chTLR3在传染性法氏囊病病毒感染中的作用及gga-miR-6655-5p对其调控的分子机制

chTLR3在传染性法氏囊病病毒感染中的作用及gga-miR-6655-5p对其调控的分子机制

论文摘要

为了探讨鸡Toll样受体3(chicken toll-like receptor 3,chTLR3)在传染性法氏囊病病毒(infectious bursal dis-ease virus,IBDV)感染中的作用及microRNA(miRNA)对其调控的分子机制,本研究用IBDV感染DF-1细胞,qRT-PCR和Western blot分析表明IBDV感染可使DF-1细胞中chTLR3的表达水平显著升高。chTLR3激活表达后可抑制IBDV的复制,进一步分析其机理发现,chTLR3表达上调可激活IFN-β启动子和抗病毒天然免疫基因Mx启动子的活性及NF-κB和IRF-7信号通路。用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现gga-miR-6655-5p可作用于chTLR3的3′UTR;qRT-PCR和Western blot分析表明gga-miR-6655-5p可以使chTLR3的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化。本研究表明:gga-miR-6655-5p可以作用于chTLR3的3′UTR负调控chTLR3的表达,抑制IFN-β启动子和Mx启动子活性,使IBDV在细胞中的复制水平提高。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 IBDV感染对chTLR3表达水平的影响
  •   1.2 chTLR3对IBDV复制及抗病毒天然免疫基因表达的影响
  •     1.2.1 chTLR3激动剂对IBDV复制的影响
  •     1.2.2 chTLR3激动剂对IFN-β启动子和Mx启动子活性的影响
  •   1.3 chTLR3对NF-κB和IRF-7信号通路的影响
  •   1.4 分析miRNA对chTLR3的调控作用
  •     1.4.1 生物信息学预测调控chTLR3的miRNA
  •     1.4.2 双荧光素酶报告系统分析miRNA与chTLR3 3′UTR的相互作用
  •     1.4.3 Western blot和qRT-PCR分析chTLR3的蛋白水平和mRNA水平
  •   1.5 chTLR3激动剂对DF-1细胞中调控chTLR3的miRNA表达的影响
  •     1.5.1 分析不同浓度chTLR3激动剂对miRNA表达的影响
  •     1.5.2 分析同一浓度chTLR3激动剂不同时间点对miRNA表达的影响
  •   1.6 miRNA过表达对IFN-β启动子和抗病毒天然免疫基因 (mgxovirusresistance gene, Mx) 启动子活性及IBDV复制的影响
  • 2 结果
  •   2.1 IBDV感染对chTLR3表达水平的影响
  •   2.2 chTLR3对IBDV复制及抗病毒天然免疫基因表达的影响
  •   2.3 chTLR3对NF-κB和IRF7信号通路的影响
  •   2.4 miRNA调控chTLR3的分子机制
  •   2.5 chTLR3激动剂对gga-miR-6655-5p表达的影响
  •   2.6 gga-miR-6655-5p对IFN-β启动子和Mx启动子活性及IBDV复制的影响
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 欧阳伟,钱晶,王晶宇,夏兴霞,潘群兴,王晓丽,诸玉梅,王永山

    关键词: 传染性法氏囊病,传染性法氏囊病病毒,抗病毒天然免疫

    来源: 中国兽医学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

    基金: 国家重点研发计划资助项目(2017YFD0500706,2016YFD0500800),国家自然科学基金资助项目(31772723,31572504),江苏省自然科学基金资助项目(BK20151366),江苏省农业科技自主创新资金资助项目(CX(16)1052)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.02.05

    页码: 215-222+233

    总页数: 9

    文件大小: 1894K

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