传染性肌肉坏死病毒快速检测方法的建立

传染性肌肉坏死病毒快速检测方法的建立

论文摘要

为建立一种检测传染性肌肉坏死病毒的荧光定量RT-PCR方法,利用GenBank中收录的该病毒的全基因序列,设计特异性的引物与TaqMan探针,并构建包含目的序列的质粒作为标准品,经过优化反应参数建立检测传染性肌肉坏死病毒的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,建立的方法特异性良好,对其他8种病毒核酸无扩增,扩增总时长90 min。该方法的灵敏度达到220 copies/μL。重复性好,批内变异系数为0.3%~0.7%。外标法定量所需的标准曲线方程为y=﹣3.404x+37.21,相关系数R2=0.997,扩增效率为96.7%。应用建立的方法对15批南美白对虾样品进行检测,未检出阳性。试验结果表明,所建立的实时荧光定量RT-PCR方法特异、灵敏、可定量,适用于对虾样品中传染性肌肉坏死病毒的检测。

论文目录

  • 0 引言
  • 1 材料与仪器
  •   1.1 材料
  •   1.2 仪器
  •   1.3 主要试剂与试剂配制
  • 2 试验方法
  •   2.1 引物、探针及IMNV质粒参照设计
  •   2.2 大肠杆菌质粒DNA的提取与验证
  •   2.3 引物特异性验证
  •   2.4 退火、延伸温度优化
  •   2.5 引物浓度优化
  •   2.6 探针浓度优化
  •   2.7 方法的灵敏度、定量标准曲线及重复性
  •   2.8 方法在实际样品中的应用
  • 3 试验结果
  •   3.1 质粒DNA验证结果
  •   3.2 引物特异性验证结果
  •   3.3 退火、延伸温度的优化结果
  •   3.4 引物浓度优化结果
  •   3.5 探针浓度优化结果
  •   3.6 灵敏度、定量标准曲线、重复性试验结果
  •   3.7 方法在实际样品中的应用结果
  • 4 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨苗,林华,董新燕,陈世界,方智,张婧,安微,薛昌华,张妙

    关键词: 传染性肌肉坏死病毒,检测方法,荧光定量

    来源: 畜牧兽医科学(电子版) 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 成都海关技术中心,四川大学华西医学院

    基金: 成都海关科技项目(SK201702)

    分类号: S852.65

    页码: 8-12

    总页数: 5

    文件大小: 1501K

    下载量: 51

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