王凤林1何慧丽1刘华1李瑾瑾2万林春（通讯作者）
（1武警总医院北京100039）
（2北京中医药大学北京100102）
（3江西省药品检验检测研究院/江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心江西南昌330029）
【摘要】目的：控制乳块消片的质量。方法：采用HLPC方法测定。结果：确定了9个共有峰，36批样品指纹图谱的相似度均在0.90以上。结论：所建立的指纹图谱简便可靠，可用于乳块消片的质量控制。
【关键词】乳块消片；指纹图谱；初步研究
【中图分类号】R286【文献标识码】B【文章编号】1003-5028（2015）5-0161-02
乳块消片功能为疏肝理气，活血化瘀，消散乳块，其质量收载于《中国药典》2010年版一部。现标准含量测定中指标控制成分少，因而采用指纹图谱对乳块消片中的橘叶、丹参、王不留行等药味进行了研究，经方法学验证，方法可行，可作为相应的控制标准。
1．仪器设备、试剂试药、样品、与对照品
仪器设备：Agilent1100四元低压梯度泵系列，Chemstation化学工作站。
试剂：乙腈为色谱纯、水为Milli-Q制备的纯化水；磷酸为分析纯。
乳块消片药店采购，共34批。丹参素钠（批号：110855-201311）、原儿茶醛（批号：110810-200506）、王不留行黄酮苷（批号：111853-201102）、丹酚酸B（批号：111562-201212）、橙皮苷（批号：110721-201316）对照品由中国食品药品检定研究院提供。
2．方法与结果
2.1色谱条件TechmateC18色谱柱；检测波长：282nm；流速：1.0mL/min；乙腈(A)-0.2%的磷酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱(0～30min，5%→20%A;30～40min，20%A→30%A;40～50min，30%A;50～60min,30%A→5%A)。
2.2供试品溶液的制备
取本品10片，除去包衣，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理60分钟放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3对照品溶液的制备
取丹参素钠、原儿茶醛、王不留行黄酮苷、丹酚酸B、橙皮苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含丹参素钠80?g、丹酚酸B80?g、橙皮苷80?g、含原儿茶醛与王不留行黄酮苷各40?g的溶液，即得。
2.4精密度试验
取同一供试品(S1，批号120205)，按2.2项下的方法，制备供试品溶液。然后按2.1项下条件进样，测定，连续6次。测得其各共有峰的相对保留时间RSD均＜2%，相对峰面积RSD＜5%，表明仪器精密度良好。
2.5稳定性试验
取同一供试品(同上)，按2.2项下的方法，制备供试品溶液。分别于制备后0，2，6，4，8，10，12，24h分别进样，按2.1项下色谱条件测定，其各共有峰的相对保留时间RSD均＜2%，相对峰面积RSD＜5%，结果表明供试品溶液放置24h稳定。
2.6重复性试验
取同一供试品(同上)，按2.2项下的方法，制备6份供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，测得各共有峰的相对保留时间RSD均＜2%，相对峰面积RSD＜5%，表明该方法重复性良好。
3结果与分析
3.1共有峰的确定对比所测定20批次乳块消片样品色谱图，见图1，根据其相对保留时间，从中选定了9个共有峰作为的乳块消片指纹图谱共有峰，见图2。
3.2参照峰的选择
精密吸取丹参素钠、原儿茶醛、王不留行黄酮苷、丹酚酸B、橙皮苷对照品混合对照品溶液、供试品溶液各10μL，按2.1项下色谱条件测定，发现各成分在样品图谱中均有体现，2号峰为丹参素钠;3号峰为原儿茶酫;4号峰为王不留行黄酮苷;5号峰为橙皮苷;8号峰为丹酚酸B，见图3。8号峰丹酚酸B峰高度适度，分离度好，保留时间适中，可以作为参照峰。
3.3相似度测定
取20批乳块消片，按正文[指纹图谱]项下方法制成供试品溶液，色谱测定，记录色谱图。将测定色谱图，分别在Agilent色谱工作站进行积分。逐个以cdf数据文件的形式，导出谱图的AIA文件。将导出的上述20批乳块消片色谱图AIA文件，分别导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（V2.0）。
将导入的20批乳块消片供试品色谱图，对其中9个主要色谱峰进行色谱峰匹配，采用自动匹配生成对照指纹图谱，并导出对照指纹图谱的电子文件乳块消片对照指纹图谱文件.scp，结果见表1。
34批乳块消片供试品色谱图经计算机相似度计算软件与乳块消片对照指纹图谱进行比较，结果除1批（该批未检出丹酚酸A）外，其他相似度结果均大于0.90，从目前的数据说明乳块消片批与批之间有较好的一性。综合以上数据，结合生产的可操作性，暂定相似度不低于0.90。
4讨论
4.1检测波长的选择
因丹参素钠、原儿茶酫、丹酚酸B、橙皮苷等的最大吸收波长为282±2nm（分别见图1～5），而王不留行黄酮苷则在270nm有最大吸收，为使各峰的响应值都较大，试验采用了282nm作为检测波长。
4.2提取方法与时间的考察
采用超声处理15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、加热回流1小时等方法进行提取，结果，四种提取方式供试品均能达到良好的分离，考虑操作方便，故确定本品提取方法为超声处理60分钟。
参考文献：
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