导读:本文包含了克隆和表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,转录,谷子,因子,锈菌,尺蠖,丝氨酸。
克隆和表达论文文献综述
李婉茹,张玲玲,张美溦,李若佼,李仰平[1]（2020）在《海湾扇贝促性腺激素释放激素基因克隆及表达分析》一文中研究指出促性腺激素释放激素(Gonadotropin Releasing Hormone,GnRH)是脊椎动物下丘脑-垂体-性腺轴的关键信号分子。近年来的研究显示,GnRH也存在于贝类等无脊椎动物,且在雌雄异体性别分化与繁殖中起重要作用,然而雌雄同体贝类GnRH的研究仍处于空白。本文以海湾扇贝为研究对象,利用RACE技术克隆获得GnRH的cDNA全长序列,该基因长1 335 bp,编码101个氨基酸,前体包含1个由24个氨基酸组成的信号肽以及1个具有酰胺化修饰的活性肽(QNFHYSNGWQP-amide)。GnRH在脑足神经节和脏神经节中均有表达,且在2015年10月—2016年1月,GnRH在脑足神经节中的表达量显着高于脏神经节(P<0.05);GnRH在两个神经节中的表达均呈现先上升后下降的趋势,峰值出现在11月份,推测可能与性腺发育启动有关。本研究为深入理解GnRH在贝类繁殖调控中的作用奠定了基础。(本文来源于《中国海洋大学学报(自然科学版)》期刊2020年02期）
杨延辉,董利军,梁忠喆,刘通,张炜[2]（2019）在《结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的在大肠埃希菌(E. coli)中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Rv0674蛋白,纯化后制备多克隆抗体,并检测抗体效价。方法用PCR技术从MTB H37Rv基因组中扩增Rv0674基因,克隆至p EASYBlunt E1表达载体后,转化入E. coli BL21(DE3)中,用优化后的IPTG诱导表达条件表达Rv0674蛋白,His trap TM HP亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白腹腔注射BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体效价及特异性。结果成功获得了Rv0674序列正确的重组质粒p EASY-E1-Rv0674,挑选出了高表达Rv0674基因的菌株,确定的最适表达条件为1. 0 mmol/L IPTG 28℃诱导表达8 h,获得了相对分子质量约26 500的可溶性蛋白;免疫BALB/c小鼠后,能刺激小鼠产生多克隆抗体,获得的抗血清具有良好的抗原结合特性,且效价大于1∶51 200。结论成功获得了高纯度的Rv0674蛋白,并首次制备出小鼠抗Rv0674蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Rv0674蛋白的功能和临床诊断结核病(tuberculosis,TB)的应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年12期）
齐彤辉,高萌,袁阳阳,李明军,马锋旺[3]（2019）在《苹果酸度相关基因MdPH1的克隆、表达及亚细胞定位分析》一文中研究指出以苹果属(Malus)植物沧江海棠(M. ombrophila Hand.-Mazz)的果实为材料,对其发育过程中苹果酸的含量进行测定,并结合转录组测序的方法筛选控制果实酸度的候选基因。结果显示:MdPH1候选基因的编码区包含2829 bp,编码942个氨基酸;基因组序列全长为4269 bp,包含8个外显子和7个内含子。对10份苹果种质资源中PH1基因序列的分析结果表明,该基因序列中存在22个单核苷酸多态性(SNP),其中13个位于内含子区,9个位于外显子区;位于最后一个外显子上SNP(G/A)的变异导致了编码氨基酸从缬氨酸变为异亮氨酸。MdPH1蛋白包含8个跨膜结构域,其中蛋白N端包含3个跨膜结构域,C端包含5个跨膜结构域。系统进化分析结果显示,苹果中的PH家族成员与梨(Pyrus communis L.)中的PH家族成员聚集成一簇。组织特异性表达结果发现,MdPH1基因在苹果果实中的表达量最高,其次是叶、花和根,茎中表达量最低。亚细胞定位分析表明MdPH1蛋白定位于液泡膜上。(本文来源于《植物科学学报》期刊2019年06期）
张新,陈成聪,杜琴,李喜旺,孙晓玲[4]（2019）在《茶尺蠖丝氨酸蛋白酶基因EoSP1的克隆、时空表达及对饥饿的表达响应》一文中研究指出丝氨酸蛋白酶是鳞翅目昆虫消化系统中一类重要的蛋白酶。本研究从茶尺蠖(Ectropis obliqua)中克隆到一条丝氨酸蛋白酶基因EoSP1并分析了其结构特征和表达特性。EoSP1基因序列全长858 bp,编码285个氨基酸,预测蛋白分子量为29.53 kDa,等电点为5.44。经与其他丝氨酸蛋白酶比对,EoSP1含有保守的丝氨酸蛋白酶催化位点(H95,A161和S328)及蛋白互作结构域,与蓓带夜蛾(Mamestraconfigurata)中SPs亲缘关系较近。进一步获得了与EoSP1-GST融合蛋白大小接近的目的蛋白。qRT-PCR分析发现,EoSP1在幼虫期的表达显着高于成虫、蛹和卵期,并在幼虫中肠中特异性表达;饥饿处理后EoSP1表达下降,恢复饲喂后表达量接近对照组。以上结果为茶尺蠖消化酶功能解析及抗虫新靶点的筛选提供了依据。(本文来源于《茶叶科学》期刊2019年06期）
丁旭,王雅慧,李彤,张榕蓉,徐志胜[5]（2019）在《胡萝卜DcPSY2基因克隆及其在非生物胁迫响应中的表达分析》一文中研究指出类胡萝卜素(carotenoids)作为一种重要的营养物质,广泛存在于胡萝卜(Daucus carota)中。番茄红素(lycopene)是一种主要的类胡萝卜素,对植物生长发育和逆境响应有重要作用。八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase, PSY)是番茄红素合成的关键酶之一。利用RT-PCR (reverse transcription PCR)技术从胡萝卜'君川红'中克隆获得ORF长为1 317 bp、编码438个氨基酸的DcPSY2基因(GenBank No. NM_001329167.1)。将DcPSY2与其他17种植物中PSY蛋白的氨基酸序列进行多重比对,结果显示其总体相似性为82.22%,可见PSY蛋白是高度保守的蛋白质。进化关系表明,胡萝卜DcPSY2蛋白与红木(Bixa orellana) PSY蛋白进化关系最近。胡萝卜DcPSY2蛋白是亲水性、非分泌蛋白,且无信号肽,属于类异戊二烯合成C1超级家族(isoprenoid biosyn C1 superfamily)成员,在各细胞器中均有分布。二级结构预测表明,胡萝卜DcPSY2由53.65%的α-螺旋、5.48%的β-折迭、12.79%的延伸主链和28.08%的随机卷曲组成。qRT-PCR结果显示,DcPSY2基因在高温(38℃)、低温(4℃)、干旱(200 g/L PEG6000)和高盐(200 mmol/L NaCl) 4种非生物胁迫下均有明显响应。在高温和高盐胁迫下,DcPSY2基因在处理2 h后表达量达到峰值;在低温和干旱胁迫下,DcPSY2基因的表达量在处理后1 h时显着上调(P<0.05)。本研究结果为DcPSY2基因在胡萝卜生长发育中的功能研究及其在抗逆育种中的应用研究提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
侯朔,高燕会,童再康[6]（2019）在《换锦花LsMYB5基因的克隆与表达分析》一文中研究指出换锦花(Lycoris sprengeri)属石蒜科石蒜属多年生草本植物,花色为红蓝复色,是良好的鲜切花、盆花、地被和园林造景材料,具有很高的商业价值。为丰富培育花色多样的换锦花品种,本研究以换锦花花瓣转录组信息为基础,采用反转录-PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)技术相结合成功克隆了长871 bp的换锦花R2R3-MYB转录因子5基因(R2R3-MYB transcription factor 5 gene, LsMYB5) c DNA序列(GenBank No. MK779710),开放阅读框681 bp,编码226个氨基酸,LsMYB5蛋白C端含有保守的乙烯类响应元件结合因子相关的两亲性抑制(ethylene-responsive element binding factor-associated amphiphilic repression, EAR)抑制结构域(pdLNLD/ELxiG/s)和锌指结构域(CX-(1-2) CX-(7-12) CX-(1-2)C),可能具有转录抑制功能。qRT-PCR分析表明,LsMYB5基因具组织特异性表达,主要在叶片中表达;在花瓣的凋谢期的表达量最高,在颜色不同的无性系中表达量具有显着性差异(P<0.05),推测LsMYB5的表达与换锦花花色形成有关。为了进一步分析LsMYB5基因功能,本研究构建了原核表达载体pET-30(a)-LsMYB5,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),成功获得异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)诱导的表达重组蛋白,并进行了His标签蛋白纯化。该研究结果可为进一步研究LsMYB5转录因子调控的换锦花花色形成相关结构基因的筛选提供理论依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
白辉,宋振君,宋丹丹,王永芳,全建章[7]（2019）在《谷子抗病相关基因SiRAR1的克隆及表达分析》一文中研究指出Mla12介导的抗性所需基因(required for Mla12-mediated resistance, RAR1)作为植物抗病信号途径中的重要元件,广泛参与植物的抗病反应。为研究谷子(Setaria italica)中SiRAR1的结构与表达特征,本研究以抗病材料'十里香'叶片cDNA和基因组DNA为模板,分别克隆到SiRAR1基因的CDS序列和启动子序列,利用生物信息学软件分析了其编码氨基酸的生物学特征,采用qRT-PCR分析该基因在谷子不同组织部位和谷子响应谷锈菌(Uromyces setariae-italicae)胁迫反应中的表达模式,用SDS-PAGE技术分析该基因的原核表达特征。结果表明,SiRAR1基因开放阅读框全长765 bp,编码254个氨基酸(GenBank No.MK814879),预测分子量为28.04 kD,理论等电点为8.13。该蛋白的最大二级结构为无规则卷曲,最小元件为β-转角。氨基酸同源性的系统进化分析表明,SiRAR1与同科植物的进化关系最近,其中与糜子(Panicum miliaceum)第12号染色体的基因假定蛋白C2845_PM12G15490 (hypothetical protein C2845_PM12G15490, GenBank No. RLM79685.1)同源性最高(92.44%)。qRT-PCR分析表明,SiRAR1基因在谷子的根、茎、叶、穗中均有表达,其中在根部的表达量最高,茎部表达量最低,孕穗期和抽穗期的穗部表达水平相近;在谷锈菌侵染处理下,SiRAR1基因在抗病材料'十里香'中于12 h开始上调表达,至36 h表达量达到峰值,在感病材料'豫谷1号'中于96 h上调表达,且在'十里香'中的表达量峰值为'豫谷1号'中的3倍(P<0.01),在豫谷1号中的表达量峰值为'十里香'中的1.6倍(P<0.05),表明较感病植株相比,SiRAR1基因在抗病植株中的上调表达时间更早、持续时间更长、表达量上调幅度更强,推测SiRAR1基因可能在谷子抗病反应的早期起正调控作用。构建的原核表达载体pET30a-SiRAR1经0.1和0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)诱导均能表达出表观分子量约为33 k D的SiRAR1融合蛋白。上述实验结果为进一步研究SiRAR1基因功能与谷子抗病机制提供了重要的理论依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
孙婷婷,刘增才,王世新,王旭彤,邹莉[8]（2019）在《桑黄HMGS基因克隆、分子特性及差异表达分析》一文中研究指出目的对参与桑黄叁萜合成途径的关键酶羟甲基戊二酰辅酶A合酶(3-hydroxy-3-methylglutaryCoAsynthase,HMGS)进行基因全长克隆、分子特性及差异表达分析研究。方法采用RACE技术克隆HMGS基因全长,并对其序列进行生物信息学分析;构建桑黄HMGS基因到表达载体pET-32a (+)上,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达后SDS-PAGE检测;用荧光定量PCR的方法分析其不同发育阶段表达特性。结果 HMGS基因cDNA全长为1 930 bp,包含1个1 458 bp的完整开放阅读框,编码485个氨基酸。该基因编码蛋白的相对分子质量约为52 750,理论等电点是5.60,为亲水性蛋白,不具有跨膜结构,不含信号肽序列;系统发育分析表明,桑黄HMGS与地中海拟层孔菌Fomitiporia mediterranea中的HMGS同源性最高,属于一个分支。SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小与预测的蛋白相对分子质量基本一致。HMGS基因的转录水平在桑黄不同发育阶段呈动态变化,该基因在菌丝体阶段的转录水平要高于原基及子实体阶段的转录水平。HMGS基因的最高转录水平出现在第14天,为对照第5天的2.33倍。结论 HMGS基因的分子鉴定为进一步解析该基因在桑黄叁萜类物质合成代谢途径中的分子调控作用奠定基础。(本文来源于《中草药》期刊2019年23期）
孙金辉,胡哲,初晓雨,郭奎,王晓钧[9]（2019）在《马CD63分子的克隆与可溶性表达》一文中研究指出CD63是巨噬细胞表面的跨膜蛋白,已经证实其对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-Ⅰ)在人巨噬细胞中的复制有重要作用。为了探讨马传染病病毒与巨噬细胞的相互作用,对马巨噬细胞的表面蛋白(CD63)进行体外表达,通过跨膜区分析软件分析CD63蛋白的跨膜结构,利用分子克隆技术构建不同片段大小的重组质粒,并进行原核表达及诱导条件的优化。结果表明:全长CD63在原核系统中不表达,截短CD63蛋白为包涵体表达,当低温诱导时截短CD63可获得可溶性表达,大小约为20 ku。说明成功获得CD63可溶性表达蛋白。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年23期）
于佳玉,朱梦瑶,许丽,刘志君,吕文秀[10]（2019）在《青岛百合花发育E类基因LtSEP3的克隆及表达分析》一文中研究指出为研究青岛百合花发育问题的分子调控机理,以青岛百合花朵为材料,克隆得到一个MADS-box家族E类基因SEPALLATA3(SEP3),命名为LtSEP3,开放阅读框为687bp,预测编码228个氨基酸。生物信息学分析结果表明,LtSEP3蛋白的相对分子质量为26 179.58D,理论等电点在8.68,不稳定系数为33.66,属于稳定蛋白,总平均亲水性(GRAVY)为-0.819,脂肪系数为79.96。氨基酸序列比对显示,LtSEP3基因编码的蛋白具有典型的MADS结构域和K-box区。LtSEP3与同为百合属植物的岷江百合的MADS蛋白的氨基酸序列亲缘关系最近;qRT-PCR分析显示,LtSEP3具有组织表达特异性,主要在花中表达,在鳞茎、茎、叶中几乎不表达,在花朵开放的中后期,LtSEP3表达量达到峰值。本研究认为,LtSEP3基因可能在青岛百合花朵开放和花发育过程中具有重要作用。(本文来源于《青岛农业大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
克隆和表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的在大肠埃希菌(E. coli)中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Rv0674蛋白,纯化后制备多克隆抗体,并检测抗体效价。方法用PCR技术从MTB H37Rv基因组中扩增Rv0674基因,克隆至p EASYBlunt E1表达载体后,转化入E. coli BL21(DE3)中,用优化后的IPTG诱导表达条件表达Rv0674蛋白,His trap TM HP亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白腹腔注射BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体效价及特异性。结果成功获得了Rv0674序列正确的重组质粒p EASY-E1-Rv0674,挑选出了高表达Rv0674基因的菌株,确定的最适表达条件为1. 0 mmol/L IPTG 28℃诱导表达8 h,获得了相对分子质量约26 500的可溶性蛋白;免疫BALB/c小鼠后,能刺激小鼠产生多克隆抗体,获得的抗血清具有良好的抗原结合特性,且效价大于1∶51 200。结论成功获得了高纯度的Rv0674蛋白,并首次制备出小鼠抗Rv0674蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Rv0674蛋白的功能和临床诊断结核病(tuberculosis,TB)的应用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆和表达论文参考文献
[1].李婉茹,张玲玲,张美溦,李若佼,李仰平.海湾扇贝促性腺激素释放激素基因克隆及表达分析[J].中国海洋大学学报(自然科学版).2020
[2].杨延辉,董利军,梁忠喆,刘通,张炜.结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备[J].中国生物制品学杂志.2019
[3].齐彤辉,高萌,袁阳阳,李明军,马锋旺.苹果酸度相关基因MdPH1的克隆、表达及亚细胞定位分析[J].植物科学学报.2019
[4].张新,陈成聪,杜琴,李喜旺,孙晓玲.茶尺蠖丝氨酸蛋白酶基因EoSP1的克隆、时空表达及对饥饿的表达响应[J].茶叶科学.2019
[5].丁旭,王雅慧,李彤,张榕蓉,徐志胜.胡萝卜DcPSY2基因克隆及其在非生物胁迫响应中的表达分析[J].农业生物技术学报.2019
[6].侯朔,高燕会,童再康.换锦花LsMYB5基因的克隆与表达分析[J].农业生物技术学报.2019
[7].白辉,宋振君,宋丹丹,王永芳,全建章.谷子抗病相关基因SiRAR1的克隆及表达分析[J].农业生物技术学报.2019
[8].孙婷婷,刘增才,王世新,王旭彤,邹莉.桑黄HMGS基因克隆、分子特性及差异表达分析[J].中草药.2019
[9].孙金辉,胡哲,初晓雨,郭奎,王晓钧.马CD63分子的克隆与可溶性表达[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[10].于佳玉,朱梦瑶,许丽,刘志君,吕文秀.青岛百合花发育E类基因LtSEP3的克隆及表达分析[J].青岛农业大学学报(自然科学版).2019
论文知识图
