论文摘要
构建PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体,同时分析其在293T细胞中的过表达。将结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的DNA当成分析模板,对结核分枝杆菌脂蛋白A（LprA）基因实施扩展处理。通过连接慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro的T4酶,塑造pCDH-LprA。采用PCR测序完成阳性克隆载体的检测;采用重组质粒以及协同质粒融合转染293T细胞包装病毒,获取慢病毒颗粒上清液,通过梯度稀释法完成病毒滴度的检测,采用Western blot对病毒在293T细胞基因的表达实施检测。成功塑造PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体。病毒侵染的293T细胞内PVRL-2的表达量提升了100倍,PPARa的表达量提升4. 5倍。蛋白结构预测说明Necitn-2是包含信号肽的跨膜蛋白。PPARa表达量提升导致结核分枝杆菌相关基因的活化,提升机体免疫力,信号肽和跨膜结构说明LprA蛋白会同膜中蛋白受体融合,驱动下游脂代谢的信号通路。Mtb细菌的LprA脂蛋白能够控制巨噬细胞、促进细胞增长和吞噬能力。通常情况下,慢性病毒可以进行细胞侵染的种类较多,且慢病毒可以将表达载体整合到宿主细胞的基因组上,实现在宿主细胞上连续的目的基因表达。慢性病毒具有的这种特点被广泛应用于细胞体外实验中。因此将含有毒性的Mtb因子当成治疗结核病的疫苗,为结核病的治疗提供了可靠的分析依据,将LprA当成预防以及治疗结核病的药物靶点。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 沈凌筠,李翔,陆霓虹
关键词: 慢病毒,表达载体,构件,细胞,过表达
来源: 药物生物技术 2019年06期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 基础医学
单位: 昆明市第三人民医院结核三科,昆明市第三人民医院医学影像科,昆明市第三人民医院内一科
分类号: R378.911
DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20190603
页码: 481-484
总页数: 4
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