N-糖酰胺酶PNGase H+最小糖结构作用底物的研究

论文摘要

为探究N-糖酰胺酶的最小糖结构作用底物,以丹磺酰氯标记的复杂型七糖糖肽标准品为初始底物,运用酶法合成的方法来获得目标底物,分别使用β-N-乙酰氨基己糖苷酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶和β-半乳糖基转移酶,制备出五种不同糖结构的糖肽底物,将制备的目标底物应用于N-糖酰胺酶PNGase H+最小糖结构作用底物的研究中。通过高效液相色谱检测PNGase H+对这5种糖肽底物的酶解效果。结果表明,得到五种不同结构的糖肽底物,Dabsyl-Gly-Glu-Asn-（GlcNAc2Man3）-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-（GlcNAc2Man）-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-（GlcNAc2）-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-（GlcNAc）-Arg及Dabsyl-Gly-Glu-Asn-（GlcNAc2Gal）-Arg,浓度分别为8.3、7.0、6.5、4.5、6.5 pmol/μL。N-糖酰胺酶PNGase H+能够作用糖单元数为二、三和五的糖肽底物,而对含有单个N-乙酰葡糖胺的糖肽几乎没有作用,进而推断PNGase H+的最小糖结构作用底物为带有N-乙酰壳二糖的糖肽。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.2 实验方法

1.2.1 糖肽合成相关酶的制备

1.2.1.1 β-甘露糖苷酶的表达与纯化

1.2.1.2 β-半乳糖基转移酶的表达与纯化

1.2.1.3 UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的表达与纯化

1.2.2 丹磺酰氯标记糖肽底物的酶法合成

1.2.2.1 五糖单元糖肽的制备

1.2.2.2 三糖单元糖肽的制备

1.2.2.3 二糖单元糖肽的制备

1.2.2.4 单糖单元糖肽的制备

1.2.2.5 新三糖单元糖肽的制备

1.2.3 丹磺酰氯标记糖肽底物的检测

1.2.4 N-糖酰胺酶PNGase H+对不同糖肽底物酶解活性的测定

1.2.4.1 N-糖酰胺酶PNGase H+的表达纯化

1.2.4.2 PNGase H+对不同糖肽底物酶解活性的检测

1.3 数据处理

2 结果与分析

2.1 丹磺酰氯标记的糖肽底物的合成

2.2 N-糖酰胺酶PNGase H+对不同丹磺酰氯标记糖单元糖肽底物的酶解作用

2.2.1 PNGase H+对五糖单元糖肽的酶解作用

2.2.2 PNGase H+对三糖单元糖肽的酶解作用

2.2.3 PNGase H+对二糖单元糖肽的酶解作用

2.2.4 PNGase H+对单糖单元糖肽的酶解作用

2.2.5 PNGase H+对三糖新单元糖肽的酶解作用

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡孝春,王婷,蔡志鹏,刘丽,JOSEF Voglmeir

关键词: 酶法合成,糖酰胺酶,最小糖结构,底物

来源: 食品工业科技 2019年11期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 化学,轻工业手工业

单位: 南京农业大学食品科技学院

基金: 国家自然科学基金面上项目(31871793)

分类号: O657.72;TS201.2

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.11.003

页码: 12-17+22

总页数: 7

文件大小: 970K

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N-糖酰胺酶PNGase H+最小糖结构作用底物的研究

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