猪圆环病毒3型Cap蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备

论文摘要

猪圆环病毒3型（porcine circovirus 3,PCV3）是新近被发现的病原,与之相关的疾病包括母猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、仔猪先天性震颤等。本研究采用PCR方法从PCV3/CN/GDLC1/2016株中扩增出衣壳蛋白（Cap）基因,对Cap基因进行序列分析并预测其二级结构,将去除信号肽序列的PCV3 Cap基因片段克隆到表达载体pET-32a（+）中,测序验证后转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行原核表达,经镍柱纯化表达蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体（MAb）。结果表明,重组PCV3 Cap蛋白为包涵体,大小约38 ku,最佳诱导时间为4 h。通过镍柱成功纯化PCV3 Cap蛋白,筛选获得A8F、C6D、C7E、C6E、C9C、C9E、B7D和C11C等8株能稳定分泌抗PCV3 Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果表明,A8F、C6D、C9E和B7D MAb均属于IgG2b亚类,C7E、C6E和C9C均属于IgM亚类,C11C属于IgG1亚类;A8F、B7D和C11C MAb效价均大于1∶64 000,C9E效价为1∶32 000,C6E效价为1∶8 000,C6D、C7E和C9C效价均为1∶1 000。经Western-blot分析,重组PCV3 Cap蛋白能与抗His标签抗体和抗PCV3 Cap蛋白MAb进行特异性免疫印迹反应,证实表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为今后PCV3的防控提供了技术支持和实验基础,具有重要的生产实践意义。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈桂华,孙媛,周玲,李迪,白杨,麦凯杰,高金铭,马静云

关键词: 猪圆环病毒型,蛋白,原核表达,纯化,单克隆抗体

来源: 中国兽医科学 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 华南农业大学动物科学学院

基金: “十三五”国家重点研发项目(2016YFD0501304)

分类号: S852.651

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0017

页码: 13-19

总页数: 7

文件大小: 1316K

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