论文摘要
目的:本实验通过制备抗肠道病毒71型鸡卵黄抗体（anti-EV71 IgY）,开展其在体内及体外抗肠道病毒71型（EV71）,体外抗柯萨奇病毒A16型（CVA16）的相关检测,并对其抗EV71和CVA16的作用机制进行探讨。以期探索出一种新的能交叉被动免疫治疗由EV71和CVA16引发的手足口病（HFMD）方案。方法:以EV71毒株作为抗原,与弗氏不完全佐剂1:1混合并吹打使其乳化均匀,通过多次注射来免疫SPF级母鸡,收集并提取纯化IgY;蛋白定量法检测IgY的总蛋白浓度;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测试IgY纯度;采用间接酶联免疫吸附法（ELISA）来评价特异性IgY的浓度变化规律;蛋白质印记法和免疫双向琼脂扩散法检测纯化IgY的特异性;采用观测人横纹肌肉瘤细胞（RD）的细胞病变效应（CPE）检测特异性IgY体外对EV71与CVA16中和能力的量效关系,抗EV71稳定性和时效性;通过免疫荧光法检测特异性IgY在非洲绿猴肾细胞（Vero）中的抗EV71作用;灌胃给药检测特异性IgY对被EV71病毒感染的新生BALB/c鼠的保护作用。结果:IgY总蛋白浓度在免疫后整体呈上升趋势;SDS-PAGE电泳图显示纯化的IgY纯度良好,可被分裂为分子量约为70 kDa的IgY重链（H）及30 kDa的IgY轻链（L）;通过ELISA我们发现特异性IgY浓度在免疫后的第7天出现增加,在第7周达到最高,并在较高水平维持4周左右;免疫双向琼脂扩散实验与Western blot测得特异性IgY具有与EV71、CVA16毒株良好的免疫结合性,能特异性识别EV71和CVA16的包膜蛋白VP1及VP3;IgY体外中和病毒实验结果显示,特异性IgY能抑制EV71病毒和CVA16病毒的感染病变能力,并呈剂量-效应相关关系,差异具有统计学意义;特异性IgY在感染早期对EV71病毒有很强的抑制作用,感染后期抑制效果不明显;特异性IgY在4℃、室温、37℃条件下48 h后抗病毒活性依然稳定,60℃条件下1.6μg/mL仍能对病毒达到100%的抑制率。反复冻融5次后对IgY的抗病毒活性没有影响。特异性IgY对肠道病毒EV71、CVA16有很强的抑制活性,对其他肠道病毒抑制效果不明显;免疫荧光法显示特异性IgY在3.72μg/mL对Vero细胞中的毒株能达到近乎100%的抑制作用;特异性IgY实验组新生鼠生存率达到100%,相比于对照组无消瘦,精神萎靡,毛发生长异常等症状。结论:（1）免疫后提取的特异性IgY纯度与抗病毒特异性良好。（2）特异性IgY能识别EV71、CVA16病毒的包膜蛋白VP1与VP3,在体外抗病毒实验中能有效地抑制EV71病毒和CVA16病毒活性并呈剂量-效应相关关系。（3）特异性IgY作用于EV71感染早期处理明显优于后期,并且特异性IgY的稳定性较好。（4）特异性IgY灌胃给药后可以对被EV71攻击的乳鼠提供保护。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 高恩怡
导师: 韦京辰
关键词: 肠道病毒型,柯萨奇病毒型,鸡卵黄抗体,细胞,乳鼠
来源: 桂林医学院
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 桂林医学院
分类号: R392-33
总页数: 72
文件大小: 3796K
下载量: 110
相关论文文献
- [1].鸡卵黄抗体在猪疾病中的应用[J]. 上海畜牧兽医通讯 2018(06)
- [2].鸡卵黄抗体及其在养猪业中的应用研究进展[J]. 动物医学进展 2013(05)
- [3].鸡卵黄抗体研究进展[J]. 西南军医 2008(03)
- [4].鸡卵黄抗体IgY研究进展[J]. 畜牧与兽医 2013(03)
- [5].鸡卵黄抗体IgY的分离纯化及鉴定[J]. 生物学杂志 2009(06)
- [6].鸡卵黄抗体[J]. 北方牧业 2009(10)
- [7].鸡卵黄抗体(IgY)的制备工艺研究[J]. 食品工业 2011(01)
- [8].鸡卵黄抗体(IgY)的性质、提纯及应用于寄生虫学的研究[J]. 中国人兽共患病学报 2011(05)
- [9].抗MRSA-PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立[J]. 微生物学杂志 2012(01)
- [10].HIV-1 NCp15基因的克隆、蛋白表达及鸡卵黄抗体的制备[J]. 食品科技 2009(03)
- [11].抗旋毛虫鸡卵黄抗体的制备与鉴定[J]. 现代预防医学 2010(01)
- [12].艰难梭菌特异性鸡卵黄抗体的研制及初步应用[J]. 中国微生态学杂志 2016(11)
- [13].抗SEA鸡卵黄抗体ELISA用于大山区血吸虫病诊断的研究[J]. 中国病原生物学杂志 2010(09)
- [14].抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备及其生物学特性鉴定[J]. 解放军预防医学杂志 2013(06)
- [15].纳米硒、碘对鸡卵黄抗体产量的影响[J]. 西南农业学报 2013(02)
- [16].鸡卵黄抗体的制备以及金磁微粒为载体去除人血浆部分高丰度蛋白的研究[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2008(07)
- [17].鸡卵黄抗体[J]. 畜牧兽医杂志 2013(04)
- [18].猪囊尾蚴cC1蛋白的原核表达及其特异性鸡卵黄抗体的制备与鉴定[J]. 安徽医科大学学报 2011(03)
- [19].抗旋毛虫鸡卵黄抗体的活性检测[J]. 中国人兽共患病学报 2009(11)
- [20].酪蛋白和乳球蛋白的抗体及酶标物制备研究[J]. 食品科学 2008(12)
- [21].鸡卵黄抗体用于诺如病毒检测的初步研究[J]. 热带医学杂志 2013(04)
- [22].抗SEA鸡卵黄抗体用于血吸虫循环抗原检测的初步研究[J]. 现代生物医学进展 2008(12)
- [23].特异性肠道病毒鸡卵黄抗体喷剂治疗疱疹性咽峡炎患儿口腔疱疹的疗效[J]. 中国妇幼保健 2017(19)
- [24].抗甲型流感鸡卵黄抗体的制备及效价测定[J]. 生物技术 2012(01)
- [25].单增李斯特菌(Listeria monocytogens)鸡卵黄抗体的制备及其抑菌活性研究[J]. 食品与发酵工业 2009(02)
- [26].抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究[J]. 蛇志 2008(03)
- [27].载脂蛋白apoAI鸡卵黄抗体的制备[J]. 现代预防医学 2009(02)
- [28].竞争ELISA法对牛乳β-酪蛋白的检测[J]. 食品科学 2010(22)
- [29].抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体(IgY)的制备[J]. 中国实验诊断学 2008(04)
- [30].副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较[J]. 吉林大学学报(医学版) 2017(02)