论文摘要
小鼠Dlk1-Dio3印记基因簇作为一个重要的印记簇,存在于12号染色体末端占基因组区域1Mb左右。含括父本表达蛋白编码基因Dlk1、Rtl1和Dio3,多种母本表达非编码RNA基因,此外还分布着大量的miRNAs及snoRNAs。这一印记基因簇在小鼠胚胎发育、细胞重编程和遗传性疾病的发生等过程起着重要作用,若区域内印记基因发生异常会致使生长发育紊乱,甚至死亡,故对此区域的研究非常重要。目前,Dlk1-Dio3印记基因簇内已发现的三个主要差异甲基化区:IG-DMR、Gtl2-DMR和Dlk1-DMR,都为父本甲基化。本实验室前期发现研究现命名为Meg8-DMR为此区域第一个母本甲基化的差异甲基化区,可能有重要的印记调控功能。本课题基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建的Meg8-DMR敲除鼠模型,初步探究Meg8-DMR对于区域内印记基因的影响。首先对课题组前期所获Meg8-DMR敲除的杂合子(Meg8-DMR+/-或Meg8-DMR-/+),纯合子(Meg8-DMR-/-),野生型(Meg8-DMR+/+)小鼠胚胎期相关生长发育指标进行观测分析表明,与野生型相比,Meg8-DMR的缺失对小鼠胚胎形态、体重及平均产子数未产生明显影响,但会导致一定比例的胎儿致死。Meg8-DMR单等位敲除小鼠自交,会导致子代小鼠野生型比率偏低(13.98%)。其次通过半定量及定量检测Meg8-DMR敲除对小鼠发育中后期E12.5胚胎及E15.5各组织中相关印记基因表达的影响,提示Meg8-DMR的敲除对区域内基因表达总体未产生明显影响,无统计学差异。但在Meg8-DMR母本敲除及Meg8-DMR亲本双等位敲除小鼠胚胎中,Irm的表达有显著上调趋势。最后通过SNP测序的方法检测Meg8-DMR敲除对于区域内主要印记基因的印记模式影响,结果显示,Meg8-DMR的缺失并不改变区域内主要印记基因Dlk1、Gtl2及Rian的印记模式。综上所述,Meg8-DMR的缺失未对小鼠胚胎形态体重等产生明显影响,但会导致一定比例的胎儿致死。在分子水平上,Meg8-DMR的缺失并不影响区域内主要印记基因的印记模式,也未对区域内印记基因表达量产生明显影响,只有同位于Rian内的Irm在Meg8-DMR-/+及Meg8-DMR-/-小鼠中表达量显著上调。研究提示Meg8-DMR可能作为Rian的调控区会明显调控邻近基因的表达量。本研究有助于了解Meg8-DMR在胚胎发育过程中的生物学功能,有助于进一步阐明Meg8-DMR的转录调控机制。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 潘雪
导师: 吴琼
关键词: 基因编辑小鼠,印记基因,基因表达
来源: 哈尔滨工业大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学,生物学,生物学
单位: 哈尔滨工业大学
基金: 国家自然科学基金面上项目(项目批准号 31771601)
分类号: Q343.1;Q78
DOI: 10.27061/d.cnki.ghgdu.2019.003594
总页数: 70
文件大小: 3205K
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