文献综述
赵欢乐[1]（2019）在《多肽-纳米金体系和多肽水凝胶体系的构建和抗癌性能研究》一文中研究指出多肽作为一类优良的基因/药物载体,具有生物活性多样、免疫原性低、生物相容性好以及可控的自组装性能等多种优点,被广泛地应用于基因/药物的传输体系中,同时,一些从生物中提取出的特殊结构的多肽片段也可以作为治疗性分子,也逐渐应用于抗癌、抗菌等领域。将多肽作为基因或药物载体、或将其修饰在其他载体上,装载药物或基因形成纳米组装体,可以促进药物或基因的细胞内化,控制药物在肿瘤组织中的定点释放,提高基因转染效率,增强药物的治疗效果。近年来,利用多肽修饰介导的药物和基因的传递研究以及其在抗癌、抗菌等领域的研究备受专家学者关注。本论文从多肽的不同优势出发,研究了新型多肽在抗癌药物传输方面以及其作为治疗性分子在抗癌、抗菌领域的潜能。第一部分是多肽的制备、纯化和检测。采用标准Fmoc固相多肽合成(SPPS)技术,在2-氯-叁苯甲基氯树脂固相反应器中,合成了实验中需要的七条多肽链:抗菌肽FIGAIARLLSKIF(Kn2)、FIKRIARLLRKIF(Kn2-7)、CKn2、CKn2-7、CKn2-RGDS(AP1)、CKn2-7-RGDS(AP2)、全保护多肽Nap-FFY(t-Bu)E(OtBu)-OH,并利用Bruker 400 MHz核磁共振和LCQ Advantage型电喷雾质谱仪对合成的各种多肽链进行表征。通过双电荷峰计算,实际的NLS分子量与计算出的理论值一致。并用高效液相色谱(HPLC)检测每条多肽链的纯度。第二部分在抗菌肽BmKn2及其突变体BmKn2-7的基础上,在多肽的N端添加一个半胱氨酸,并利用Au-S配位键,构建多肽修饰的纳米金颗粒(AuNP@Kn2和AuNP@Kn2-7)。基于实验设计,我们完成了Kn2、Kn2-7、CKn2、CKn2-7、CKn2-RGDS(AP1)、CKn2-7-RGDS(AP2)的设计和合成。我们利用柠檬酸钠法在可控状态下将氯金酸还原成粒径在约为18 nm的纳米金颗粒。并将源于蝎毒液的毒素多肽BmKn2-7修饰纳米金,并进一步研究其毒性,我们成功制备了多肽Kn2-7修饰的纳米金载体(AuNP@Kn2-7),粒径为34nm,相比较于多肽载体Kn2-7而言,具有较低的细胞毒性;另外,我们成功制备了Kn2-7-RGDS修饰的纳米金载体(AuNP@Kn2-7-RGDS),粒径为96 nm。经研究发现,Kn2-7-RGDS修饰的纳米金载体(AuNP@Kn2-7-RGDS)具有一定的肿瘤细胞抑制效果。第叁部分制备含有多肽Nap-FFYE-CO-NH-(CH_2)_2-SS-MP抗肿瘤6-MP前体药物。由于该多肽片段Nap-FFYE-OH具有优良的自组装性能,通过透射电子显微镜(TEM)观测到,该6-MP前体药物Nap-FFYE-CO-NH-(CH_2)_2-SS-MP可以在中性水溶液中发生自组装,进而形成直径为50 nm左右的纳米纤维。体外药物释放实验结果显示,在不含谷胱甘肽(GSH)的条件下,6-MP前体药物中的6-MP没有显示出任何释放,但是在模拟肿瘤环境条件下,控制GSH浓度为40mM,二硫键发生断裂,体外释药曲线显示出明显的GSH敏感性,24 h后的累计药物释放效率几乎达到了75%。同时体外细胞毒性实验结果也证明,6-MP前体药物比游离的6-MP具有更低的细胞毒性。因此,这种含二硫键的还原敏感性6-MP前体药物,有望能够改善抗癌药物6-巯基嘌呤稳定性能差,细胞毒副作用大的缺陷,并且进一步实现肿瘤部位的响应性药物释放,使得抗肿瘤药物6-巯基嘌呤富集于肿瘤细胞,因而在癌症的临床治疗上有一定的应用潜能。(本文来源于《河南科技大学》期刊2019-06-01）
刘恒铫[2]（2019）在《蝎毒抗癌多肽对肺癌干细胞样细胞特性影响的初步研究》一文中研究指出研究目的本实验通过研究蝎毒抗癌多肽(PESV)对肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡、干性的影响,以及对荷瘤裸鼠抗肿瘤作用的研究,探讨蝎毒抗癌多肽抑制肺癌的作用机制,为靶向治疗肺癌和开发新型治疗药物提供理论基础。研究方法1.A549细胞培养A549细胞培养于含10%FBS的RPMI1640完全培养基中,放置于37℃、5%CO_2培养箱中进行培养,等到细胞长到80%的汇合度时,用含EDTA的0.25%的胰蛋白酶进行消化,常规传代。2.悬浮细胞球培养和肺癌A549干细胞样细胞鉴定(1)A549细胞球培养。配制无血清培养基,DMEM/F12培养基中添加20 ng/ml EGF、20 ng/ml b-FGF和2%B27。将A549细胞种植于含无血清培养基的超低吸附培养板里,然后放置于培养箱内进行培养,每隔3 d进行半量换液,倒置显微镜下观察细胞成球情况。(2)收集普通培养和无血清条件培养的A549细胞,用流式细胞仪检测肺癌干细胞表面标记物CD133和ALDH1A1标记细胞的比例。3.实验分组将培养好的A549细胞分为空白对照组(Control)、蝎毒抗癌多肽(PESV)组和Notch1抑制(DAPT)组。4.肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡和干性的检测(1)MTT法和细胞克隆实验检测PESV对肺癌A549干细胞样细胞增殖能力的影响;(2)流式细胞仪检测PESV对肺癌A549干细胞样细胞凋亡率的影响;(3)细胞成球实验检测PESV对细胞干性的影响;5.肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡和干性相关基因的检测Western blotting法检测肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡相关基因PCNA、Bcl-2和干性相关基因ALDH1A1、Sox-2、Snail、Musashi 1、Notch1、Hes-1蛋白表达水平的变化。6.荷瘤裸鼠肿瘤的测定6～8周雄性荷瘤裸鼠皮下接种细胞一周后,随机分为空白对照组(Control)、蝎毒抗癌多肽(PESV)组和Notch1抑制(DAPT)组,每组6只。PESV组灌胃用药20 mg/kg,DAPT组腹腔注射给药10 mg/kg,Control组灌胃相同体积的生理盐水,连续给药5周,每2 d测量肿瘤体积一次,用游标卡尺分别测量肿瘤的长径和短径,并使用公式V=1/2(短径～2×长径)计算肿瘤体积。皮下接种细胞6周后,颈椎脱臼法处死小鼠并称重肿瘤块,记录肿瘤块的重量。7.荷瘤裸鼠肿瘤增殖、凋亡和干性相关基因的检测采用免疫组化、免疫荧光和Western blotting法检测肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡相关基因PCNA、Bcl-2蛋白表达,干性相关基因ALDH1A1、Sox-2、Snail、Musashi1、Notch1、Hes-1蛋白表达水平的变化。实验结果1.复苏过程中A549细胞形态学观察在倒置显微镜下观察刚刚复苏的A549细胞,此时A549细胞呈现圆形透亮的状态并且悬浮于培养基中,然后将细胞放置于37℃,5%CO_2细胞培养箱进行培养,过夜,此时大部分细胞贴壁生长,用PBS清洗未贴壁细胞并进行换液,观察到细胞的形态呈现梭形,随着培养时间的延长,细胞呈梭形或多角形。2.肺癌A549干细胞样细胞的鉴定通过无血清培养获得A549细胞球,流式细胞仪检测肺癌干细胞表面标记物CD133和ALDH1A1标记的细胞比例结果表明,无血清培养的A549细胞中表达CD133和ALDH1A1细胞的比例明显高于普通培养的A549细胞(P<0.01)。3.Notch1在普通培养和无血清培养A549细胞中的表达差异qRT-PCR和Western blotting法检测结果表明,无血清培养的A549细胞中Notch1基因表达明显高于普通培养的A549细胞(P<0.01),实验结果说明Notch信号通路中Notch1在肺癌A549干细胞样细胞中发挥重要作用。4.PESV对肺癌A549干细胞样细胞的影响研究(1)PESV对肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡的影响MTT法和细胞克隆实验表明,PESV组和DAPT组细胞的增殖能力明显低于Control组细胞,PESV组和DAPT组细胞的凋亡率明显高于Control组细胞;Western blotting法检测结果表明,PESV组和DAPT组细胞中增殖、凋亡相关基因PCNA、Bcl-2和Notch1、Hes-1的蛋白表达量明显低于Control组细胞,差异均具有统计学意义(P<0.01)。实验结果说明PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制肺癌A549干细胞样细胞的增殖能力,并且能够促进其凋亡。(2)PESV对肺癌A549干细胞样细胞干性的影响细胞成球实验结果表明,PESV组和DAPT组A549细胞成球大小和成球数量均明显低于Control组细胞;Western blotting法检测结果显示,PESV组和DAPT组细胞中干性相关基因ALDH1A1、Sox-2、Snail、Musashi 1蛋白表达量均明显低于Control组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结果提示,PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制肺癌A549干细胞样细胞的成球能力,降低其干性。5.PESV对荷瘤裸鼠肿瘤的影响研究(1)PESV对荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响实验结果表明,PESV可明显降低异种移植瘤的大小和肿瘤重量,同时明显降低Notch、Hes-1、PCNA、Bcl-2蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.01)。实验结果说明,PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制A549荷瘤裸鼠肿瘤的生长。(2)PESV对荷瘤裸鼠肿瘤细胞干性的影响Western blotting法和免疫荧光检测结果表明,PESV可明显降低荷瘤裸鼠肿瘤细胞中肿瘤干细胞相关基因Sox-2、Musashi 1、Snail、ALDH1A1蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.01)。实验结果说明,PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制A549荷瘤裸鼠肿瘤中干性相关基因的表达。实验结论1.通过无血清培养获得A549细胞球,用肺癌干细胞表面标记物CD133和ALDH1A1标记的细胞比例明显升高,可以得到肺癌A549干细胞样细胞。2.PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1表达抑制肺癌A549干细胞样细胞增殖并促进其凋亡。3.PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1表达抑制肺癌A549干细胞样细胞成球大小和成球数目,降低肺癌A549干细胞样细胞干性。4.PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1表达抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,降低肺肿瘤细胞的干性能力。(本文来源于《济南大学》期刊2019-05-01）
梁纶熙,王焕彬,Hubing,Shi,Zhaoli,Li,Han,Yao[3]（2019）在《一种设计的抗癌多肽调控p53的两种翻译后修饰》一文中研究指出文章简介蛋白质的翻译后修饰可能对蛋白质的表达和功能产生影响,同时也是重要的药物靶标。现有的方法通常只调控单一类型的翻译后修饰。本研究报道了一种同时调控两种翻译后修饰的多肽。这种靶向多肽能够阻断p53(本文来源于《科学新闻》期刊2019年02期）
代叶梅[4]（2018）在《基于多肽—药物共组装构筑还原响应型纳米抗癌药物载体》一文中研究指出多肽因其较低的生物毒性、良好的生物可降解性、易于功能化修饰以及可自组装等特性,在药物载体设计方面受到了越来越多的关注。本文选择多肽作为研究对象,通过在多肽分子中引入二硫键,设计了一种具有还原响应的多肽分子(RRP),通过与疏水性抗癌药物姜黄素(CCM)共组装,得到了纳米药物载体CCM@RRP,并对其肿瘤治疗效果进行了评价。主要研究内容如下:(1)纳米载药体系制备及表征:设计了一条含有二硫键的纯肽分子作为药物载体,其序列为Ac-ATKTAC(S-S)CATKTA-Ac。通过对共组装过程中CCM加入量、组装时间等参数的优化,确定了最佳制备条件:0.5 mg/mL RRP,0.3mg/mL CCM,pH 5.5,16℃下遮光静置1 h。所得的CCM@RRP纳米微粒尺寸约为250 nm,药物包埋率为63.43%。CCM@RRP纳米粒子具有较好的稳定性,冻干处理不会改变粒子尺寸分布,在溶液状态下24 h内能够维持原有结构,在20%血清中能够稳定存在。体外还原响应性测试表明,在含有8 mM谷胱甘肽(GSH)的溶液中,RRP多肽可快速断裂,纳米微球破裂,证明了CCM@RRP具有明显的GSH还原响应性。(2)纳米载药体系释放及应用评价:体外药物释放实验证明,CCM@RRP在正常pH 7.4条件下稳定存在,随着溶液中GSH浓度的增加,其释放CCM的速率也逐渐增加,当GSH浓度为8 mM时,4 h内药物释放率达90%以上。细胞摄取实验和毒性实验证明,CCM@RRP较游离CCM被摄取速率更快,药物摄取率更高,且RRP本身毒性低、生物相容性好。当携带CCM的含量达到50μg/mL时,CCM@RRP对HeLa宫颈癌细胞的致死率达88.03%,为游离CCM的4.26倍,对MDA-MB-231乳腺癌细胞的致死率达98.90%,为游离CCM的1.3倍。活体实验中,CCM@RRP对MDA-MB-231肿瘤抑制率为61.88%,对HeLa肿瘤抑制率为69.12%;组织病理分析表明,在治疗浓度下CCM@RRP对健康细胞具有较小的毒副作用,TUNEL免疫组化分析证实CCM@RRP能够有效导致肿瘤细胞凋亡。(本文来源于《天津大学》期刊2018-05-01）
戴翎子[5]（2018）在《抗癌药物NL-101和氨基酸、多肽相互作用的液质识别》一文中研究指出氮芥类药物是在20世纪50年代就应用于临床并取得突出疗效的抗肿瘤药物,这类药物分子一旦进入体内后,就能通过分子内成环反应,得到活泼的乙烯亚胺离子。该乙烯亚胺离子可与多种体内有机物质的亲核基团(如蛋白质,DNA等)结合,发生烷基化作用使其失去生物活性。氮芥成环产物与蛋白质作用后得到的烷基化产物会影响患者正常的代谢从而导致副作用的产生,然而鲜有研究探索其结构特征。因此建立快速、有效的方法对该烷基化产物进行结构分析是很有必要的。质谱以其高灵敏度,样品用量少,可提供分子结构信息等绝对优势,已成为生物药物代谢研究中的重要工具。本论文以高效液相色谱串联质谱为分析手段,发展并建立了识别氮芥类药物NL-101与氨基酸、多肽之间相互作用的分析方法,并总结归纳出其相互作用以及反应产物在质谱条件下的裂解规律。1.NL-101稳定性实验研究。NL-101在溶液状态下,会通过分子内成环反应生成活泼的乙烯亚胺离子。基于此化学性质,本文模拟生理环境,考察了环境酸碱度和孵化时长对其代谢的影响。采用液质联用技术,对NL-101及其代谢产物进行识别研究。实验结果表明NL-101在中性和碱性环境下更容易发生代谢,即更易与环境中的亲核基团反应也更易水解,且在孵化9小时后,水解产物达到原药物量的50%。2.NL-101与氨基酸相互作用及其作用位点分析。选用孵化4小时的实验条件,考察了不同环境酸碱度下NL-101环化产物与氨基酸发生反应产物的作用位点。采用电喷雾诱导解离技术对产物进行研究,通过二级质谱图中特征碎片离子的差异实现了对其作用位点的识别。研究发现,NL-101与氨基酸中氨基作用生成的产物对碰撞能量敏感,裂解得到的信息丰富;NL-101与氨基酸中羧基作用生成的产物则相反;NL-101与氨基酸侧脸集团作用生成的产物,其二级质谱图有特征碎片。3.NL-101与多肽相互作用及其作用位点分析。以NL-101与氨基酸相互作用数据为基础,应用于分析NL-101与肌肽、鹅肌肽、谷胱甘肽及叁胜肽之间的相互作用。通过对NL-101与这些多肽作用产物进行碰撞诱导解离产生的二级碎片离子进行分析,实现了对其作用位点的识别。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-03-01）
马广龙[6]（2016）在《多肽两性离子材料的制备及其在抗癌药物输送体系中的应用》一文中研究指出两性离子材料优良的抗蛋白吸附效果,使其在生物医学领域有着越来越重要的地位。但传统基于磷酰胆碱、磺酸甜菜碱、羧酸甜菜碱的聚合物由有着无法被人体降解的问题。多肽作为蛋白质的组成成分,具有优良的生物相容性且可以被人体所降解。本文,我们将两性离子与多肽结合在一起,制备一系列多肽的两性离子材料,并考察他们在抗癌药物输送体系中的应用。本文主要包括以下几个部分:1、通过 α-Amino Acid N-Carboxyanhydrides(NCA)开环聚合,制备了 由多肽组成的两亲性嵌段共聚物。并可以在水溶液中通过自组装,模拟蛋白质,形成具有两性离子外壳的纳米胶束。两性离子外层可以使纳米胶束具有抗非特异性蛋白吸附的性能,细胞实验表明,聚合物包载阿霉素后可以降低其细胞毒性,减少细胞内吞。同时可以通过控制亲疏水段的比例制备不同尺寸的纳米胶束,利用EPR效应达到在肿瘤组织处富集的目的。2、采用缩聚与NCA开环聚合相结合的方法,制备了由谷氨酸(E),赖氨酸(K),苯丙氨酸(F)叁种天然氨基酸组成的两亲性嵌段共聚物。在水溶液中,可以自组装成具有E/K=1/1两性离子外层和苯丙氨酸疏水内核的纳米胶束。3、控制谷氨酸(E)与赖氨酸(K)聚合比例,通过与阿霉素复合,简单,便捷的制备了高载药效率,高载药量的两性离子包被的纳米载药囊泡。该载药囊泡在生理环境及FBS环境下稳定,但在酸条件及酶环境下可以迅速释放药物。将囊泡进一步修饰靶向基团RGD后,提高了细胞的内吞和毒性,并通过组织分布实验检测到了其在肿瘤组织处的富集。4、通过谷氨酸(E)与赖氨酸(K)按照1:1的比例聚合,经过化学交联制备了两性离子水凝胶。该水凝胶通过减少非特异性蛋白质吸附和细胞附着来改善生物相容性。本章研究了负载模型药物盐酸阿霉素(DOX·HCl)(带正电荷的抗癌药物)和双氯芬酸钠(带负电荷的抗炎药物)水凝胶的释药行为。药物释放具有pH响应性。且在胰蛋白酶存在的条件下,水凝胶可以被完全降解。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-10-20）
张月英,贾青,王兆朋,王朝霞,王恒孝[7]（2015）在《蝎毒抗癌多肽抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究》一文中研究指出【目的】研究蝎毒抗癌多肽(ACP)对非小细胞肺癌细胞株A549的生长抑制作用及分子机制,为期临床应用提供实验依据。【方法】采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度抗癌多肽(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/m1、200μg/m)对A549细胞生长与增殖的影响;选取100μg/ml浓度ACP干预非小细胞肺癌细胞24h、48h后,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测细胞周期相关基因cylinE、p27及细胞增殖相关基因Notch1蛋白表达变化,实时荧光定量PCR检测相应基因的转录变化。【结果】MTT结果显示,ACP在浓度为50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml时对非小细胞肺癌抑制作用较明显,且随剂量加大作用增强,呈明显剂量效应关系;流式细胞术显示,ACP(浓度为100μg/m1)干预后,G0/G1细胞增多,S期细胞减少;ACP(浓度为100μg/ml)干预后细胞周期相关基因cyclinE在蛋白和转录水平表达均下调,p27表达水平上调。同时Notch1基因表达下调。【结论】ACP可以抑制非小细胞肺癌细胞增殖,且与其抑制增殖相关基因Notch1及调控细胞周期相关基因cylinE、p27表达相关。(本文来源于《中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛论文集》期刊2015-10-25）
阮之平,田涛,焦敏,姚煜[8]（2015）在《蟾蜍活性多肽对不同肿瘤细胞的抗癌功能及机制研究》一文中研究指出目的:研究来源于中华大蟾蜍卵子内一种活性多肽对人不同组织类型肿瘤细胞株的抗癌作用及可能机制。方法:采用MTT法检测活性多肽对肿瘤细胞增殖能力的影响。构建肿瘤移植瘤模型,检测该活性多肽对肿瘤细胞成瘤能力的影响。流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。采用real-time PCR检测活性多肽对细胞周期和凋亡相关基因表达的影响。结果:蟾蜍活性多肽对不同组织类型的肿瘤细胞具有增殖抑制和/或诱导凋亡的作用,并呈时间依赖性和剂量依赖性。蟾蜍活性多肽可能通过下调周期相关基因cyclin B、CDK1的表达阻滞肿瘤细胞周期于G2/M期检查点。对凋亡诱导的作用可能与凋亡相关基因Survivin、Caspase-3表达和bcl/bak表达的比值上调有关。结论:蟾蜍活性多肽能够通过阻滞细胞周期进展和诱导凋亡抑制肿瘤细胞的体内外增殖能力。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2015年15期）
侯春园[9]（2015）在《多肽与pH响应的聚β氨基酯共聚物自组装与化疗药物的协同抗癌研究》一文中研究指出近年来纳米技术在癌症治疗方面起到了越来越重要的作用。纳米药物能够通过增强渗透保留效应(EPR)延长药物在体内的保留时间,在肿瘤部位特异性富集,从而增强药物的治疗效果。由于多肽类药物具有容易合成,在体内容易降解,不会引起毒副作用的优点,也逐渐引起了研究者们的注意。因此,我们通过1,4-共轭加成反应将毒性的多肽(KLAKLAK)2(简称KLAK)与pH响应性的PEG修饰的聚β氨基酯化合物共价相连,通过动态光散射(DLS)和透射电子显微镜(TEM)测试证明了共聚物在p H7.4条件下能够自组装形成胶束状的pH响应性的纳米粒子。通过溶酶体共定位实验,证明了P2-KLAK胶束的内吞途径;通过JC-1试剂盒分析,证明了线粒体导致的细胞凋亡;通过CCK-8试剂盒分析,证明了P2-KLAK胶束能够增强对癌细胞MCF-7的毒性。P2-KLAK胶束比游离的多肽KLAK毒性大,这可能是该胶束通过内吞途径有效地进胞和随后对线粒体的破坏导致的。在P2-KLAK胶束内包裹抗癌药物阿霉素(DOX)实现了化学治疗药物和多肽类药物的共同转移和酸引发的细胞内释放。包裹阿霉素的P2-KLAK胶束的毒性高于包裹阿霉素的P2胶束和不包裹阿霉素的P2-KLAK胶束,表明其能够增强杀死癌细胞MCF-7的能力。最后,将MCF-7细胞异种移植到裸鼠体内,进行体内肿瘤成像和生长抑制实验,证实了包裹阿霉素的P2-KLAK胶束由于能够在肿瘤部位特异性地富集,有效进入细胞,使治疗药物在细胞内可控释放,从而有效地抑制肿瘤生长。(本文来源于《河北工业大学》期刊2015-05-01）
韦晓谋,韦柳华,周定球[10]（2015）在《蝎毒抗癌多肽对肝癌细胞株中癌症高表达蛋白Hec1的抑制作用》一文中研究指出目的:对蝎毒抗癌多肽对肝癌细胞株中癌症高表达蛋白Hec1抑制作用进行研究。方法:小鼠肝癌细胞株Hec1和人肝癌细胞株SMMC-7721。阳性对照选用5-Fu(10μg/ml),蝎毒抗癌多肽选用3个浓度(0.09μg/ml、0.06μg/ml和0.03μg/ml)。结果:蝎毒抗癌多肽的IC50剂量效应关系不明显,细胞毒性最强。随着蝎毒抗癌多肽作用时间的延长,其对肝癌细胞株中癌症高表达蛋白Hec1抑制作用也日益增大。结论:蝎毒能够对肝癌细胞株中的游离钙水平进行影响,能够降低细胞分裂信使的钙离子水平,还能够有效抑制住肝癌细胞株中癌症高表达蛋白Hec1增殖。(本文来源于《中药药理与临床》期刊2015年02期）
抗癌多肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究目的本实验通过研究蝎毒抗癌多肽(PESV)对肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡、干性的影响,以及对荷瘤裸鼠抗肿瘤作用的研究,探讨蝎毒抗癌多肽抑制肺癌的作用机制,为靶向治疗肺癌和开发新型治疗药物提供理论基础。研究方法1.A549细胞培养A549细胞培养于含10%FBS的RPMI1640完全培养基中,放置于37℃、5%CO_2培养箱中进行培养,等到细胞长到80%的汇合度时,用含EDTA的0.25%的胰蛋白酶进行消化,常规传代。2.悬浮细胞球培养和肺癌A549干细胞样细胞鉴定(1)A549细胞球培养。配制无血清培养基,DMEM/F12培养基中添加20 ng/ml EGF、20 ng/ml b-FGF和2%B27。将A549细胞种植于含无血清培养基的超低吸附培养板里,然后放置于培养箱内进行培养,每隔3 d进行半量换液,倒置显微镜下观察细胞成球情况。(2)收集普通培养和无血清条件培养的A549细胞,用流式细胞仪检测肺癌干细胞表面标记物CD133和ALDH1A1标记细胞的比例。3.实验分组将培养好的A549细胞分为空白对照组(Control)、蝎毒抗癌多肽(PESV)组和Notch1抑制(DAPT)组。4.肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡和干性的检测(1)MTT法和细胞克隆实验检测PESV对肺癌A549干细胞样细胞增殖能力的影响;(2)流式细胞仪检测PESV对肺癌A549干细胞样细胞凋亡率的影响;(3)细胞成球实验检测PESV对细胞干性的影响;5.肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡和干性相关基因的检测Western blotting法检测肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡相关基因PCNA、Bcl-2和干性相关基因ALDH1A1、Sox-2、Snail、Musashi 1、Notch1、Hes-1蛋白表达水平的变化。6.荷瘤裸鼠肿瘤的测定6～8周雄性荷瘤裸鼠皮下接种细胞一周后,随机分为空白对照组(Control)、蝎毒抗癌多肽(PESV)组和Notch1抑制(DAPT)组,每组6只。PESV组灌胃用药20 mg/kg,DAPT组腹腔注射给药10 mg/kg,Control组灌胃相同体积的生理盐水,连续给药5周,每2 d测量肿瘤体积一次,用游标卡尺分别测量肿瘤的长径和短径,并使用公式V=1/2(短径～2×长径)计算肿瘤体积。皮下接种细胞6周后,颈椎脱臼法处死小鼠并称重肿瘤块,记录肿瘤块的重量。7.荷瘤裸鼠肿瘤增殖、凋亡和干性相关基因的检测采用免疫组化、免疫荧光和Western blotting法检测肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡相关基因PCNA、Bcl-2蛋白表达,干性相关基因ALDH1A1、Sox-2、Snail、Musashi1、Notch1、Hes-1蛋白表达水平的变化。实验结果1.复苏过程中A549细胞形态学观察在倒置显微镜下观察刚刚复苏的A549细胞,此时A549细胞呈现圆形透亮的状态并且悬浮于培养基中,然后将细胞放置于37℃,5%CO_2细胞培养箱进行培养,过夜,此时大部分细胞贴壁生长,用PBS清洗未贴壁细胞并进行换液,观察到细胞的形态呈现梭形,随着培养时间的延长,细胞呈梭形或多角形。2.肺癌A549干细胞样细胞的鉴定通过无血清培养获得A549细胞球,流式细胞仪检测肺癌干细胞表面标记物CD133和ALDH1A1标记的细胞比例结果表明,无血清培养的A549细胞中表达CD133和ALDH1A1细胞的比例明显高于普通培养的A549细胞(P<0.01)。3.Notch1在普通培养和无血清培养A549细胞中的表达差异qRT-PCR和Western blotting法检测结果表明,无血清培养的A549细胞中Notch1基因表达明显高于普通培养的A549细胞(P<0.01),实验结果说明Notch信号通路中Notch1在肺癌A549干细胞样细胞中发挥重要作用。4.PESV对肺癌A549干细胞样细胞的影响研究(1)PESV对肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡的影响MTT法和细胞克隆实验表明,PESV组和DAPT组细胞的增殖能力明显低于Control组细胞,PESV组和DAPT组细胞的凋亡率明显高于Control组细胞;Western blotting法检测结果表明,PESV组和DAPT组细胞中增殖、凋亡相关基因PCNA、Bcl-2和Notch1、Hes-1的蛋白表达量明显低于Control组细胞,差异均具有统计学意义(P<0.01)。实验结果说明PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制肺癌A549干细胞样细胞的增殖能力,并且能够促进其凋亡。(2)PESV对肺癌A549干细胞样细胞干性的影响细胞成球实验结果表明,PESV组和DAPT组A549细胞成球大小和成球数量均明显低于Control组细胞;Western blotting法检测结果显示,PESV组和DAPT组细胞中干性相关基因ALDH1A1、Sox-2、Snail、Musashi 1蛋白表达量均明显低于Control组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结果提示,PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制肺癌A549干细胞样细胞的成球能力,降低其干性。5.PESV对荷瘤裸鼠肿瘤的影响研究(1)PESV对荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响实验结果表明,PESV可明显降低异种移植瘤的大小和肿瘤重量,同时明显降低Notch、Hes-1、PCNA、Bcl-2蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.01)。实验结果说明,PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制A549荷瘤裸鼠肿瘤的生长。(2)PESV对荷瘤裸鼠肿瘤细胞干性的影响Western blotting法和免疫荧光检测结果表明,PESV可明显降低荷瘤裸鼠肿瘤细胞中肿瘤干细胞相关基因Sox-2、Musashi 1、Snail、ALDH1A1蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.01)。实验结果说明,PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1的表达,抑制A549荷瘤裸鼠肿瘤中干性相关基因的表达。实验结论1.通过无血清培养获得A549细胞球,用肺癌干细胞表面标记物CD133和ALDH1A1标记的细胞比例明显升高,可以得到肺癌A549干细胞样细胞。2.PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1表达抑制肺癌A549干细胞样细胞增殖并促进其凋亡。3.PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1表达抑制肺癌A549干细胞样细胞成球大小和成球数目,降低肺癌A549干细胞样细胞干性。4.PESV能够通过下调Notch1及其下游基因Hes-1表达抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,降低肺肿瘤细胞的干性能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗癌多肽论文参考文献
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