导读:本文包含了解脂假丝酵母脂肪酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,脂肪,乳脂,芽孢,枯草,杆菌,乙醇。
解脂假丝酵母脂肪酶论文文献综述
温赛[1]（2012）在《亚罗解脂假丝酵母脂肪酶的高水平重组表达、分子体外进化研究及其在手性拆分中的应用》一文中研究指出脂肪酶(lipase, EC3.1.1.3)是一种重要的工业酶类,广泛应用于食品、油脂化工、制药和有机合成工业中,酶催化的反应具有条件温和、耗能低、原料要求低、成品质量高等优点,具有巨大的应用潜力。本实验室培育的亚罗解脂假丝酵母Candida sp.99-125所生产的胞外脂肪酶Lip2(YlLip2)活性高、催化活性强,已经被成功应用于油脂改性、多元醇酯合成、手性化合物拆分和可替代能源(生物柴油)合成等等,是工业生产中重要的催化剂。为了进一步促进和拓展假丝酵母脂肪酶YlLip2的商业化应用和生产,本文主要进行了如下工作：1、研究了固定化假丝酵母脂肪酶YlLip2用于外消旋α-苯乙胺的动力学拆分。本实验中,本文首次利用了含有机助剂的介质作为脂肪酶催化外消旋β-苯乙胺发生选择性酰基化反应的体系,实现了外消旋α-苯乙胺两种对映体的拆分。在动力学拆分的过程中,脂肪酶YlLip2具有R型对映体优先选择性且对映体过量值由于3%(v/v)极性有机助剂DMSO的加入得到了显着增长,对映体过量值(e.e.p)由0.35增长到了0.96,对映体比率(E)提高约20倍,最终达到190；而E值大于50一般即认为具有工业应用价值。这是该酶首次应用于手性胺类的拆分。2、由于芽孢杆菌具有高效、功能性表达外源蛋白的优势,本文研究了假丝酵母脂肪酶YlLip2在枯草芽孢杆菌(Bacillus su btilis)体系中的重组表达策略。首先,构建了基于游离型质粒的表达平台。通过分离、克隆了多个枯草芽胞杆菌内的表达元件,包括组成型启动子(PdegQ、PglpD和PaprE)和诱导型启动子(PamyE、 PsacB),以及α-淀粉酶的信号肽和终止子序列,构建了一系列新的分泌型表达质粒。质粒中插入脂肪酶基因YlLip2后,转化蛋白酶缺失型的枯草芽胞杆菌DL3p菌株,实现了重组脂肪酶的分泌性表达,胞外酶活表达水平达到0.2-4.5U/mg总蛋白。另一方面,本文研究并建立了一种新的枯草芽孢杆菌内染色体整合方法。以全长的单链DNA为电转化底物,利用枯草芽胞杆菌自身的同源整合机制,实现了简单、高效的在枯草芽孢杆菌染色体上进行外源基因的整合及目标基因的替换。以脂肪酶YlLip2为验证对象,通过多重融合PCR构建了两端具有同源臂的融合蛋白表达框,并通过不对称PCR、5’端硫代磷酸化修饰等手段制备了全长型的单链DNA表达框作为底物,电转化后实现了该脂肪酶表达框在染色体上amyE位点的基因替换(即双交换整合),且重组脂肪酶rYlLip2实现了功能性表达,酶活约为0.91U/mg总蛋白。该方法对枯草芽孢杆菌内重组蛋白表达、基因功能研究等都具有很大的意义。3、为了提高假丝酵母脂肪酶的表达水平,进一步降低其生产成本,本文研究了假丝酵母脂肪酶在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)宿主中的高效表达。重组表达质粒pPICZαA-Lip2转化毕赤酵母GS115菌株后整合于染色体中,在100μg/mL Zeocin平板上筛选得到的重组菌株#0-8号经甲醇诱导后,在5升发酵罐内产酶水平可达到4580U/mL发酵液,且发酵液中rYlLip2的表达量达到1.05g/L发酵液,重组蛋白含量可以占到总蛋白的50%以上。为了进一步提高重组蛋白的表达水平,本文又对重组毕赤酵母进行了多拷贝子的筛选。在500μg/mL Zeocin高抗生素浓度下成功筛选得到脂肪酶高产菌株#2-8号和#3-5号两个多拷贝菌株,摇瓶产酶实验证实#2-8号菌株胞外重组脂肪酶活性可达到350U/mL,与单拷贝子#0-8号菌相比提高了30%；而在5升发酵罐内发酵液中酶活达到11000U/mL,与#0-8号相比提高了150%。重组蛋白含量达到了2.3g/L发酵液,时空产量达到67900U/L/h。由此,重组假丝酵母脂肪酶YlLip2的表达量得到了显着提高,实现了重组脂肪酶的高水平表达。经Southern blot印迹杂交分析确定脂肪酶高产菌株#2-8和#3-5为多拷贝转化子,拷贝数约为3。4、亚罗解脂假丝酵母脂肪酶作为一种具有广泛应用价值的脂肪酶,其热稳定性却较差,妨碍了该酶的应用和产业化。在本实验中,我们以提高脂肪酶YlLip2的热稳定性为目标,分别利用分子定向进化技术、半理性设计方法B-FIT对酶进行改造,获得了多个热稳定性提高的突变酶,包括单点突变体F237C、A103S和T117G,将酶在50℃下的半衰期tl/2由2min提高至了5.5min。而后通过定点突变技术构建了多位点组合突变体并进行了分析、鉴定。其中,热稳定性最高的组合突变体T117G/F237C在50℃下的半衰期达到14.4min,与原始酶相比提高了7倍以上。通过蛋白质结构模拟,本文探讨了突变酶热稳定性提高的机制,为更深入揭示亚罗解脂假丝酵母脂肪酶的结构与功能关系提供了理论基础。(本文来源于《北京化工大学》期刊2012-12-09）
岳珂[2]（2007）在《解脂假丝酵母脂肪酶在苯乙醇手性拆分中的应用及菌种产酶发酵条件、酶学性质的研究》一文中研究指出脂肪酶(Lipase,EC3.1.1.3,甘油酯水解酶)是分解脂肪的酶。在动植物体和微生物中普遍存在,它是一类特殊的酯键水解酶,催化如下反应:甘油叁酯+水=甘油+游离脂肪酸。脂肪酶被广泛应用于酯合成、手性化合物的拆分、化工合成中间体的选择性基因保护、高聚物的合成、肽合成等方面,应用前景十分广阔。本文比较了不同菌株脂肪酶拆分α-苯乙醇的能力,并对解脂假丝酵母脂肪酶的拆分条件、菌株产酶条件、酶的初步纯化和性质进行了研究。主要实验结果如下:1、可拆分α-苯乙醇菌株的筛选从土样和水样中筛选得到47株产脂肪酶的菌株,加上实验室保存的3株产脂肪酶菌株,构建了产脂肪酶菌库。对菌库中的菌株进行脂肪酶酶活的初筛,筛选出16株酶活相对较高的菌株进行拆分α-苯乙醇的复筛。确定高酶活、拆分能力较好的解脂假丝酵母(Candida lipolytica)作为进一步研究的出发菌株。2、α-苯乙醇拆分条件的研究论文对解脂假丝酵母所产脂肪酶在苯乙醇的拆分中进行了研究。确定了拆分反应的最佳条件:以二氯甲烷作为有机溶剂,反应体系为4mL,底物浓度:苯乙醇为0.6mol/L,乙酸乙烯酯为1.2mol/L,反应温度为40℃,酶量为0.2g,摇床转速为220r/min,反应时间为72h。经过优化,底物的总转化率由优化前的36.1%提高到45.2%,底物R-转化率由61.9%提高到了85.4%,底物S-转化率由9.8%降低到了4.15%,底物的e.e.值由39.6%提高到了70.2%,产物的e.e.值由73.3%提高到了95.1%,E值由9.5提高到了83.9,拆分效果经过优化有了大幅度的改进。3、解脂假丝酵母菌株产酶发酵条件的优化通过逐因子实验、Plackett-Burman设计、响应面法叁种优化方法的结合,对解脂假丝酵母的产酶条件进行优化。优化后的发酵条件为:葡萄糖0.25%,蛋白胨0.60%,K_2HPO_4 0.603%,KH_2PO_4 0.10%,MgSO_4·7H_2O 0.05%,橄榄油0.50%,吐温-80 0.50%,初始pH值为7.85,转速为180 r/min,28℃培养48h。酶活高达208.9U/mL,是初始酶活91.3 U/mL的2.29倍。4、解脂假丝酵母脂肪酶的酶学性质研究对酶液进行了酶学性质的研究。研究发现,该酶的最佳反应温度为40℃,最适pH为8.0。该酶在50℃以下,pH6—8的范围内稳定性比较好。Zn~(2+)、Mg~(2+)、K~+等离子对酶活有促进作用,Cu~(2+)、EDTA对酶活有抑制作用。并对酶粉的制备进行试验,经硫酸铵沉淀、聚乙二醇浓缩及冷冻干燥,酶粉的酶活高达3740U/g。(本文来源于《浙江工业大学》期刊2007-11-01）
陈影,赵征[3]（2004）在《解脂假丝酵母脂肪酶水解乳脂肪的研究》一文中研究指出以反应温度、反应时间、酶的用量、底物浓度、pH值等为主要因素研究解脂假丝酵母脂肪酶水解乳脂肪的工艺条件,并利用响应面分析法(RSA)对水解条件进行了优化。得出最佳水解条件为底物浓度50.7%,pH7.5,加酶量317.3U/g,温度40℃。(本文来源于《广州食品工业科技》期刊2004年01期）
徐岩,李建波,王栋[4]（2001）在《解脂假丝酵母脂肪酶的纯化及性质研究》一文中研究指出通过采用盐析和透析等提纯方法 ,对解脂假丝酵母 (Candidalipolytica)脂肪酶进行了纯化 ,比活提高了 2 .69倍 ,回收率 45% .该酶反应的最适pH值为 7.5,最适温度为 38℃ ,pH稳定范围为 6.0～ 7.5,温度稳定性较差 ,以 2mol/L的蔗糖作保护剂效果较好 .该酶为金属酶 ,5mmol/L的钙离子有较好的活化效果(本文来源于《无锡轻工大学学报》期刊2001年03期）
姜延程,谢文磊,张文新[5]（1996）在《解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质》一文中研究指出通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．(本文来源于《吉林大学自然科学学报》期刊1996年03期）
解脂假丝酵母脂肪酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
脂肪酶(Lipase,EC3.1.1.3,甘油酯水解酶)是分解脂肪的酶。在动植物体和微生物中普遍存在,它是一类特殊的酯键水解酶,催化如下反应:甘油叁酯+水=甘油+游离脂肪酸。脂肪酶被广泛应用于酯合成、手性化合物的拆分、化工合成中间体的选择性基因保护、高聚物的合成、肽合成等方面,应用前景十分广阔。本文比较了不同菌株脂肪酶拆分α-苯乙醇的能力,并对解脂假丝酵母脂肪酶的拆分条件、菌株产酶条件、酶的初步纯化和性质进行了研究。主要实验结果如下:1、可拆分α-苯乙醇菌株的筛选从土样和水样中筛选得到47株产脂肪酶的菌株,加上实验室保存的3株产脂肪酶菌株,构建了产脂肪酶菌库。对菌库中的菌株进行脂肪酶酶活的初筛,筛选出16株酶活相对较高的菌株进行拆分α-苯乙醇的复筛。确定高酶活、拆分能力较好的解脂假丝酵母(Candida lipolytica)作为进一步研究的出发菌株。2、α-苯乙醇拆分条件的研究论文对解脂假丝酵母所产脂肪酶在苯乙醇的拆分中进行了研究。确定了拆分反应的最佳条件:以二氯甲烷作为有机溶剂,反应体系为4mL,底物浓度:苯乙醇为0.6mol/L,乙酸乙烯酯为1.2mol/L,反应温度为40℃,酶量为0.2g,摇床转速为220r/min,反应时间为72h。经过优化,底物的总转化率由优化前的36.1%提高到45.2%,底物R-转化率由61.9%提高到了85.4%,底物S-转化率由9.8%降低到了4.15%,底物的e.e.值由39.6%提高到了70.2%,产物的e.e.值由73.3%提高到了95.1%,E值由9.5提高到了83.9,拆分效果经过优化有了大幅度的改进。3、解脂假丝酵母菌株产酶发酵条件的优化通过逐因子实验、Plackett-Burman设计、响应面法叁种优化方法的结合,对解脂假丝酵母的产酶条件进行优化。优化后的发酵条件为:葡萄糖0.25%,蛋白胨0.60%,K_2HPO_4 0.603%,KH_2PO_4 0.10%,MgSO_4·7H_2O 0.05%,橄榄油0.50%,吐温-80 0.50%,初始pH值为7.85,转速为180 r/min,28℃培养48h。酶活高达208.9U/mL,是初始酶活91.3 U/mL的2.29倍。4、解脂假丝酵母脂肪酶的酶学性质研究对酶液进行了酶学性质的研究。研究发现,该酶的最佳反应温度为40℃,最适pH为8.0。该酶在50℃以下,pH6—8的范围内稳定性比较好。Zn~(2+)、Mg~(2+)、K~+等离子对酶活有促进作用,Cu~(2+)、EDTA对酶活有抑制作用。并对酶粉的制备进行试验,经硫酸铵沉淀、聚乙二醇浓缩及冷冻干燥,酶粉的酶活高达3740U/g。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
解脂假丝酵母脂肪酶论文参考文献
[1].温赛.亚罗解脂假丝酵母脂肪酶的高水平重组表达、分子体外进化研究及其在手性拆分中的应用[D].北京化工大学.2012
[2].岳珂.解脂假丝酵母脂肪酶在苯乙醇手性拆分中的应用及菌种产酶发酵条件、酶学性质的研究[D].浙江工业大学.2007
[3].陈影,赵征.解脂假丝酵母脂肪酶水解乳脂肪的研究[J].广州食品工业科技.2004
[4].徐岩,李建波,王栋.解脂假丝酵母脂肪酶的纯化及性质研究[J].无锡轻工大学学报.2001
[5].姜延程,谢文磊,张文新.解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质[J].吉林大学自然科学学报.1996
论文知识图
