导读:本文包含了人乳铁蛋白基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,基因,人乳,多态性,转录,转基因,层析。
人乳铁蛋白基因论文文献综述
王建珏[1]（2018）在《奶山羊乳铁蛋白（LF）基因克隆及启动子区转录活性研究》一文中研究指出乳蛋白是山羊乳的主要营养成分,具有含多种活性成分、营养价值高、易消化吸收等特点,其种类及其在乳中的浓度都影响乳品质。乳铁蛋白(lactoferrin,LF)是乳蛋白的主要组分,是一种重要的生理活性物质,具有广泛而独特的理化特性和生物活性,在食品、乳品、生化、医药、饲料、化妆品等领域应用前景广阔。因此,通过克隆奶山羊LF基因及研究其启动子功能解析乳腺上皮细胞乳铁蛋白的转录调控机制,获得的试验材料及研究理论对奶山羊育种及羊乳成分调控具有实际应用价值和重要理论意义。本研究以山羊的基因组序列为模板,在PCR技术扩增得到奶山羊LF基因CDS区、启动子全长序列的基础上,使用软件和在线网站进行生物信息学分析;通过5'端缺失,构建8个包含LF启动子不同缺失片段的荧光素酶报告基因载体,利用萤火虫荧光素酶活性报告系统检测不同片段启动子活性,以期确定启动子最小活性中心;并通过定点突变ERE,分析了对山羊LF启动子活性的影响。得到主要结果如下:1.克隆得到奶山羊LF基因CDS区全长。LF基因CDS全长2 127 bp,编码708个氨基酸,LF基因蛋白二级结构主要由α-螺旋和不规则卷曲组成,并预测得到了LF基因叁级结构3D模型图。ELISA检测奶山羊不同泌乳时期(泌乳初期、泌乳盛期、泌乳中期、泌乳末期)乳中LF蛋白浓度,发现随着泌乳时期延长,LF蛋白浓度呈现出下降趋势,泌乳初期最高,为222.6±41.57μg/mL;之后下降并保持一个稳定的范围,为34.61~51.94μg/mL。2.成功克隆得到山羊LF启动子区大小为2 070 bp的片段,与GenBank公布的牛(AY319306.2)、人(AF508798.1)、小鼠(M74778.1)的同源性分别为89.2%、55.25%、39.85%。生物信息学分析发现,克隆得到的LF启动子区片段包括转录起始位点(+1)上游1 935 bp、第Ⅰ内含子(+1~+36)、第Ⅰ外显子(+37~+119)和第Ⅱ内含子的部分序列(+120~+135),ATG位于第Ⅰ外显子上。LF启动子片段序列G/C含量为52.39%,并且该区域上有非典型的真核生物元件TATA-box。生物信息学分析表明,LF启动子上存在PPAR-γ、PPAR-α、LXR-α、C/EBP-α、Sp1和NF-Y等转录因子的结合位点。3.启动子缺失片段的荧光素酶活性分析表明,LF启动子的核心区域位于-84~-46 bp,并且在启动子上游存在正调控元件。同时序列分析发现,在启动子的上游区域含有ERE位点。定点突变分析发现,突变ERE叁个位点均能显着下调启动子的活性,因此,LF启动子上存在叁个功能性ERE元件(-1 038 bp、-1 144 bp和-1 777 bp)。综上所述,山羊LF基因CDS区全长为2 127 bp,LF在泌乳初期乳中浓度较高。克隆得到山羊LF启动子区2 070 bp片段,山羊LF启动子5'侧翼序列与牛的同源性较高,启动子核心区域定位在-84~-46 bp之间,功能性ERE元件对维持启动子转录基础活性具有重要作用,初步研究并揭示了LF基因转录调控机制。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-04-11）
嵇雅茹,王雅楠,张宏波,张学明[2]（2018）在《人乳铁蛋白cDNA基因的克隆》一文中研究指出目的:克隆人乳铁蛋白c DNA基因,进而为重组人乳铁蛋白的制备奠定基础。方法:从人静脉血中性粒细胞中提取得总RNA,RT-PCR法扩增人乳铁蛋白c DNA基因后,将其插入到克隆载体p JET1.2,DNA测序法鉴定基因序列。结果:从人静脉血中性粒细胞中分离获得了总RNA,RT-PCR法克隆了人乳铁蛋白c DNA基因,经过DNA测序分析鉴定,其结果与Gene Bank中序列完全一致。结论:成功从人静脉血中性粒细胞中克隆扩增了人乳铁蛋白c DNA基因,为重组人乳铁蛋白的制备奠定基础。(本文来源于《包头医学院学报》期刊2018年03期）
秦毅,吕国英,张作法[3]（2018）在《转基因水稻中转人乳铁蛋白的抗氧化及免疫作用》一文中研究指出以转人乳铁蛋白为研究对象,研究其抗氧化和免疫活性。采用DPPH法、ABTS法和羟基自由基清除能力的方法来研究转人乳铁蛋白(rh LF)的抗氧化功能,通过小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞增殖和吞噬活性的检测来测定转人乳铁蛋白的免疫活性。结果表明,转人乳铁蛋白对DPPH、ABTS和羟基自由基具有一定的清除能力,并能促进免疫细胞的增殖和增强免疫细胞的吞噬活性。转人乳铁蛋白具有较好的免疫活性和抗氧化活性,是开发相关保健食品的重要资源。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2018年01期）
周文君,郭日红,邓明田,王锋,张艳丽[4]（2017）在《RS-1提高CRISPR-Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因敲入效率》一文中研究指出尝试利用CRISPR-Cas9系统敲除山羊基因组中β-乳球蛋白(BLG)基因,以实现在BLG基因座敲入人乳铁蛋白(h LF)基因,并进一步探讨了不同浓度RAD51蛋白激活剂(RS-1)对同源重组效率的影响。首先针对山羊BLG的第一外显子设计并构建了sg RNA和Cas9共表达载体p Cas9-sg BLG,将该载体转染至山羊耳成纤维细胞,利用PCR和T7EN1法验证了其基因组编辑活性;然后进一步构建了BLG基因打靶载体p BHA-h LF-NIE(包含NEO/EGFP);将该打靶载体与p Cas9-sg BLG载体共转染至山羊耳成纤维细胞,分别用0、5、10和20μmol/L RS-1处理细胞,分析了绿色荧光蛋白的表达效率;同时用800μg/m L G418对不同浓度RS-1处理后的细胞进行筛选,挑取EGFP阳性细胞克隆,进一步通过PCR和测序鉴定h LF定点敲入的阳性细胞克隆。结果显示:设计的sg RNA编辑山羊BLG位点的效率为25%-31%;报告基因的表达效率提示RS-1可以促进基因敲入效率的提高,其效率与RS-1浓度呈正相关,20μmol/L RS-1处理组的效率是对照组的3.5倍;利用G418筛选h LF敲入阳性细胞克隆后,当RS-1浓度为0-10μmol/L时,h LF敲入效率随着RS-1浓度增加而升高,在10μmol/L时阳性克隆率最高为32.61%,然而在20μmol/L时敲入阳性克隆率下降至22.22%,且衰老细胞克隆增多。以上结果表明,利用CRISPR-Cas9系统可以实现在山羊耳成纤维细胞中敲除BLG基因和敲入h LF基因,且适宜浓度的RS-1可以显着提升基因敲入效率,本试验为高效利用CRISPR-Cas9系统获得基因敲入的细胞提供了参考依据。(本文来源于《生物工程学报》期刊2017年08期）
黄继红,周学军[5]（2017）在《老年鼻咽癌患者血浆Ras相关区域家族1A基因、血清转化生长因子-β1及乳铁蛋白的表达及相关性》一文中研究指出目的探讨血浆Ras相关区域家族(RASSF)1A基因、转化生长因子(TGF)-β1及乳铁蛋白(LTF)在老年鼻咽癌(NPC)患者及其不同临床病理特征中的表达及相关性。方法 NPC患者50例为NPC组,鼻咽炎患者50例为鼻咽炎组,健康志愿者50例为正常对照组。3组采用定量甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)(RQ-MSP)检测RASSF1A基因、血清TGF-β1及LTF的表达情况,并分析相关性。结果 NPC组血浆中RASSF1A、TGF-β1及LTF的表达与鼻咽炎组、正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)。NPC组血浆RASSF1A、TGF-β1及LTF水平:Ⅰ期与其他期差异显着(P<0.01);Ⅲ期与Ⅳa期、Ⅳb期差异有统计学意义(P<0.01);未分化癌与鳞癌、腺癌差异显着(P<0.01);无淋巴结转移与有淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.01),颈部和远处淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RASSF1A、TGF-β1及LTF在老年鼻咽癌患者血清中表达呈上调或下降趋势,与鼻咽癌分期、病理类型及淋巴结转移相关。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2017年13期）
徐晟[6]（2017）在《重组人乳铁蛋白转基因奶山羊的制备及表达产物提取和抗菌活性研究》一文中研究指出乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是一种铁结合性糖蛋白,因其生物活性功能广泛,已被应用于医药开发、食品加工、保健品生产等领域。目前,国内外市场上销售的乳铁蛋白及其相关产品主要从牛乳中分离纯化所得。因其来源的限制,天然乳铁蛋白的产量已经无法满足人们日益增长的需求。因此,利用转基因技术生产重组人乳铁蛋白(RecombinentHuman Lactoferrin,rhLF)作为天然乳铁蛋白的替代品,已经成为研究和开发乳铁蛋白的主要途径。本研究中,使用本实验室保存的乳腺特异性表达重组人乳铁蛋白载体菌株,通过扩增后获得乳腺特异性表达载体(PCL25/hLF),双酶切并切胶回收目的基因片段(zpz-1);利用细胞显微注射技术,将zpz-1注射入雌性奶山羊胎儿成纤维细胞(N31);通过G418筛选,获得16株胎儿成纤维细胞单克隆细胞株。经PCR检测,其中7株整合PCL25/hLF基因。以其中1株(N31zpz-1-13)作为供核细胞,使用核移植、电融合等技术获得重构胚140枚,移植136枚,共移植9只受体,其中2只受体于移植后第22周分娩,获得2只雌性奶山羊,分别编号为zp-71和zp-72,只有zp-71健康成长至体成熟。经PCR检测,zp-71整合PCL25/hLF基因。待zp-71体成熟后发情时进行人工配种,于配种后第22周分娩,连续收集30天羊乳。ELISA检测zp-71羊乳清中rhLF的表达水平;使用AKATA蛋白纯化系统,运用阳离子交换层析技术分离纯化rhLF;以青链霉素、人初乳浓缩乳清为阳性对照,以正常羊乳浓缩乳清为阴性对照,以纯化的rhLF(lmg)、转基因奶山羊zp-71的浓缩乳清为实验组,制备药敏纸片,进行抑菌试验。ELISA检测zp-71乳清中rhLF的结果显示:转基因奶山羊zp-71分娩后连续30天的乳清中均含有rhLF。对比天然乳铁蛋白的表达特点,本验室保存的PCL25/hLF表达载体(含β-casin与CMV复合启动子)能在转基因羊乳腺中有效稳定地表达。离子交换层析的结果显示:以0.5MNaCl-HAC-Tris作为洗脱液进行洗脱,得到两个洗脱峰。SDS-PAGE电泳结果及凝胶成像结果显示:洗脱峰Ⅰ中含有多条带,洗脱峰Ⅱ为单一条带;Western Blotting结果显示:洗脱峰Ⅱ中的产物为rhLF。抑菌试验结果显示:转基因奶山羊zp-71的乳清及其纯化产物均具有抑菌活性,4h的抑菌圈分别为1.70cm和1.30cm。本研究表明:应用实验室前期构建的PCL25/hLF乳腺特异性表达载体制备的转基因山羊具有乳腺特异表达rhLF功能;并且,重组人乳铁蛋白表达产物可以从转基因羊乳汁中提取;提取获得的rhLF和浓缩的转基因乳清抑菌试验显示均有抑菌活性。由此证明:人乳铁蛋白基因转基因山羊乳腺中表达的重组人乳铁蛋白在乳汁中单独存在,而且具有与天然人乳铁蛋白相似的抗菌活性。研究也表明:运用以HAC-Tris-NaCl为缓冲体系进行洗脱的阳离子交换层析技术可有效提取转基因羊乳中的rhLF,这一结果在国内外尚未见报道。同时此方法的建立也为转基因奶山羊乳中重组人乳铁蛋白的提取建立了技术基础,为今后工业化大规模分离纯化rhLF提供参考。(本文来源于《扬州大学》期刊2017-06-14）
李富荣,王希彪,狄生伟,崔世泉,童县伟[7]（2017）在《猪乳铁蛋白基因多态性与仔猪腹泻及生产性能关系的研究》一文中研究指出试验采用PCR-RFLP结合测序的方法,检测民猪和长白猪群体乳铁蛋白基因多态性,并分析母猪乳铁蛋白基因多态性对仔猪腹泻和生长性状的影响。结果表明:猪乳铁蛋白基因第12外显子第140位发生C→T的同义突变。民猪与长白猪群体中该位点皆存在AA,BB,AB叁种基因型,两群体基因型分布差异显着(P<0.05),母猪不同基因型对部分仔猪腹泻和生长性状有显着影响(P<0.05)。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2017年01期）
周政,刘高成,杨泽辉,李琦,徐江[8]（2016）在《乳铁蛋白基因rs1126478多态性与龋病易感性的Meta分析》一文中研究指出目的系统评价乳铁蛋白(LTF)基因rs1126478多态性与龋病易感性的关系。方法计算机检索Pubmed,Web of science,Embase,EBSCO,Springerlink,中国知网(CNKI),维普(VIP),万方及中国生物医学文献数据库(CBM),收集发表的有关LTF基因rs1126478多态性与龋病发病风险的文献,以OR及其95%CI为效应指标,运用RevMan 5.2及Stata 12.0软件进行统计学分析,并进行偏倚评估及敏感性分析。结果共纳入5个病例对照研究,累积病例720例,对照412例,Meta分析结果显示,4种模型中LTF基因rs1126478多态性与龋病发病风险相关性无统计学意义(GG+AGvs.AA:P=0.75,OR=0.93,95%CI=0.59~1.46;Gvs.A:P=0.88,OR=0.97,95%CI=0.68~1.38;GGvs.AA:P=0.84,OR=1.07,95%CI=0.57~1.99;GG vs.AG+AA:P=0.52,OR=1.12,95%CI=0.79~1.58),按人种进行亚组分析结果显示,在Caucasian及Asian人群中LTF基因rs1126478多态性与龋病发病风险相关性亦无统计学意义(P>0.05)。结论乳铁蛋白基因rs1126478多态性可能与龋病易感性无关。(本文来源于《重庆医学》期刊2016年09期）
万永杰,肖慎华,邓明田,张国敏,贾若欣[9]（2015）在《胚龄、季节和胚胎数量对转人乳铁蛋白基因克隆奶山羊生产效率的影响》一文中研究指出[目的]研究不同的胚龄、移植季节以及胚胎数量对转人乳铁蛋白基因(h LF)体细胞克隆山羊生产效率的影响。[方法]用奶山羊的转h LF基因成纤维细胞为供体细胞生产克隆胚胎,并以不同的胚龄、胚胎数量,在不同的季节移植给同期的受体山羊。[结果]移植1细胞期和2~8细胞期胚胎受体羊的妊娠率(分别是17.95%和28.57%)、产羔率(分别是12.82%和14.29%)显着高于移植桑椹胚、囊胚的受体羊(3.70%和0,P<0.05);转h LF基因克隆胚胎在秋季移植效率最高,虽然秋季和春季受体羊妊娠率(分别是19.57%和18.18%)与冬季(10.34%)差异不显着,但秋季受体羊产羔率(13.04%)显着高于冬季(1.72%,P<0.05);虽然移植10~20枚克隆胚胎的受体羊妊娠率(18.18%)显着高于移植5~9枚胚胎的受体羊(7.89%),但是由于其流产率高,两者产羔率差异并不显着(7.89%vs 6.36%,P>0.05)。[结论]转基因克隆山羊胚胎移植试验的最适季节是秋季,最好移植激活后体外培养2 d内的胚胎。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2015年06期）
宋绍征,朱孟敏,袁玉国,荣耀,徐晟[10]（2016）在《转录激活因子样效应物核酸酶介导的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳铁蛋白基因定点整合》一文中研究指出为了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点整合人乳铁蛋白(hLF)基因。首先针对山羊BLG第3外显子识别位点设计了1对特异性TALEN-3-L/R质粒对;同时,构建了含有1个HSV-TK负筛选基因的hLF基因打靶载体BLC14-TK。TALENs质粒对转染山羊胎儿成纤维细胞,2μg/m L嘌呤霉素筛选3 d,PCR扩增产物测序来验证其切割DNA活性。打靶载体BLC14-TK与TALEN-3-L/R质粒对共转染山羊胎儿成纤维细胞,经700μg/m L G418和2μg/m L GCV共筛选药物抗性细胞株;通过整合检测和同源重组检测来筛选hLF基因打靶细胞株;BLG~–/hLF~+打靶细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植。结果为:TALEN-3-L/R致突变率为25%-30%;获得BLG~–/hLF~+打靶细胞6株;共制作重构胚胎335枚,移植受体山羊23只,B超检测到30-35 d的妊娠受体9只(妊娠率39.1%),其中1只50日龄克隆胎儿验证为BLG~–/hLF~+基因型。以上结果表明获得BLG基因座定点整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,为培育羊乳中含低致敏原和富含hLF的山羊新品系奠定了基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2016年03期）
人乳铁蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:克隆人乳铁蛋白c DNA基因,进而为重组人乳铁蛋白的制备奠定基础。方法:从人静脉血中性粒细胞中提取得总RNA,RT-PCR法扩增人乳铁蛋白c DNA基因后,将其插入到克隆载体p JET1.2,DNA测序法鉴定基因序列。结果:从人静脉血中性粒细胞中分离获得了总RNA,RT-PCR法克隆了人乳铁蛋白c DNA基因,经过DNA测序分析鉴定,其结果与Gene Bank中序列完全一致。结论:成功从人静脉血中性粒细胞中克隆扩增了人乳铁蛋白c DNA基因,为重组人乳铁蛋白的制备奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人乳铁蛋白基因论文参考文献
[1].王建珏.奶山羊乳铁蛋白（LF）基因克隆及启动子区转录活性研究[D].西北农林科技大学.2018
[2].嵇雅茹,王雅楠,张宏波,张学明.人乳铁蛋白cDNA基因的克隆[J].包头医学院学报.2018
[3].秦毅,吕国英,张作法.转基因水稻中转人乳铁蛋白的抗氧化及免疫作用[J].浙江农业学报.2018
[4].周文君,郭日红,邓明田,王锋,张艳丽.RS-1提高CRISPR-Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因敲入效率[J].生物工程学报.2017
[5].黄继红,周学军.老年鼻咽癌患者血浆Ras相关区域家族1A基因、血清转化生长因子-β1及乳铁蛋白的表达及相关性[J].中国老年学杂志.2017
[6].徐晟.重组人乳铁蛋白转基因奶山羊的制备及表达产物提取和抗菌活性研究[D].扬州大学.2017
[7].李富荣,王希彪,狄生伟,崔世泉,童县伟.猪乳铁蛋白基因多态性与仔猪腹泻及生产性能关系的研究[J].黑龙江畜牧兽医.2017
[8].周政,刘高成,杨泽辉,李琦,徐江.乳铁蛋白基因rs1126478多态性与龋病易感性的Meta分析[J].重庆医学.2016
[9].万永杰,肖慎华,邓明田,张国敏,贾若欣.胚龄、季节和胚胎数量对转人乳铁蛋白基因克隆奶山羊生产效率的影响[J].南京农业大学学报.2015
[10].宋绍征,朱孟敏,袁玉国,荣耀,徐晟.转录激活因子样效应物核酸酶介导的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳铁蛋白基因定点整合[J].生物工程学报.2016
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