导读:本文包含了端粒酶逆转录酶基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:逆转录,端粒,多态性,基因,抑制剂,阿司匹林,胃癌。
端粒酶逆转录酶基因论文文献综述
张顺荣,李东芳,何寄琴,焦蕉,李玉明[1]（2019）在《胃复方对人胃癌BGC-823细胞移植瘤裸鼠作用及其对c-Myc、人端粒酶逆转录酶基因表达的影响》一文中研究指出目的:观察胃复方对人胃癌BGC-823裸鼠的抑瘤作用及c-Myc、人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响,评估胃复方作用及其可能的作用机制。方法:建立人胃癌BGC-823裸鼠模型;将成功建立的裸鼠胃癌皮下移植瘤模型的40只荷瘤鼠随机分为5组(n=8):模型对照组、胃复方低剂量组、胃复方高剂量组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合中药组,连续给药4周。每7天记录肿瘤长径、短径,计算瘤体体积并绘制肿瘤生长曲线图;给药4周后处死所有荷瘤鼠,剥离皮下移植瘤称瘤重、计算抑瘤率;免疫组织化学法检测瘤体组织c-Myc、hTERT蛋白表达。结果:1)胃复方对人胃癌BGC-823裸鼠移植瘤具有明显抑制作用,各剂量间有量效关系。其中胃复方低剂量组、胃复方高剂量组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合中药组的抑瘤率分别为21.06%、45.89%、30.65%、59.42%。氟尿嘧啶联合中药组效果最好。2)瘤重显示与模型组比较,各药物组瘤重均有不同程度的减轻差异有统计学意义(P <0.05);其中氟尿嘧啶联合中药组降低明显。3)肿瘤生长曲线图显示与模型组比较,各药物组瘤体积均有一定程度缩小差异有统计学意义(P <0.05)。4)与模型组比较,药物组均能下调c-Myc、hTERT蛋白表达量差异有统计学意义(P <0.05)其中氟尿嘧啶联合中药组下降最明显。结论:胃复方能够抑制人胃癌BGC-823细胞BALB/c-nu裸鼠皮下移植瘤生长,可能与下调c-Myc、hTERT蛋白表达有关,并且与氟尿嘧啶联合用药有增效作用。(本文来源于《世界中医药》期刊2019年10期）
王超群[2]（2019）在《蛋白激酶A抑制剂对甲状腺癌细胞端粒酶逆转录酶基因表达的影响及机制研究》一文中研究指出背景:甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤,也是近年来发病率增长最快的实体肿瘤。甲状腺癌是一系列基因突变和分子异常激活多种癌酶信号通路的结果,分子检测技术是甲状腺癌诊断中的重要工具。大部分分化型甲状腺癌预后良好,但仍然有部分放射性碘难治性分化型甲状腺癌、低分化和未分化甲状腺癌因局部侵犯或远处转移而死亡。端粒酶激活是肿瘤发生的基本步骤。超过85%~90%的癌细胞存在端粒酶表达上调,使其有可能无限增殖。端粒酶逆转录酶(TERT)启动子区突变是侵袭性甲状腺癌中发生率最高的突变之一。在未分化甲状腺癌(ATC)中,TERT启动子突变率高达46.3%。研究表明TERT启动子突变的甲状腺癌与腺外侵犯、血管侵犯、远处转移密切相关,伴有TERT突变的甲状腺癌患者预后较差。体内外实验均表明,TERT通过促进细胞上皮化生(EMT),增加癌症转移和复发。研究针对TERT突变为靶点的药物,对治疗侵袭性甲状腺癌具有重要意义。cAMP/PKA通路作为细胞内经典信号通路之一,是促甲状腺激素(TSH)发挥功能的主要通路,在多种肿瘤和癌细胞系中异常激活。研究表明cAMP/PKA通路参与调控细胞骨架重排过程及其介导的细胞上皮化生(EMT)、迁移和侵袭等。使用PKA抑制剂可有效抑制多种癌细胞如结肠癌、胆管癌细胞的增殖与迁移。但目前缺乏PKA通路在甲状腺癌TERT表达的研究,研究PKA通路与甲状腺癌TERT表达的关系可为甲状腺癌的临床治疗提供线索。目的:系统检测12种甲状腺癌细胞系中的TERT启动子区突变和rs2853669位点的多态性,为体外实验研究TERT在甲状腺癌中的作用选择合适的细胞模型提供参考依据。研究PKA抑制剂对人甲状腺癌细胞系中TERT表达的影响及其机制,为临床上甲状腺癌的分子靶向治疗以及TSH抑制治疗提供线索。方法:通过扩增12种人甲状腺癌细胞系中的BRAF基因和TERT启动子区基因,检测BRAF、TERT突变位点和单核苷酸多态性位点rs2853669的基因型。用PKA抑制剂H89处理人甲状腺癌细胞系,通过划痕实验检测H89对甲状腺癌细胞的迁移作用,检测PKA抑制剂对甲状腺癌TERT表达的影响。根据是否具有TERT启动子突变C228T或C250T和rs2853669 SNP TT或CC,构建了6种不同组合类型的荧光素酶质粒,分别命名为WT+SNP TT,WT+SNP CC,C228T+SNP TT,C228T+SNP CC,C250T+SNP TT和C250T+SNP CC,通过荧光素酶报告基因系统检测H89调控TERT与TERT启动子区的关系,最后通过蛋白电泳检测c-fos,ETS2,GABPA,GABPB蛋白水平,对H89调控TERT表达的机制进行探讨。结果:(1)甲状腺癌12个常见细胞系中,BCPAP、SW1736、OCUT1和MDAT41具有BRAF~(V600E)突变,BCPAP、SW1736、OCUT1、TPC1、FTC133和C643具有TERT启动子突变,其中BCPAP、SW1736、TPC1、FTC133和C643存在C228T突变,仅OCUT1存在C250T突变。对于rs2853669单核苷酸多态性位点,12种细胞系中FB1、WRO和HTORI3为CC,BCPAP、OCUT1、FTC133和T351共4个为TT,而其余5个为TC,碱基C在这12种细胞系中发生率为45.8%。(2)划痕实验表明PKA抑制剂H89能降低TERT启动子突变的甲状腺癌细胞系FTC133、C643、T351和Cal62的迁移速度,而对FB1、HTORI3无明显作用。(3)PKA抑制剂H89能降低甲状腺癌细胞系BCPAP,T351,C643,Cal62,MDA-T41,SW1736,OUCT1,FTC133,TPC1的TERT表达,而不能降低甲状腺癌细胞系FB1,HTORI3,WRO的TERT表达。(4)荧光素酶报告基因结果显示TERT SNP CC组的TERT启动子活性低于TERT SNP TT组。(5)荧光素酶报告基因结果显示PKA抑制剂H89能降低TERT启动子突变组或者SNP TT组的TERT活性,而不能降低TERT WT+SNP CC组的TERT活性。(6)PKA抑制剂H89能降低甲状腺细胞系中的c-fos、ETS2、GABPB的蛋白表达,而不能降低GABPA蛋白表达。结论:我们的研究首次发现PKA抑制剂以依赖于细胞TERT启动子区突变或TERT单核苷酸多态性位点rs2853669 TT/TC的方式降低TERT表达,这对不同TERT基因背景的甲状腺癌患者提供精准治疗具有重要指导意义。PKA抑制剂降低TERT表达的机制主要涉及两个方面:H89通过抑制p-CREB通路,下调c-fos,进而减少GABP和TERT启动子突变位点结合,降低TERT表达;同时H89也可以通过降低ETS2,减少ETS2与rs2853669 TT/TC位点的结合,降低hTERT表达。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
袁陶燕[3]（2019）在《绍兴鸭端粒酶逆转录酶基因表达调控及内源性激活的研究》一文中研究指出端粒酶逆转录酶基因(TERT)编码的蛋白是组成端粒酶的叁个主要成分之一,是端粒酶活性的限速单位。端粒酶通过在端粒末端补充“TTAGGG”重复序列阻止细胞复制性衰老。本研究检测了鸭TERT(dTERT),相对端粒酶活性(RTA)和相对端粒长度(RTL)在鸭早期发育阶段的时空分布特点。克隆了鸭TERT 5'-侧翼序列,研究了表观遗传特别是DNA甲基化对dTERT表达的调控作用。最后,基于双荧光素酶活性检测和生物信息学分析,选择靠近转录起始位点的近端调控区作为靶序列,利用CRISPR-Cas9技术内源性激活了鸭小肠上皮细胞中的TERT。结果如下:1.鸭TERTmRNA,相对端粒酶活性(RTA)和相对端粒长度(RTL)的时空分布特点在出生后7天雏鸭的所有8个测试组织(心脏、肝脏、脾脏、肾脏、小肠、腿肌、性腺和胰腺)中均检测到了TERTmRNA的表达。其中,TERT在小肠和肾脏中的表达水平最高,其次依次是心脏、腿肌、脾脏、胰腺,在性腺和肝脏中的表达水平最低。在肝脏发育过程中,dTERT的表达趋势先从E13(胚胎期13天)到E19增加,然后从E19到E26急剧下降,并在D7(出生后7天)达到最低水平。而在腿肌中,dTERT的表达水平从E13到E19变化不大,从E19到E26显着增加,从E26到D7明显减少。在所有测试的雏鸭(D7)组织中均检测到了相对端粒酶活性(RTA),其中小肠中的端粒酶活性特别高,肾脏、心脏和胰腺中的端粒酶活性相对较低,端粒酶活性表现最低的是肝脏和腿肌。随着胚胎的发育,肝脏和腿肌中的RTA水平均显着下降。此外,雏鸭(D7)腿肌中的相对端粒长度(RTL)最长,其次是肾脏、小肠、肝脏、心脏和胰腺。从胚胎发育到出生阶段,肝脏中的RTL从E13到E26相对稳定,到D7时明显缩短。在腿肌中,RTL从E13到E26有小幅度的增加,而到D7时也显着缩短。2.鸭TERT 5’-侧翼序列的克隆及DNA甲基化调控研究克隆获得了2,413bp长的dTERT 5'-侧翼序列,并提交给GenBank(GenBank No.MH910094)。5'-RACE将转录起始位点定位到了-93bp处,定义为新的转录起始位点(+1)。生物信息学分析显示,鸭TERT5'调控区有叁个CpG岛(S1,S2和S3)。亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)结果表明,与小肠(D7)或肝脏(E19)相比,dTERTmRNA表达量显着较低的肝脏(D7)在S1区具有更高的甲基化水平。荧光定量PCR结果显示,DNA甲基转移酶DNMT1表达水平在肝脏(D7)中显着高于其他两个组织。体外细胞实验表明,经过甲基转移酶抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-dC)处理后,鸭胚成纤维细胞(DEFs)和小肠上皮细胞(DIECs)中dTERT表达均显着增加,同时S1区的甲基化水平显着降低,上述实验进一步证明了dTERT受到DNA甲基化的表观遗传调控。此外,用组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatinA(TSA)处理DEFs和DIECs后,也导致dTERT表达显着增加,提示组蛋白乙酰化也可能参与鸭TERT的转录调控。3.利用CRISPR-Cas9技术内源性激活鸭TERT双荧光素酶实验表明转录起始位点(+1)上游541bp是鸭TERT的核心启动子区,结合潜在转录因子位点的生物信息学分析,将-370/-150作为CRISPR/Cas9基因编辑的靶序列。用慢病毒法将10种Cas9-sgRNAs混合质粒转染DIECs后继续培养细胞,当培养到编辑后第5代时(CRISPR 5P)鸭TERT的表达有轻微上调。随着传代的进行,dTERT转录逐渐增强,直到在CRISPR13P时维持一个稳定的水平。当未编辑的DIECs进入衰老停滞时,CRISPR编辑的DIECs依然具有良好的细胞形态和增殖活性。Sanger测序显示,CRISPR 5P DIECs中所有sgRNAs都成功整合进鸭基因组,靶区域呈现出不同形式的基因突变。当培养到编辑后18代时,存活的CRISPR 18PDIECs中的优势突变是靶序列上74bp的缺失,而优势sgRNAs是sgRNAs2,sgRNAs7和sgRNAs9。检测RTA和RTL发现,CRIPSR编辑的DIECs中RTA被成功激活,但是并没有阻止端粒的缩短。荧光定量TERT潜在的靶基因表明,dTERT可能以一种端粒非依赖方式通过抑制衰老凋亡相关基因来维持细胞生长。最后,用LPS和poly(I:C)处理表明,CRISPR编辑的TERT被成功激活的鸭小肠上皮细胞依然具有正常的免疫反应功能。(本文来源于《浙江大学》期刊2019-04-01）
吴奇,韩东阳,李昕[4]（2018）在《阿司匹林对AD大鼠端粒长度、端粒酶逆转录酶及端粒保护蛋白1基因表达的影响》一文中研究指出目的研究端粒长度、端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒保护蛋白1(POT1)在阿尔茨海默病大鼠外周血中的表达情况。分析阿司匹林对AD大鼠模型的端粒长度、TERT和POT1基因表达的影响。方法将45只SD大鼠分为对照组、模型组和阿司匹林组,每组15只。对模型组及阿司匹林组的大鼠注射Aβ以构建阿尔茨海默病大鼠模型。建模后对照组、模型组和阿司匹林组分别给予生理盐水及阿司匹林灌胃。于灌胃后4周,测定各组大鼠的外周血白细胞端粒相对长度、TERT和POT1 m RNA的相对表达量及脑脊液中POT1蛋白表达情况。结果建模后1周,经morris水迷宫检测模型组和阿司匹林组各有10只大鼠建模成功;对照组、阿司匹林组和模型组大鼠相对端粒长度依次缩短(P<0.05);对照组、模型组和阿司匹林组的POT1 m RNA表达量依次增高(P<0.05);模型组和阿司匹林组TERT m RNA表达量均低于对照组(P<0.05),但两组间的比较无显着差异(P>0.05)。结论 AD大鼠可能由于端粒酶活性下降而导致端粒长度的缩短,阿司匹林或可通过上抬POT1的表达从而发挥保护端粒作用。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2018年76期）
崔伟丽,史昌河[5]（2018）在《肝癌易感性与端粒酶逆转录酶基因多态性的相关性研究》一文中研究指出目的:探讨人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因位点(rs2736100、rs2853676)单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism SNP)与青岛地区人群乙肝肝癌的易感性。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism PCR—RFLP)检测来自青岛地区人群肝癌患者165例、非肝癌乙肝病毒感染者195例、健康对照者402例hTERT基因型分布。(本文来源于《全国第九次中西医结合传染病学术会议暨深圳市医学会肝病专业委员会2018年学术年会资料汇编》期刊2018-09-21）
何雷,胡小飞,王嘉伟,廖成水,李静[6]（2018）在《鸡端粒酶逆转录酶基因的扩增及载体构建》一文中研究指出【目的】为研究鸡端粒酶逆转录酶的功能及其在细胞永生化中的应用。【方法】本研究通过设计cTERT和cTR的特异性引物,以四日龄SPF鸡胚的组织RNA为模板用RT-PCR的方法扩增鸡端粒酶逆转录酶基因和端粒酶RNA基因,同时扩增出载体,通过In-fusion方法将鸡端粒酶逆转录酶基因和端粒酶RNA基因与载体相连,并将连接产物转化到Stble2感受态细胞中,最后把克隆所得重组质粒转染进入肝细胞构建真核表达载体。【结果】研究结果表明,本研究成功扩增cTERT和cTR的基因片段,其中,cTERT全长4764bp,cTR为(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十叁次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第叁次学术研讨会、中国兽医病理学家第叁次学术研讨会论文集》期刊2018-07-27）
孙丽春,杨颖,于婷乔,孙玉萍,高海波[7]（2018）在《沙冬青端粒酶逆转录酶基因(AmTERT)克隆及表达分析》一文中研究指出利用分段克隆法从沙冬青中得到一条全长为3 459 bp的端粒酶逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase of Ammopiptanthus mongolicus,AmTERT),并对AmTERT进行了系统的生物信息学分析。结果表明,AmTERT编码1 153个氨基酸,蛋白相对分子质量为132.52 k Da,等电点为9.49,属于稳定性较差的亲水性蛋白。未发现跨膜结构存在,定位预测结果显示其在细胞质膜及线粒体上有定位,同时发现其有单分型(NLS-monopartite)和双分型(NLS-bipartite)细胞核定位信号,而在原生质体中的瞬时表达实验结果表明AmTERT定位在细胞核中。该氨基酸序列共有147个潜在磷酸化位点,氨基酸比对结果显示,AmTERT与大豆TERT相似性高达75%。另外,AmTERT蛋白具有端粒酶逆转录酶的保守功能结构域(TRBD及RT),并存在潜在的Akt激酶磷酸化位点,暗示其可能通过磷酸化作用发挥调节自身或其他基因功能的作用。荧光定量PCR结果显示,AmTERT在根中表达量较茎和叶组织都高,盐、干旱、热及低温胁迫均能导致沙冬青幼苗根和叶中AmTERT的表达量升高,说明植物细胞端粒酶可能和动物细胞一样具有应激保护功能。综上,研究结果表明,沙冬青端粒酶可能存在非端粒功能。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年07期）
李桂宏[8]（2018）在《胶质瘤端粒酶逆转录酶基因可变剪接及G4链配体CX-5461的调控机制研究》一文中研究指出背景:神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,其特征是具有局部弥漫浸润的高侵袭性,并始终保持较差的预后。然而,目前仅有极少数可靠的生物标志物可用于预测胶质瘤患者的疾病进程、治疗反应和结局。已有研究显示高端粒酶活性或hTERT启动子突变与人脑肿瘤的临床诊断及预后参数密切相关。有也研究提出,与肿瘤组织病理学和临床参数相关联,hTERT可变剪接体的表达可作为某些癌症患者的诊断或预后生物标志物。同时,端粒酶也因此成为癌症治疗的一个有吸引力的靶点,并且hTERT可变剪接模式的调节将是一种治疗策略。随着活性hTERT m RNA转录体表达水平下降,端粒酶活性会降低。但hTERT可变剪接体的生物学功能和精确调控机制仍不清楚。研究表明,转化生长因子-β(TGF-β)和反义寡核苷酸处理改变了hTERT前体mRNA的剪切模式,可以抑制端粒酶活性。另一项研究证实,一种G-四链体配体12459可以在A549细胞中将hTERT-FL转换为β缺失hTERT转录体而降低端粒酶活性。在端粒单链悬端或c-myc基因启动子序列中已经广泛研究了G-四链体结构,并且证实了hTERT内含子6含有两个能够形成G-四链体的富含G的序列。同样,CX-5461作为rDNA转录抑制剂目前处于恶性肿瘤的I期临床试验中,据报道它能强烈地结合和稳定G-四链体结构并能在体外诱导ATM/ATR,DNA损伤。此外,BRACO-19和TMPyP4作为其他两种G-四链体配体在稳定G-链体结构及诱导端粒DNA损伤方面被广泛研究,也具有调节hTERT可变剪接模式的潜力。因此,我们首先分析hTERT可变剪接体及端粒酶活性对胶质瘤患者诊断及预后评估的价值。然后探究G-四链体配体对胶质母细胞瘤细胞系hTERT可变剪接模式的调节潜能,并进一步研究CX-5461对胶质母细胞瘤细胞的生物学功能。目的:用人胶质瘤样本及人胶质母细胞瘤细胞系来研究端粒酶逆转录酶基因可变剪接的临床意义及G4链配体CX-5461对其调控机制。方法:1、收集、冻存胶质瘤样本并整理临床资料与病理资料。2、对收集的胶质瘤样本及人胶质母细胞瘤细胞系总RNA提取并逆转录建立cDNA文库。3、通过RT-PCR检测胶质瘤样本及细胞系hTERT可变剪接体的表达并分析其临床意义。4、通过TRAP实验检测胶质瘤样本及细胞系端粒酶活性并分析其临床意义。5、通过免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测胶质母细胞瘤细胞相关蛋白的表达变化。6、通过MTT检测CX-5461对胶质母细胞瘤细胞的抑制率。7、通过细胞克隆实验检测CX-5461对胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。8、通过流式细胞术检测CX-5461对胶质母细胞瘤细胞周期及凋亡的影响。9、通过免疫荧光方法检测细胞端粒DNA损伤相关蛋白荧光强度。结果:1、RT-PCR结果显示hTERT-All在所有人类胶质瘤组织和细胞系中均有表达,hTERT-FL mRNA在约86.8%的GBM,73.9%的ODM和42.9%的OAM中可检测到。在胶质瘤瘤组织中检测到两种hTERT可变剪接体(hTERT+β和hTERT-β)。38例GBM病例中有33例,24例ODM中有17例,35例OAM中有15例表达hTERT+β转录体,其余31例仅表达出无功能hTERT-β转录体。hTERT+β转录体与hTERT-FL转录体的表达一致。当hTERT+β转录体与患者的临床变量相关联时,其存在与患者的年龄,KPS,肿瘤大小和WHO肿瘤等级显着相关(P<0.05)。2、TRAP法检测96例胶质瘤组织标本,结果显示38例GBM患者肿瘤组织中有34例(89.5%),23例ODM患者肿瘤组织中有17例(73.9%),35例OAM患者肿瘤组织中16例(45.7%)表现出较高的端粒酶活性。统计分析结果显示,叁种不同组织类型的胶质瘤端粒酶活性与hTERT-FL或hTERT+β转录体的表达一致。TA与患者性别或切除范围无关(P>0.05)。而与患者年龄,肿瘤大小,KPS和WHO分级等显着相关(P<0.05)。在年龄<50岁的52例患者中有30例(57.7%)端粒酶活性阳性,而年龄≥50岁的44名患者中有37例(84.1%)端粒酶活性阳性。在肿瘤<6cm的49例患者中有28例(57.1%)端粒酶活性阳性,而肿瘤≥6cm的47例患者中有39例(83%)端粒酶活性阳性。在KPS<75的57例患者中有39例(59.6%)端粒酶活性阳性,而KPS≥75的39例患者中有33例(84.6%)端粒酶活性阳性。3、Kaplan-Meier评估显示,38例GBM患者表达hTERT+β的3年中位生存期为11.5个月,仅表达hTERT–β的3年中位生存期为24个月;TA阳性患者的3年中位生存期为12个月,TA阴性患者的3年中位生存期为25个月。23例ODM患者表达hTERT+β或TA阳性的3年中位生存期为19个月,仅表达hTERT–β或TA阴性的3年中位生存期为35个月。35例OAM患者表达hTERT+β的3年中位生存期为28个月,仅表达hTERT–β的3年中位生存期为36个月;TA阳性患者的3年中位生存期为29个月,TA阴性患者的3年中位生存期为36个月。对于不同WHO组织级别胶质瘤缺乏hTERT+β转录体表达或TA的患者存在显着的生存获益(P<0.05)。4、RT-PCR结果显示,CX-5461能够显着改变hTERT剪接模式,导致T98G和U251细胞中活化的hTERT+β转录体急剧下降(P<0.05)。另外两个G-四链体配体TMPyP4和BRACO-19作用不显着。在T98G和U251细胞中,CX-5461可以导致活化的hTERT+β转录体以剂量依赖性方式逐渐减少,并且增加非活性的hTERT-β转录体的表达(P<0.05)。CX-5461可以剂量依赖性方式导致hTERT-FL表达的显着降低(P<0.05),而对hTERT-All表达没有明显影响(P>0.05)。5、Western blot结果显示,CX-5461在T98G和U251细胞中仅能微弱下调hTERT蛋白表达,条带灰度值统计分析显示这种调控不具有统计学差异(P>0.05)TRAP实验结果显示,CX-5461可以以剂量依赖性的方式抑制T98G和U251细胞端粒酶活性。6、MTT结果显示,浓度为0.05到25μM的CX-5461作用48小时后,T98G,U251对CX-5461表现出显着的剂量依赖性细胞毒性效应。C6细胞系对CX-5461表现出中等强度的剂量依赖性细胞毒性效应。而HEB细胞对CX-5461表现出的细胞毒性反应很弱。细胞克隆形成实验结果显示,与对照组相比,T98G,U251细胞的克隆数目随CX-5461药物浓度的增加而呈梯度显着减少(P<0.05)。7、流式细胞术结果显示,CX-5461可诱导T98G和U251细胞出现G2/M期阻滞。Western blot结果显示CX-5461能够明显上调p53和p16蛋白的表达,而抑制cyclin D1蛋白的表达。8、流式细胞术结果显示CX-5461可诱导T98G和U251细胞发生细胞凋亡。Western blot结果显示CX-5461能够显着降低T98G和U251细胞Bcl-2的表达,同时上调cleaved caspase-3和Bax的活性。9、Western blot结果显示CX-5461可以诱导T98G和U251细胞γ-H2AX,53BP1和p-ATM表达明显上调。共聚焦显微镜观察免疫荧光双染细胞核中DNA损伤反应标志物γ-H2AX和p-ATM结果显示,CX-5461可以诱导T98G和U251细胞表达γ-H2AX和p-ATM并能与TRF1充分实现共定位,证明细胞DNA损伤反应发生在端粒DNA上。结论:1、人胶质瘤存在两种hTERT可变剪接体即hTERT+β和hTERT-β,hTERT+β可变剪接体与hTERT-FL可变剪接体表达一致,并且与高端粒酶活性相一致,有作为提示胶质瘤不良预后的生物标志的潜能。2、G-四链体配体CX-5461能够改变hTERT剪接模式,导致GBM细胞活化的hTERT+β及hTERT-FL表达下降,抑制GBM细胞端粒酶活性。3、G-四链体配体CX-5461对GBM细胞具有细胞毒性作用,可引起端粒DNA损伤反应,诱导GBM细胞出现G2/M期阻滞及发生细胞凋亡。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-06-01）
崔伟丽,褚志予,马红,崔京远,亓玉琴[9]（2018）在《肝癌易感性与端粒酶逆转录酶基因多态性的相关性研究》一文中研究指出目的:探讨人类端粒酶逆转录酶(h TERT)基因位点(rs 2736100、rs 2853676)单核苷酸多态性(SNP)与青岛地区人群乙肝肝癌的易感性。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)检测来自青岛地区的肝癌患者165例、非肝癌乙肝病毒感染者195例、健康对照者402例h TERT基因型分布。结果:(1)肝癌组患者rs2736100位点GG基因型频率显着高于对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者(均P<0.05),携带GG基因型者罹患肝癌的风险分别增加至2.13倍、2.17倍和2.14倍。(2)肝癌组患者rs 2853676位AA基因型频率显着高于对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者(均P<0.05),携带AA基因型者罹患肝癌的风险分别增加至3.42倍、2.39倍和3.02倍。结论 :h TERT rs 2736100和rs 2853676位点基因多态性与肝癌易感性相关。(本文来源于《中国现代普通外科进展》期刊2018年04期）
崔伟丽,李娜,徐保华,亓玉琴,史昌河[10]（2017）在《端粒酶逆转录酶基因多态性与肝癌的易感性研究》一文中研究指出[目的]探讨人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因位点(rs2075786、rs2736098)单核苷酸多态性(SNP)与肝癌的易感性。[方法]采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)检测肝癌患者165例、非肝癌乙肝病毒感染者195例、健康对照者402名的hTERT基因型分布。[结果]肝癌组患者rs2075786位点TC及TT基因型频率显着高于对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者(P均<0.05),携带TC及TT基因型者罹患肝癌的风险分别增加1.88倍和2.72倍,且男性肝癌患者携带TC及TT基因型明显增加。与对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者相比,肝癌组rs2736098位点各基因型分布差异无统计学意义,多态性与肝癌患者的性别、年龄、肿瘤分化程度及TNM分期无相关性。[结论]hTERT rs2075786基因多态性与肝癌易感性相关。(本文来源于《中国肿瘤》期刊2017年10期）
端粒酶逆转录酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤,也是近年来发病率增长最快的实体肿瘤。甲状腺癌是一系列基因突变和分子异常激活多种癌酶信号通路的结果,分子检测技术是甲状腺癌诊断中的重要工具。大部分分化型甲状腺癌预后良好,但仍然有部分放射性碘难治性分化型甲状腺癌、低分化和未分化甲状腺癌因局部侵犯或远处转移而死亡。端粒酶激活是肿瘤发生的基本步骤。超过85%~90%的癌细胞存在端粒酶表达上调,使其有可能无限增殖。端粒酶逆转录酶(TERT)启动子区突变是侵袭性甲状腺癌中发生率最高的突变之一。在未分化甲状腺癌(ATC)中,TERT启动子突变率高达46.3%。研究表明TERT启动子突变的甲状腺癌与腺外侵犯、血管侵犯、远处转移密切相关,伴有TERT突变的甲状腺癌患者预后较差。体内外实验均表明,TERT通过促进细胞上皮化生(EMT),增加癌症转移和复发。研究针对TERT突变为靶点的药物,对治疗侵袭性甲状腺癌具有重要意义。cAMP/PKA通路作为细胞内经典信号通路之一,是促甲状腺激素(TSH)发挥功能的主要通路,在多种肿瘤和癌细胞系中异常激活。研究表明cAMP/PKA通路参与调控细胞骨架重排过程及其介导的细胞上皮化生(EMT)、迁移和侵袭等。使用PKA抑制剂可有效抑制多种癌细胞如结肠癌、胆管癌细胞的增殖与迁移。但目前缺乏PKA通路在甲状腺癌TERT表达的研究,研究PKA通路与甲状腺癌TERT表达的关系可为甲状腺癌的临床治疗提供线索。目的:系统检测12种甲状腺癌细胞系中的TERT启动子区突变和rs2853669位点的多态性,为体外实验研究TERT在甲状腺癌中的作用选择合适的细胞模型提供参考依据。研究PKA抑制剂对人甲状腺癌细胞系中TERT表达的影响及其机制,为临床上甲状腺癌的分子靶向治疗以及TSH抑制治疗提供线索。方法:通过扩增12种人甲状腺癌细胞系中的BRAF基因和TERT启动子区基因,检测BRAF、TERT突变位点和单核苷酸多态性位点rs2853669的基因型。用PKA抑制剂H89处理人甲状腺癌细胞系,通过划痕实验检测H89对甲状腺癌细胞的迁移作用,检测PKA抑制剂对甲状腺癌TERT表达的影响。根据是否具有TERT启动子突变C228T或C250T和rs2853669 SNP TT或CC,构建了6种不同组合类型的荧光素酶质粒,分别命名为WT+SNP TT,WT+SNP CC,C228T+SNP TT,C228T+SNP CC,C250T+SNP TT和C250T+SNP CC,通过荧光素酶报告基因系统检测H89调控TERT与TERT启动子区的关系,最后通过蛋白电泳检测c-fos,ETS2,GABPA,GABPB蛋白水平,对H89调控TERT表达的机制进行探讨。结果:(1)甲状腺癌12个常见细胞系中,BCPAP、SW1736、OCUT1和MDAT41具有BRAF~(V600E)突变,BCPAP、SW1736、OCUT1、TPC1、FTC133和C643具有TERT启动子突变,其中BCPAP、SW1736、TPC1、FTC133和C643存在C228T突变,仅OCUT1存在C250T突变。对于rs2853669单核苷酸多态性位点,12种细胞系中FB1、WRO和HTORI3为CC,BCPAP、OCUT1、FTC133和T351共4个为TT,而其余5个为TC,碱基C在这12种细胞系中发生率为45.8%。(2)划痕实验表明PKA抑制剂H89能降低TERT启动子突变的甲状腺癌细胞系FTC133、C643、T351和Cal62的迁移速度,而对FB1、HTORI3无明显作用。(3)PKA抑制剂H89能降低甲状腺癌细胞系BCPAP,T351,C643,Cal62,MDA-T41,SW1736,OUCT1,FTC133,TPC1的TERT表达,而不能降低甲状腺癌细胞系FB1,HTORI3,WRO的TERT表达。(4)荧光素酶报告基因结果显示TERT SNP CC组的TERT启动子活性低于TERT SNP TT组。(5)荧光素酶报告基因结果显示PKA抑制剂H89能降低TERT启动子突变组或者SNP TT组的TERT活性,而不能降低TERT WT+SNP CC组的TERT活性。(6)PKA抑制剂H89能降低甲状腺细胞系中的c-fos、ETS2、GABPB的蛋白表达,而不能降低GABPA蛋白表达。结论:我们的研究首次发现PKA抑制剂以依赖于细胞TERT启动子区突变或TERT单核苷酸多态性位点rs2853669 TT/TC的方式降低TERT表达,这对不同TERT基因背景的甲状腺癌患者提供精准治疗具有重要指导意义。PKA抑制剂降低TERT表达的机制主要涉及两个方面:H89通过抑制p-CREB通路,下调c-fos,进而减少GABP和TERT启动子突变位点结合,降低TERT表达;同时H89也可以通过降低ETS2,减少ETS2与rs2853669 TT/TC位点的结合,降低hTERT表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
端粒酶逆转录酶基因论文参考文献
[1].张顺荣,李东芳,何寄琴,焦蕉,李玉明.胃复方对人胃癌BGC-823细胞移植瘤裸鼠作用及其对c-Myc、人端粒酶逆转录酶基因表达的影响[J].世界中医药.2019
[2].王超群.蛋白激酶A抑制剂对甲状腺癌细胞端粒酶逆转录酶基因表达的影响及机制研究[D].中国人民解放军海军军医大学.2019
[3].袁陶燕.绍兴鸭端粒酶逆转录酶基因表达调控及内源性激活的研究[D].浙江大学.2019
[4].吴奇,韩东阳,李昕.阿司匹林对AD大鼠端粒长度、端粒酶逆转录酶及端粒保护蛋白1基因表达的影响[J].世界最新医学信息文摘.2018
[5].崔伟丽,史昌河.肝癌易感性与端粒酶逆转录酶基因多态性的相关性研究[C].全国第九次中西医结合传染病学术会议暨深圳市医学会肝病专业委员会2018年学术年会资料汇编.2018
[6].何雷,胡小飞,王嘉伟,廖成水,李静.鸡端粒酶逆转录酶基因的扩增及载体构建[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十叁次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第叁次学术研讨会、中国兽医病理学家第叁次学术研讨会论文集.2018
[7].孙丽春,杨颖,于婷乔,孙玉萍,高海波.沙冬青端粒酶逆转录酶基因(AmTERT)克隆及表达分析[J].中国细胞生物学学报.2018
[8].李桂宏.胶质瘤端粒酶逆转录酶基因可变剪接及G4链配体CX-5461的调控机制研究[D].吉林大学.2018
[9].崔伟丽,褚志予,马红,崔京远,亓玉琴.肝癌易感性与端粒酶逆转录酶基因多态性的相关性研究[J].中国现代普通外科进展.2018
[10].崔伟丽,李娜,徐保华,亓玉琴,史昌河.端粒酶逆转录酶基因多态性与肝癌的易感性研究[J].中国肿瘤.2017
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