人源酸敏感离子通道1a介导酸引起细胞凋亡的研究

人源酸敏感离子通道1a介导酸引起细胞凋亡的研究

论文摘要

目的比较人与小鼠来源酸敏感离子通道1a(ASIC1a)介导酸引起的细胞凋亡。方法对COS7细胞以及培养的原代皮层锥体神经元转染人或小鼠源ASIC1a质粒,COS7细胞经过pH7.4/pH6.0处理2 h,神经元经过pH7.4/pH6.0处理1 h,加入PI染色,统计PI阳性细胞比率;对培养的CHO细胞转染人和小鼠源ASIC1a质粒,经过pH7.4/pH6.0/pH6.0+PcTx-1处理2 h,通过荧光显微镜拍照,统计细胞死亡率,通过MTT实验检测细胞活力;采用生物素标记、亲和素沉淀分离ASIC1a膜蛋白,通过免疫印迹实验定量分析ASIC1a膜蛋白。结果与转染小鼠源ASIC1a的COS7细胞和神经元相比,转染人源ASIC1a的COS7细胞和神经元,由酸引起的细胞PI阳性细胞比率更大,细胞死亡率更高,细胞活力更低,且ASIC1a特异性阻断剂PcTx-1能显著逆转由酸引起的细胞凋亡,人源ASIC1a在细胞膜表达更多。结论人源ASIC1a比小鼠源ASIC1a介导酸引起的细胞凋亡更重。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 细胞培养与转染
  •   1.3 原代皮层锥体神经元培养与转染
  •   1.4 细胞酸处理与PI染色
  •   1.5 荧光显微镜拍照
  •   1.6 MTT实验
  •   1.7 细胞膜蛋白表面生物素标记以及亲和素沉淀分离
  •   1.8 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 人ASIC1a与鼠ASIC1a介导酸引起的COS7细胞凋亡比较
  •   2.2 人ASIC1a与鼠ASIC1a介导酸引起的神经元凋亡比较
  •   2.3 人ASIC1a与鼠ASIC1a介导酸引起的CHO细胞损伤比较
  •   2.4 转染人源ASIC1a
  •   2.5 人源ASIC1a在CHO细胞膜表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 徐媛媛,李文娜,翟玉荣,莫镇涛,李意奇,李俊明,肖璐,李彩兰

    关键词: 人源,小鼠源,凋亡,膜表达

    来源: 遵义医科大学学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 药学

    单位: 遵义医科大学珠海校区

    基金: 珠海市优势学科研究计划项目,遵义医科大学博士启动基金资助项目(NO:F-953)

    分类号: R965

    DOI: 10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2019.0098

    页码: 618-622

    总页数: 5

    文件大小: 1769K

    下载量: 29

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