一株特异腐质霉纤维素酶高产突变株的鉴定分析

一株特异腐质霉纤维素酶高产突变株的鉴定分析

论文摘要

高温真菌特异腐质霉(Humicola insolens)具有强大的纤维素酶分泌和纤维素降解能力,因此在生物质能源、饲料和纺织工业等领域中具有良好的应用前景。在特异腐质霉T-DNA随机插入突变体库中筛选得到一株纤维素酶高产菌株T53。在纤维素诱导培养条件下,突变株T53发酵上清中的滤纸酶活力、内切β-1,4葡聚糖酶活力、纤维二糖水解酶活力、β-葡萄糖苷酶活力以及木聚糖酶活力较野生型菌株分别提高了40%、60%、90%、10%、60%。蛋白电泳结果显示,T53菌株的胞外总蛋白特别是纤维素酶与半纤维素酶的分泌量较野生型菌株有显著提高。TAIL-PCR克隆鉴定了T53菌株中的T-DNA插入位点侧翼序列,结果表明T-DNA插入位点位于一个可能的C2H2型锌指蛋白类转录因子编码基因的上游启动子区域。这为揭示突变株T53中纤维素酶的高产分子机制奠定了重要基础,有助于理解特异腐质霉中纤维素酶的表达调控机制,为特异腐质霉纤维素酶高产工程菌的构建奠定了理论和技术基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验材料
  •     1.1.1 菌株、试剂
  •     1.1.2 培养基
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 随机突变体的筛选
  •     1.2.2 摇瓶发酵实验及纤维素酶活的测定
  •     1.2.3 蛋白电泳检测
  •     1.2.4 突变位点的鉴定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 纤维素酶高产突变菌株的快速筛选
  •   2.2 T53菌株的酶活鉴定
  •   2.3 T53菌株中T-DNA插入位点的鉴定分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈媛,李金阳,张宇宏,刘波,张志伟,徐欣欣,张伟

    关键词: 特异腐质霉,纤维素酶,随机插入,锌指蛋白

    来源: 生物技术进展 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 山西农业大学林学院,中国农业科学院生物技术研究所

    基金: 国家自然科学基金项目(31600065),山西省留学人员科技活动择优资助项目,山西农业大学青年拔尖创新人才支持计划(TYIT201402)资助

    分类号: Q93

    DOI: 10.19586/j.2095-2341.2019.0012

    页码: 185-190

    总页数: 6

    文件大小: 268K

    下载量: 108

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