过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体中miR-330-3p的时-量变化

过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体中miR-330-3p的时-量变化

论文摘要

背景:前期实验已经证明过表达GATA-4骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的外泌体(exosomes)可以通过抑制心肌细胞凋亡,有效修复心肌梗死引起的心肌损伤,进一步发现在其外泌体中miRNA-330-3p明显高表达且功能涉及抗凋亡,提示miRNA-330-3p可能是外泌体修复心肌损伤的关键分子。目的:探讨过表达GATA-4小鼠BMSCs分泌的外泌体(BMSCsGATA-4-exosomes)中miR-330-3p的时-量变化。方法:在过表达GATA-4小鼠BMSCs培养体系内加入miR-330-3p模拟剂(miR-330-3p-mimic)及抑制剂(miR-330-3p-inhibitor)作为BMSCsGATA-4-miR-330-3p-mimic组及BMSCsGATA-4-miR-330-3p-inhibitor组,将BMSCsGATA-4组、BMSCsGATA-4-空载体组、BMSCs组、BMSCsGATA-4-miR-330-3p-mimic-空载体组及BMSCsGATA-4-miR-330-3p-inhibitor-空载体组作为混杂因素对照组。上述各组与基因开启剂强力霉素共培养24,48 h,提取各组细胞分泌的外泌体。采用RT-PCR检测各组细胞及其外泌体内miR-330-3p的表达量。采用光镜评估BMSCsGATA-4-miR-330-3p-mimic组、BMSCsGATA-4-miR-330-3p-inhibitor组与BMSCs组细胞在24,48 h的形态变化。结果与结论:①BMSCsGATA-4-miR-330-3p-mimic组细胞与外泌体内miR-330-3p的表达率最高,且随着时间推移其miR-330-3p的表达逐渐增多;②BMSCsGATA-4-miR-330-3p-inhibitor组细胞与外泌体内miR-330-3p的表达率最低,且随着时间推移其miR-330-3p的表达逐渐减少;③BMSCsGATA-4-miR-330-3p-mimic组、BMSCsGATA-4-miR-330-3p-inhibitor组与BMSCs组在24,48 h的形态无变化;④结果表明,BMSCs内miR-330-3p表达与外泌体内miR-330-3p表达正相关,BMSCs过表达miR-330-3p可以有效提高外泌体中miR-330-3p的表达,而静默miR-330-3p可以有效减少外泌体中miR-330-3p的表达。

论文目录

  • 文章快速阅读:
  • 文题释义:
  • 0引言Introduction
  • 1 材料和方法Materials and methods
  •   1.1 设计
  •   1.2 时间及地点
  •   1.3 材料
  •     1.3.1 实验试剂
  •     1.3.2 实验动物
  •   1.4 实验方法
  •     1.4.1 小鼠BMSCs的分离、培养及鉴定
  •     1.4.2 慢病毒载体及基因开启技术构建过表达GATA-4的BMSCs
  •     1.4.3 外泌体的提取
  •     1.4.4细胞分组及处理
  •     1.4.5 细胞培养形态变化
  •     1.4.6 RT-PCR评估细胞及外泌体内miR-330-3p的时-量变化
  •   1.5 主要观察指标
  •   1.6 统计学分析
  • 2 结果Results
  •   2.1 小鼠BMSCs三系分化结果
  •   2.2 慢病毒转染48h后小鼠BMSCs中GATA-4的表达
  •   2.3 采用ExoQuick-TC法提取外泌体的形态
  •   2.4 光镜评估细胞培养24, 48 h的形态改变
  •   2.5 采用RT-PCR法检测培养24 h各组细胞及外泌体内miR-330-3p的表达
  •   2.6采用RT-PCR法检测培养48 h各组细胞及分泌的外泌体内miR-330-3p的表达
  • 3 讨论Discussion
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 贺继刚,谢巧丽,王梓豪,严丹,张宏波

    关键词: 心肌梗死,心肌损伤,骨髓间充质干细胞,外泌体

    来源: 中国组织工程研究 2019年29期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 云南省第一人民医院昆明理工大学附属医院心脏大血管外科,云南省第一人民医院昆明理工大学附属医院重症医学科

    基金: 国家自然科学基金(81460073),项目负责人:贺继刚,云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项(2014FB089),项目负责人:贺继刚,云南省教育厅科学研究基金(2015Z051),项目负责人:贺继刚,中国博士后科学基金(2015M582764XB),项目负责人:贺继刚,成都医学院2015年度科研项目(CYZ15-18),项目负责人:贺继刚,云南省医学后备人才(H-201607),项目负责人:贺继刚~~

    分类号: R329.2

    页码: 4617-4622

    总页数: 6

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