导读:本文包含了反义基因治疗论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因治疗,树突,靶向,造影,基因,膀胱,肝癌。
反义基因治疗论文文献综述
刘缘,丁洪波,全家妩[1]（2015）在《p53基因质粒联合反义c-myc基因质粒治疗人膀胱癌作用机理的研究》一文中研究指出目的探索p53基因质粒联合反义c-myc基因质粒治疗人膀胱癌的作用机理。方法将可在真核细胞表达P53蛋白的质粒pCEP4p53和表达反义c-myc基因的质粒pCEP4ASCMH,以转染剂FuGENE6为介导,同时转染到人膀胱癌T24细胞中,经DNA测序、PCR-异双聚体PAGE电泳、Southern印迹杂交、蛋白质印迹法、ELISA、Caspase-3活性检测等方法分析实验结果。结果 DNA测序结果表明,转染所用的p53基因和反义c-myc基因的序列与文献报道一致,没有突变或失活等异常;PCR-异双聚体PAGE电泳证明T24细胞的p53基因发生了点突变;Southern印迹杂交实验确证p53基因和反义c-myc基因经FuGENE6介导转入靶细胞;蛋白质印迹法方法检测野生型p53基因在靶细胞内表达P53蛋白;ELISA方法检测瘤细胞内c-myc基因表达产物的含量水平下降;Caspase-3活性检测结果表明其活性增加,表现为典型的凋亡特征。结论 p53基因质粒联合反义c-myc基因质粒转染人T24膀胱癌细胞能诱导典型的凋亡,为膀胱癌的基因治疗提供了新途径。(本文来源于《江苏预防医学》期刊2015年03期）
李幸[2]（2013）在《慢病毒载体介导Blimp1-shRNA反义基因治疗调控髓源性DC前体细胞分化的研究》一文中研究指出目的：慢病毒(lenti-virus)为载体介导Blimp1-shRNA转染向树突状细胞(dendritic cells, DCs)分化的骨髓原代细胞,观察转染效率、细胞生长及分化成熟情况。方法：构建Blimp1-shRNA,用慢病毒载体将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞中并诱导向DC分化；根据转染条件将实验分为空白对照(empty-control)组、空载病毒对照(lenti-control)组和慢病毒-Blimp1shRNA (lenti-Blimp1)组；于1周内观察荧光水平以评估转染效率,观察细胞的形态变化,记录细胞的生长情况；分别于转染后72h、96h收集细胞比较各组Blimp1mRNA、蛋白的表达情况；收集转染后第7天细胞,检测CDllc+、CD86+、MHCⅡ+细胞百分比。结果：病毒侵染后第3天细胞出现荧光,lenti-control组和lenti-Blimp1组荧光表达率为30.8+4.4%、30.4+4.8%,而后荧光持续并稳定；生长曲线显示,Empty-control组细胞在培养的前3天内呈对数增长,第4天细胞数目达到峰值(2.45+0.26×106／孔),培养第6天后细胞数目略有下降(2.35+0.20×106／孔),至第8天为2.27+0.19×106／孔；lenti-control组和lenti-Blimp1组细胞在病毒侵染后,细胞增殖停滞,随后细胞数目稳定在1.69+0.39×106／孔；lenti-Blimp1组Blimp1mRNA和蛋白的水平为lenti-control组的1.3%和70.4%,为empty-control组的1.0%和74.0%；empty-control组、lenti-control组和lenti-Blimp1组中CD11c+细胞百分比为69.24+4.98%、68.56+5.86%和72.76+5.52%,而empty-control组、lenti-control组和lenti-Blimp1组中CD86+和MHCII+细胞百分比分别为51.08+4.93%、49.52+4.28%、50.20+6.01%和56.28+7.30%、69.38土4.52%、46.48+5.70%。结论：Blimp1基因的下调能够抑制DC成熟,慢病毒介导的shRNA基因治疗是调控髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段。(本文来源于《华中科技大学》期刊2013-05-01）
李菲菲[3]（2013）在《GPA基因反义核酸靶点发掘和反义治疗实验研究》一文中研究指出目的：将GPA基因pre-mRNA和mRNA进行靶点筛选，并分析各靶点干预基因表达的效果，通过比较pre-mRNA和mRNA靶点的基因干预效果，为反义技术设计提供指导和方法。方法：从人K562细胞获得包含内含子和外显子的GPA基因，并通过mRNA反转录得到cDNA基因，获得GPA-DNA和GPA-cDNA阳性克隆。体外转录获得pre-mRNA和mRNA，采用MAST的方法筛选GPA-pre-mRNA和GPA-mRNA的靶点，通过反义核酸进行靶点体外有效性的验证。根据体外验证结果较好的靶点设计特异性的Ribozyme序列并构建慢病毒载体质粒，进行慢病毒的包装后，转染K562细胞。对转染各靶点Ribozyme的细胞，从mRNA水平分析GPA基因表达，评价其干预效果。结果：成功构建GPA-DNA和GPA-cDNA阳性克隆并体外转录得到pre-mRNA和mRNA；采用MAST的方法从GPA基因中成功筛选得到9个可能靶点，靶点有效性体外验证确认3个有效，设计4个干预靶位置；对这四个靶点序列设计Ribozyme，成功构建了包装Ribozyme表达载体的慢病毒，并转染K562细胞；定量PCR的结果表明KD2、KD3和KD4叁组mRNA的表达水平显着下降（P＜0.05）；KD4各组基因敲减效率均在70%以上，为最佳靶点。结论：获得GPA全长基因4个有效靶点，经Ribozyme技术分析发现位于内含子上的1号和3号靶点干预效果不如位于外显子上的2、4号靶点基因下调作用效果好，其中4号干预效果最好。实验显示，基于pre-mRNA获得的反义靶点并未显示较好下调作用，可能对基因干预无显着意义，而mRNA的靶点干预仍然是值得重视和关注的焦点。(本文来源于《吉林大学》期刊2013-05-01）
张明,范海涛,李然伟,温都苏,刘禄成[4]（2013）在《反义微小RNA-21基因治疗改善膀胱癌化疗敏感性的实验研究及临床应用前景》一文中研究指出目的建立裸鼠原位膀胱癌移植瘤模型,探讨反义微小RNA-21(miRNA-21)腺病毒载体+化疗药物丝裂霉素C(mitomycinC.MMC)对裸鼠膀胱癌发生、发展及转移的作用,为评价基因治疗改善膀胱癌化疗耐药性的策略提供实验依据。方法分别用携带反义miRNA-21载体+MMC和单独使用携带反义miRNA-21载体或MMC经尿道膀胱灌注治疗成瘤裸鼠,观察肿瘤生长及盆腔淋巴结转移情况,同时应用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测瘤细胞的增殖,原位末端标记(TUNEL)法测定瘤细胞的凋亡。结果 MTT法检测结果显示,联合用药组,反义miRNA-21组和MMC组细胞的增殖率分别是25.6%±6.9%,50.4%±8.3%,37.9%±2.8%,组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法测定结果提示:瘤细胞凋亡率依次为:联合用药组(81.5%±6.1%),反义miRNA-21组(49.5%±7.3%),MMC组(56.8%±3.9%),组间比较P<0.05。联合用药组10只成瘤裸鼠中无一只出现盆腔淋巴结转移,转移率为零,而单独应用载体或化疗组各发生4只转移,转移率为40%(4/10),组间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论基因治疗+化疗联合治疗人膀胱癌裸鼠原位移植瘤的策略明显优于只用基因或化疗的单一治疗方法。(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2013年04期）
方丽,陈乔尔[5]（2013）在《FasL的反义基因在肿瘤治疗中的作用》一文中研究指出Fas/FasL是近年来研究较多的凋亡和免疫调节分子,在肿瘤的免疫逃逸中占重要地位,这一机制的阐明,对肿瘤的治疗有重要的意义。随着反义基因技术的不断发展,以Fas/FasL为靶点的反义基因研究,因其特异性高,副作用小等优点,被认为是最有前途的肿瘤治疗方法之一。该文就目前针对以FasL为靶点的反义基因技术与肿瘤免疫逃逸的相关研究做一综述。(本文来源于《安徽医药》期刊2013年03期）
张久维,程文,荆慧,郭文佳,韩雪[6]（2012）在《靶向微泡造影剂介导c-myc反义基因治疗移植肝癌的实验研究》一文中研究指出目的研究携半乳糖化多聚赖氨酸(G-PLL)的靶向超声造影剂介导c-myc反义寡核苷酸(c-mycASODN)在肝癌组织中的转染效果。方法以"生物素-亲和素"系统制备超声微泡、G-PLL和c-myc ASODN叁者的耦联物,静脉导入荷瘤鼠体内,给予超声辐照。定期测量肿瘤大小,计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线。28 d后处死小鼠,取肿瘤组织检测c-myc基因和蛋白的表达情况。结果耦联物作用后的实验组抑瘤率明显高于其它各组,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.05);肿瘤内c-myc mRNA及c-myc蛋白的表达也均低于其它各组(P<0.05)。结论耦联GPLL及反义基因的微泡造影剂经超声辐照可提高治疗基因在小鼠肝癌组织中的转染率。(本文来源于《中国超声医学工程学会第十一届全国超声医学学术大会论文汇编》期刊2012-07-06）
张久维,程文,荆慧,郭文佳,韩雪[7]（2010）在《靶向微泡造影剂介导c-myc反义基因治疗移植肝癌的实验研究》一文中研究指出目的研究携半乳糖化多聚赖氨酸(G-PLL)的靶向超声造影剂介导c-myc反义寡核苷酸(c-myc ASODN)在肝癌组织中的转染效果。方法以"生物素-亲和素"系统制备超声微泡、G-PLL和c-myc ASODN叁者的耦联物,静脉导入荷瘤鼠体内,给予超声辐照。定期测量肿瘤大小,计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线。28d后处死小鼠,取肿瘤组织检测c-myc基因和蛋白的表达情况。结果耦联物作用后的实验组抑瘤率明显高于其它各组,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.05);肿瘤内c-mycmRNA及cmyc蛋白的表达也均低于其它各组(P<0.05)。结论耦联G-PLL及反义基因的微泡造影剂经超声辐照可提高治疗基因在小鼠肝癌组织中的转染率。(本文来源于《中国超声医学杂志》期刊2010年08期）
周涌,李富宇,王晓东,蒋力生,程南生[8]（2010）在《反义基因治疗对慢性增生性胆管炎的抗增殖作用》一文中研究指出目的:探讨并对比PCNA、c-Myc、cdc2k shRNA对PC的过度增殖和成石潜力的影响,以期筛选PC抗增殖治疗的最佳靶点.方法:经十二指肠乳头向胆总管内逆行插入尼龙缝合线建立慢性增生性胆管炎的大鼠实验模型.叁种反义治疗组则以尼龙缝合为导引向胆总管内分别注入0.5mL的PCNA、c-Myc或cdc2k shRNA.结果:PCNAshRNA治疗组的胆道黏膜上皮和胆管壁胶原纤维的过度增殖程度均明显低于c-Myc、cdc2k shRNA治疗组;此外,PCNA shRNA治疗组胆管壁的黏蛋白基因表达及黏蛋白分泌也低于c-Myc、cdc2k shRNA治疗组.结论:PCNA shRNA治疗能够更为有效的抑制PC病变胆管的胶原纤维过度增生及黏液过度分泌,更有望达到预防胆道再狭窄和结石术后复发的目的.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2010年08期）
谢书阳,李伟,任兆瑞,张敬之,郭歆冰[9]（2009）在《siRNA和反义RNA质粒直接注射对地中海贫血小鼠进行基因治疗的研究》一文中研究指出目的α/β-珠蛋白肽链合成不平衡引起游离α-肽链相对过剩的毒害作用是β-地中海贫血(简称β-地贫)主要发病学环节。若能同时采用RNA干扰技术抑制α-珠蛋白基因的表达和反义RNA技术恢复β~(654)-地贫正常的剪接模式则是治疗β~(654)-地贫的可行途径。本研究在β~(654)-地贫模型小鼠水平探讨RNA干扰和反义RNA载体直接注射法治疗β~(654)-地贫的可行性。方法针对鼠α珠蛋白基因和β~(654)-异常剪切位点分别构建H1启动子小RNA(siRNA)干扰载体和反义RNA载体,然后将它们分别转染Mel细胞和HeLaβ~(654)细胞,培养叁周后收获细胞,RT-PCR和定量RT-PCR测定α珠蛋白基因和β~(654)mRNA表达水平以证明载体构建的正确性及其抑制α珠蛋白基因表达和恢复β~(654)异常剪接的有效性;继而将siRNA和反义RNA载体经尾静脉直接注射至β~(654)-地贫模型小鼠体内,定期测定治疗鼠α珠蛋白基因和β~(654)mRNA表达水平以及血液学参数,共四周;同时观察骨髓、肝、脾的组织学变化情况。结果siRNA处理的Mel细胞的α珠蛋白基因的表达水平明显下降,定量RT-PCR测定结果显示处理组α/GAPDH mRNAs较对照组显着减少(0.93±0.07 vs 3.11±0.08,p<0.01)。β~(654)-基因的正常剪切模式达到恢复。β~(654)4-地贫模型小鼠注射RNA干扰和反义RNA载体后,外周血异形细胞核靶形细胞的数量减少了40%,网织细胞的含量减少20%,而Hb含量和RBC数目也显上升,这种效应维持到注射后第27天。RT-PCR分析结果表明治疗组小鼠正常的剪接模式达到了6%。小鼠骨髓的增生情况改善,每一视野骨髓片中的有核细胞数从注射前的50.8±2.8下降到注射后的30.0±2.7;髓外造血(EMH)在注射后明显减少;肝组织中铁堆积从注射前每一视野108.2±7.8下降到注射后58.6±6.1。未见小鼠在载体治疗后出现任何毒副反应。结论RNA干扰和反义RNA载体的直接注射可以使β~(654)-地贫模型小鼠α/β-珠蛋白肽链合成不平衡的状况得到中等程度的更正,从而地贫的贫血表型得以改善,是一种比较有效的治疗β~(654)-地贫的方法。较之我们先前报道的慢病毒介导的方法,载体直接注射更为安全,从而为β~(654)-地贫的治疗提供了另一种潜在的治疗途径。(本文来源于《第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编》期刊2009-07-11）
徐亮,何军林[10]（2009）在《反义,RNA干扰,基因沉默策略用于疾病治疗是否可行》一文中研究指出反义寡核苷酸能调节基因表达,调控细胞功能和分化及细胞对于内外刺激的反应。虽然其作为治疗手段在临床前和临床研究中均已取得了令人鼓舞的结果,但实际运用中,仍有几大难点有待解决,包括效价、脱靶效应、转运及不良反应等。从反义寡核苷酸研究中获得的经验有助于其他基于寡核苷酸药物的研发,如CpG寡核苷酸、RNA干扰和微小RNA等。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2009年03期）
反义基因治疗论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的：慢病毒(lenti-virus)为载体介导Blimp1-shRNA转染向树突状细胞(dendritic cells, DCs)分化的骨髓原代细胞,观察转染效率、细胞生长及分化成熟情况。方法：构建Blimp1-shRNA,用慢病毒载体将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞中并诱导向DC分化；根据转染条件将实验分为空白对照(empty-control)组、空载病毒对照(lenti-control)组和慢病毒-Blimp1shRNA (lenti-Blimp1)组；于1周内观察荧光水平以评估转染效率,观察细胞的形态变化,记录细胞的生长情况；分别于转染后72h、96h收集细胞比较各组Blimp1mRNA、蛋白的表达情况；收集转染后第7天细胞,检测CDllc+、CD86+、MHCⅡ+细胞百分比。结果：病毒侵染后第3天细胞出现荧光,lenti-control组和lenti-Blimp1组荧光表达率为30.8+4.4%、30.4+4.8%,而后荧光持续并稳定；生长曲线显示,Empty-control组细胞在培养的前3天内呈对数增长,第4天细胞数目达到峰值(2.45+0.26×106／孔),培养第6天后细胞数目略有下降(2.35+0.20×106／孔),至第8天为2.27+0.19×106／孔；lenti-control组和lenti-Blimp1组细胞在病毒侵染后,细胞增殖停滞,随后细胞数目稳定在1.69+0.39×106／孔；lenti-Blimp1组Blimp1mRNA和蛋白的水平为lenti-control组的1.3%和70.4%,为empty-control组的1.0%和74.0%；empty-control组、lenti-control组和lenti-Blimp1组中CD11c+细胞百分比为69.24+4.98%、68.56+5.86%和72.76+5.52%,而empty-control组、lenti-control组和lenti-Blimp1组中CD86+和MHCII+细胞百分比分别为51.08+4.93%、49.52+4.28%、50.20+6.01%和56.28+7.30%、69.38土4.52%、46.48+5.70%。结论：Blimp1基因的下调能够抑制DC成熟,慢病毒介导的shRNA基因治疗是调控髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反义基因治疗论文参考文献
[1].刘缘,丁洪波,全家妩.p53基因质粒联合反义c-myc基因质粒治疗人膀胱癌作用机理的研究[J].江苏预防医学.2015
[2].李幸.慢病毒载体介导Blimp1-shRNA反义基因治疗调控髓源性DC前体细胞分化的研究[D].华中科技大学.2013
[3].李菲菲.GPA基因反义核酸靶点发掘和反义治疗实验研究[D].吉林大学.2013
[4].张明,范海涛,李然伟,温都苏,刘禄成.反义微小RNA-21基因治疗改善膀胱癌化疗敏感性的实验研究及临床应用前景[J].中国实验诊断学.2013
[5].方丽,陈乔尔.FasL的反义基因在肿瘤治疗中的作用[J].安徽医药.2013
[6].张久维,程文,荆慧,郭文佳,韩雪.靶向微泡造影剂介导c-myc反义基因治疗移植肝癌的实验研究[C].中国超声医学工程学会第十一届全国超声医学学术大会论文汇编.2012
[7].张久维,程文,荆慧,郭文佳,韩雪.靶向微泡造影剂介导c-myc反义基因治疗移植肝癌的实验研究[J].中国超声医学杂志.2010
[8].周涌,李富宇,王晓东,蒋力生,程南生.反义基因治疗对慢性增生性胆管炎的抗增殖作用[J].世界华人消化杂志.2010
[9].谢书阳,李伟,任兆瑞,张敬之,郭歆冰.siRNA和反义RNA质粒直接注射对地中海贫血小鼠进行基因治疗的研究[C].第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编.2009
[10].徐亮,何军林.反义,RNA干扰,基因沉默策略用于疾病治疗是否可行[J].国际药学研究杂志.2009
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