牡蛎诺如病毒多样性研究中病毒富集方法的评估

牡蛎诺如病毒多样性研究中病毒富集方法的评估

论文摘要

牡蛎作为诺如病毒的载体,含有几乎所有的GI型和大部分GII型诺如病毒。为了有利于牡蛎中诺如病毒多样性的研究,对4种常用于宏基因组测序中病毒富集方法(PEG6000沉淀法、超速离心法、过滤法和直接提取法)进行比较评估,将含有GII. 4型诺如病毒基因的慢病毒(Lentivirus)加入阴性牡蛎中作为内参,利用反转录荧光定量PCR计算4种方法处理前后Lentivirus的数量,以回收率作为方法评估的指标,并以16S PCR来验证处理后微生物污染情况。重复本实验得到的两次结果均显示这4种方法回收率无明显差异,直接提取法回收率相对较高,但同时也具有较为严重的微生物污染。综合考虑其仍显示较好的优越性,因此直接提取方法更适用于后期牡蛎诺如病毒多样性研究中RNA的提取。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 Lentivirus和GII型诺如病毒荧光定量PCR探针引物
  •     1.1.2 试剂及仪器
  •     1.1.3 采样
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 RNA提取
  •     1.2.2 反转录巢氏PCR (Nested RT-PCR)
  •     1.2.3 牡蛎中诺如病毒检测
  •     1.2.4 一步法反转录荧光定量PCR
  •     1.2.5 病毒富集方法比较
  •     1.2.6 16S PCR检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 牡蛎中诺如病毒检测
  •   2.2 反转录荧光定量PCR
  •   2.3 16S PCR检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 郭萍,潘迎捷,喻勇新

    关键词: 诺如病毒,牡蛎,直接提取法,多样性研究

    来源: 生物学杂志 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 上海海洋大学食品学院

    基金: 国家自然科学基金(31601570),教育部高等学校博士点基金(20133104110006)

    分类号: TS254.7

    页码: 104-107

    总页数: 4

    文件大小: 235K

    下载量: 147

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