导读:本文包含了豇豆胰蛋白酶抑制剂基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胰蛋白酶,抑制剂,豇豆,基因,转基因,杆菌,水稻。
豇豆胰蛋白酶抑制剂基因论文文献综述
胡贻椿[1]（2010）在《转高赖氨酸基因、转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性评价与转豇豆胰蛋白酶抑制剂水稻的外源蛋白表达纯化》一文中研究指出目的为评价营养改良型转高赖氨酸基因水稻、转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性,采用营养成分分析、动物喂养实验等方法,观察转基因水稻对动物机体的生长发育、消化代谢、亚慢毒性、营养与健康状况等的影响,从不同的角度对转基因水稻进行食用安全性评价；为评价抗虫转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)水稻中外源蛋白的食用安全性,利用大肠杆菌原核表达系统重组表达CpTI蛋白,为进一步的毒性、致敏性评价研究奠定基础。材料与方法1.转高赖氨酸基因水稻的食用安全性评价营养成分比较对转高赖氨酸基因水稻和亲本水稻的蛋白质、碳水化合物、脂肪、纤维素、维生素和矿物质等进行测定,比较转基因水稻与亲本水稻在主要营养成分上是否具有显着差异。主要营养素的体内消化代谢研究选取8头10月龄成年去势五指山小型公猪,适应喂养7天(期间驱虫处理)后进行回肠造瘘手术。术后恢复2周,选择其中恢复良好的6头小型猪进行试验。以Cr2O3为指示剂掺入饲料,亲本大米饲料为对照,采用重复拉丁方设计饲喂大米饲料。每种饲料适应喂养4天后连续收集3天食糜,最后统一饲喂5%酪蛋白饲料测定内源性氨基酸排出量。将收集的食糜混匀、冷冻干燥、过筛,测定食糜中主要营养素的含量(蛋白质/氨基酸、碳水化合物、脂肪、纤维素),计算和比较各种营养素的消化率。采用氨基酸评分(AAS)和经蛋白质消化率校正的氨基酸评分(PDCAAS)评价大米中蛋白质的质量。亚慢毒性评价(90天喂养实验)选取初断乳Wistar大鼠60只,雌雄各半,体重60-75g。大鼠于SPF级动物房单笼饲养,自由饮水、进食。适应喂养7d后按体重随机分为3组,分别饲喂转基因大米饲料(HL5组)、非转基因亲本大米对照饲料(WT组)和AIN-93G配方对照饲料(AIN对照组)。每周记录体重1次,进食量2次。实验中期和实验结束时各检测血常规和血生化1次。实验结束后处死大鼠,取右股骨测量骨密度；取脑、心、肝、脾、肾、肾上腺、睾丸、胸腺称重,计算脏器系数；对上述脏器及肺、胃、甲状腺、十二指肠、子宫、附睾、卵巢和前列腺等进行病理学检查。2.转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性评价营养成分比较对转人乳铁蛋白基因水稻和亲本水稻的蛋白质、碳水化合物、脂肪、纤维素、维生素和矿物质等进行测定,比较两种水稻在主要营养成分上是否存在显着差异。主要营养素的体内消化代谢研究6头已安装T型瘘管的成年去势五指山小型公猪为实验动物,Cr203为指示剂掺入饲料。两种大米饲料分别适应喂养4天后连续3天收集食糜,5%酪蛋白饲料用于测定内源性氨基酸排出量。将收集的食糜样品混匀、冷冻干燥、过筛,测定和和比较两种水稻主要营养素的消化率。试验结束处死小型猪,取瘘管安置处及上、下端的肠段进行病理检测。采用AAS和PDCAAS法评价大米中蛋白质的质量。亚慢毒性评价(90天喂养实验)初断乳Wistar大鼠80只,雌雄各半,体重60-75g。大鼠于SPF级动物房单笼饲养,自由饮水、进食。适应喂养7d后按体重随机分为4组,分别饲喂转基因高剂量大米饲料(hLF高剂量组)、转基因中剂量大米饲料(hLF中剂量组)、非转基因亲本大米对照饲料(PR组)和AIN-93G配方对照饲料(AIN对照组)。每周记录体重1次,进食量2次。实验中期和实验结束时各检测血常规和血生化1次。实验结束后处死大鼠,取右股骨测量骨密度；取内脏称重,计算脏器系数；并对主要脏器进行病理学检查。营养学评价(28天喂养实验)采用蛋白质功效比值(PER)法评价转基因水稻的营养价值。初断乳Wistar大鼠80只,雌雄各半,体重55-65g,于SPF动物房中单笼饲养。根据PER法要求,以大米中蛋白质最大掺入为原则,并使各组饲料的蛋白质含量达到10%配制饲料。大鼠适应喂养7d后按体重随机分为4组,分别饲喂转基因高剂量大米饲料(hLF高剂量组)、转基因中剂量大米饲料(hLF中剂量组)、非转基因亲本大米对照饲料(PR组)和酪蛋白对照饲料(酪蛋白对照组),每周记录体重1次,进食量2次。结束时检测血常规、血生化、骨密度,计算和比较各组的PER值。3.豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)蛋白的表达纯化融合表达纯化将CpTI基因序列与pTWIN2载体进行重组构建(pTWIN2-CpTI),诱导表达CpTI基因与内含肽、几丁质形成的融合蛋白,通过几丁质柱层析、温度和pH值的变化诱导内含肽的肽键裂解,释放出目标蛋白；将CpTI基因序列与pPAL7载体进行重组构建(pPAL7-CpTI),诱导表达CpTI基因与Profinity eXact标签形成的融合蛋白,通过亲和层析纯化获得目标蛋白。非融合表达纯化利用PET41EK/LIC载体进行非融合表达,切除载体上的GST标签并将CpTI基因序列与载体进行重组构建,获得能表达天然CpTI蛋白的载体PET41EK-CpTI,对诱导表达条件、离子交换纯化条件等进行优化,获得无多余氨基酸残基的目标蛋白。结果1.转高赖氨酸基因水稻的食用安全性评价转高赖氨酸基因水稻与亲本水稻在主要营养成分上没有显着差异。主要营养素体内消化代谢实验结果表明转高赖氨酸基因水稻与亲本水稻在动物营养代谢利用率上没有显着差异。转基因水稻既不会影响动物体内蛋白质和氨基酸的正常消化代谢,也不会干扰其他营养素的消化代谢,不影响动物正常的生长发育代谢。转高赖氨酸基因水稻GT3、HL5及亲本水稻的AAS分别为47.82%、65.11%、56.44%,PDCAAS分别为53.45%、67.49%、58.70%。亚慢毒性评价结果表明,转高赖氨酸基因大米组与两个对照组在进食量、体重增长上没有显着差异(P>0.05)。血常规(PLT、GRN、RBC、MCH、LYM)、血生化(GLU、LDLC)、脏器系数(脑/体、肾脏/体、脾脏/体)、骨密度的个别指标与对照组之间有显着差异(P<0.05)。对比存在差异的指标,大部分在数值上的差异并不大,仅有统计学差异,且各项指标基本在文献报道的正常范围内。病理学检查未发现明显异常。2.转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性评价转人乳铁蛋白基因水稻与亲本水稻在乳铁蛋白、赖氨酸、铁元素等特定营养成分上存在显着差异。主要营养素体内消化代谢实验结果表明转人乳铁蛋白基因水稻中主要营养素在小型猪体内的消化代谢与亲本水稻没有显着差异(P>0.05),不会干扰动物的正常消化代谢,也不影响动物正常的生长发育代谢。转人乳铁蛋白基因水稻与亲本水稻的AAS分别为50.27%,53.24%,PDCAAS分别为54.06%,52.66%。亚慢毒性评价结果显示,转人乳铁蛋白基因大米组与两个对照组在进食量、体重增长上没有显着差异(P>0.05),高剂量组和中剂量组之间也没有显着差异(P>0.05)。实验期间,hLF剂量组大鼠血常规(RBC, WBC, HGB, MCH)、血生化(AST, ALT, GLU)、脏器系数(胸腺/体,肾脏/体,肝脏/体)、骨密度的部分指标与对照组存在显着差异(P<0.05),但各项指标基本在文献报道的正常范围内。各组的血钙浓度没有显着差异,病理学检查未发现明显异常。营养学评价结果显示,hLF剂量组大鼠在血常规(RBC、HGB、MCH)、血生化(TP、ALP、BUN、CHO、HDLC)、骨密度的个别指标上与两个对照组具有显着差异(P<0.05)。在蛋白质功效比值(PER)上,hLF高剂量组与酪蛋白对照组没有差异(P>0.05),但显着高于PR组(P<0.05); hLF中剂量组显着高于其他叁组(P<0.05)。经校正的PER值依次为PR组1.97,hLF高剂量组2.50,hLF中剂量组2.73。表明转人乳铁蛋白基因水稻比亲本水稻能更好的被机体吸收利用,中剂量的转人乳铁蛋白基因水稻比高剂量更易于被吸收利用。3.豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)蛋白的表达纯化pTWIN2-CpTI融合表达体系经诱导后获得了有活性的CpTI融合蛋白,但表达的融合蛋白经几丁质柱层析及pH值、温度的诱导裂解等不能获得目的蛋白；pPAL7-CpTI融合表达体系经诱导获得了具有活性的CpTI融合蛋白,融合蛋白经亲和层析获得了具有活性、与天然蛋白一致的CpTI蛋白,纯度可达90%,产量为1.67mg/L诱导菌液。由于融合表达获得的CpTI蛋白产量较低,我们对CpTI蛋白进行了非融合表达的探索。构建的非融合表达体系经诱导条件及离子交换纯化条件等优化处理后,可以得到纯度达到95%、具胰蛋白酶抑制活性的CpTI蛋白,其产量提高到了15mg/L诱导菌液。CpTI纯化蛋白在活性、分子量及免疫原性等方面与天然CpTI蛋白基本一致。小结1.转高赖氨酸基因水稻的食用安全性评价经过对转高赖氨酸基因水稻(GT3、HL5)的营养成分分析、主要营养素的体内消化代谢及亚慢毒性等安全性评价研究,表明转高赖氨酸基因水稻与亲本水稻在主要营养成分上没有显着差异,其不影响动物正常的生长发育代谢。亚慢毒性评价未发现转高赖氨酸基因水稻对健康具有毒副作用。HL5水稻的AAS和PDCAAS评分略高于亲本水稻,提示该转基因水稻蛋白质的质量可能稍高于亲本水稻。动物实验中,虽然个别指标在组间存在统计学差异,但大多数指标数值的差异并不大,且各项指标基本符合文献报道的正常范围。病理检查也未发现具有显着差异的病变。本研究的安全性评价未发现转高赖氨酸基因水稻对健康的副作用。2.转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性评价转人乳铁蛋白基因(hLF)水稻与亲本水稻在主要营养成分上没有显着差异,主要营养素在动物体内的消化代谢与亲本水稻也没有显着差异,不影响动物正常的生长发育代谢。亚慢毒性评价未发现任何对健康不利的毒副作用。hLF剂量组的PER值显着高于亲本大米组,且其PDCAAS评分略高于亲本大米,说明hLF大米更容易被机体吸收利用,其蛋白质的质量可能稍高于亲本大米。动物实验中,虽然个别指标在组间存在统计学差异,但各项指标基本在文献报道的正常范围内。病理检查也未发现具有显着差异的病变。本研究的安全性评价未发现转人乳铁蛋白基因水稻对健康有副作用。营养学评价提示hLF水稻中蛋白质的质量稍高于亲本水稻。3.豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)蛋白的表达纯化本研究对转豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)水稻的外源蛋白表达和纯化进行了研究、摸索,通过对表达方式、诱导表达条件及纯化方式的探索、优化,建立了采用原核表达系统获得具有活性的CpTI蛋白的方法,表达的蛋白纯度达到95%以上,产量为15mg/L菌液,该方法操作简单、目的蛋白损失少且易于扩大生产,为进一步对外源CpTI蛋白的毒性、致敏性等评价研究奠定了基础。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2010-06-01）
王秀敏,韩烈保[2]（2009）在《豇豆蛋白酶抑制剂基因(CpTI)的克隆及其原核表达》一文中研究指出豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea TrypsinIn hibitor,CpTI)是一种植源性的抗虫蛋白,它可与昆虫消化道内的蛋白酶相互作用,形成酶-抑制剂复合物(EI),抑制了蛋白酶的消化活性;同时,(本文来源于《全国植物分子育种研讨会摘要集》期刊2009-01-04）
罗娟,王秀敏,韩烈保,刘君,曾会明[3]（2008）在《豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)的克隆及其植物表达载体的构建》一文中研究指出用CTAB法提取豇豆叶片总DNA后,根据基因两端的保守序列设计引物,经PCR方法扩增得到CpTI基因,将其克隆到pMD-18T载体上,酶切并测序鉴定,将该基因登陆到GeneBank(NO.EU088405)并进行同源性鉴定,证明该基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族中的一员。在此基础上,将CpTI基因用限制性内切酶BamHⅠ/SacⅠ切下后,克隆到pCUbi1303的UBI启动子和NOS终止子之间。经PCR和酶切鉴定,得到了该基因的真核表达载体pCUbiCpTI1303,为下一步的转基因做好了准备。(本文来源于《西北农业学报》期刊2008年03期）
徐鸿林,翟红利,王锋,朴建华,杨晓光[4]（2008）在《豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)及其在抗虫转基因作物中的应用》一文中研究指出豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpea trypsin inhibitor,CpTI)来自豇豆的可食用部分,由于其具有抗虫谱广且昆虫不易对其产生耐受性的特点,cpti基因被作为抗虫植物基因工程一个重要的候选基因。目前,cpti基因已经被转到烟草、水稻、棉花和番茄等多种作物中。本文介绍了CpTI的特性、抗虫机理、基因工程研究进展,以及转cpti基因水稻的安全性研究,并对蛋白酶抑制剂的分类和安全性问题做了相关介绍。CpTI在分类上属于Bowmun-Birk家族,大量医学研究表明,该家族蛋白质对于癌症的预防和辅助治疗都有积极作用,对人体不存在任何危害。(本文来源于《中国农业科技导报》期刊2008年01期）
赵强,赵志文,张廷婷,崔德才,王斌[5]（2005）在《豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究》一文中研究指出本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,其中部分株系的叶片可在一定程度上抑制扁刺蛾幼虫的生长。(本文来源于《生物技术通报》期刊2005年04期）
赵强[6]（2005）在《豇豆胰蛋白酶抑制剂基因及几丁质酶基因转化欧美杨的研究》一文中研究指出杨树是世界主要的造林和经济树种之一,在世界各地特别是中国均有广泛的栽培。欧美107 杨是从欧洲黑杨与美洲黑杨的杂交后代中选育出的一个无性系,具有抗逆能力强、材质好和速生等优点,它既可作为绿化树种,又可作为优质的纸浆原料,在工业用材中发挥重要作用,为目前推广的主要品系之一。几丁质酶可以将几丁质水解为N-乙酰氨基葡萄糖,大量研究表明,几丁质酶在植物体内和体外,对病原真菌的生长均有明显的抑制作用。豇豆胰蛋白酶抑制剂能抑制昆虫肠道蛋白酶活性,使昆虫生长发育缓慢,甚至死亡,具有广谱的抗虫作用。本研究选择欧美107 杨作为转基因的实验材料,研究了激素浓度等因素对其叶片的芽再生、继代、生根等方面的影响,建立了杨树高频再生体系。在此基础上,将编码豇豆胰蛋白酶抑制剂和几丁质酶的基因分别构建植物表达载体,以欧美107 杨叶片为外植体,利用改良的农杆菌介导法进行转化,获得转基因植株。具体试验结果如下:1. 建立了欧美107 杨离体叶片的高频芽再生体系。研究结果表明,不同的激素浓度配比对欧美107 杨组培苗不同外植体的分化和生长有重要影响。通过不同激素浓度配比的实验,确定了最佳继代培养基(MS + 0.15mg/L 6-BA + 0.1mg/L IBA + 0.1mg/L KT)、叶片芽再生培养基(MS + 0.5mg/L 6-BA + 0.1mg/L IBA)和生根培养基(MS + 0.05mg/L NAA)。pH值、琼脂浓度、温度、湿度等其他物理因素对其也有影响。2. 分别进行了选择性抗生素卡那霉素与潮霉素的敏感性试验,结果表明卡那霉素(Km)20 mg/L 可作为诱导叶片芽再生临界筛选和生根时筛选抗性植株的使用浓度; Km30 mg/L 可作为继代培养筛选抗性植株的使用浓度。而潮霉素对外植体毒害很大,不宜用作欧美107 杨的筛选抗生素。3. 用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107 杨中。经过严格的Km 筛选,得到了Km 抗性(Km~r) 植株。对部分Km~r 植株进行PCR 及PCR-Southern 杂交鉴定,证实CpTI 基因已整合到杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,部分株系的叶片可在一(本文来源于《山东农业大学》期刊2005-06-07）
芮玉奎,王保民,李召虎,段留生,田晓莉[7]（2004）在《转基因抗虫作物中豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)酶联免疫检测方法的建立》一文中研究指出从10个不同豇豆品种中筛选出抑制剂活性最高的901青皮豇豆,提取豇豆胰蛋白酶抑制剂。通过G-75凝胶过滤、亲和层析纯化了豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)并制备了其兔多克隆抗体。用所制备的抗体建立了酶联免疫检测方法并检测了转CpTI编码基因棉花、水稻中的CpTI含量,发现棉花不同器官CpTI的表达量不尽相同。(本文来源于《中国农业科学》期刊2004年10期）
吕玲玲,雷建军,宋明,曹必好,陈国菊[8]（2004）在《豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化花椰菜的研究》一文中研究指出通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对所获得的转基因植株进行PCR扩增,结果显示大多数为阳;PCR-Southern及Southern分子检测分析,结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中.转基因植株叶片的离体饲虫初步试验结果表明,对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用.(本文来源于《华南农业大学学报》期刊2004年03期）
伍晓丽,朱祯,李晚忱,潘光堂,曹墨菊[9]（2004）在《农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)在玉米中的遗传转化》一文中研究指出在众多玉米转化方法中 ,农杆菌法是很有发展潜力的手段之一 ,它具有诸多优点 :操作简便 ,一次性处理材料量大 ,成本低 ,可转化的外源DNA长 ,且外源基因大多为单拷贝插入。本实验用含质粒pBUSCK Hyg的根癌农杆菌感染玉米胚性愈伤组织 ,获得了转化(本文来源于《作物学报》期刊2004年03期）
杨朝辉,何凤田,宋明,江渝,彭家和[10]（2004）在《根癌农杆菌介导的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜的研究》一文中研究指出为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源,用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜,获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR Southernblot和Northernblot分析,转化再生植株大部分呈阳性,而非转化的再生植株均为阴性,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中。在室内进行了喂虫试验,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照,转基因植株之间存在抗虫性差异。(本文来源于《西南农业学报》期刊2004年01期）
豇豆胰蛋白酶抑制剂基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea TrypsinIn hibitor,CpTI)是一种植源性的抗虫蛋白,它可与昆虫消化道内的蛋白酶相互作用,形成酶-抑制剂复合物(EI),抑制了蛋白酶的消化活性;同时,
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
豇豆胰蛋白酶抑制剂基因论文参考文献
[1].胡贻椿.转高赖氨酸基因、转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性评价与转豇豆胰蛋白酶抑制剂水稻的外源蛋白表达纯化[D].中国疾病预防控制中心.2010
[2].王秀敏,韩烈保.豇豆蛋白酶抑制剂基因(CpTI)的克隆及其原核表达[C].全国植物分子育种研讨会摘要集.2009
[3].罗娟,王秀敏,韩烈保,刘君,曾会明.豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)的克隆及其植物表达载体的构建[J].西北农业学报.2008
[4].徐鸿林,翟红利,王锋,朴建华,杨晓光.豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)及其在抗虫转基因作物中的应用[J].中国农业科技导报.2008
[5].赵强,赵志文,张廷婷,崔德才,王斌.豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究[J].生物技术通报.2005
[6].赵强.豇豆胰蛋白酶抑制剂基因及几丁质酶基因转化欧美杨的研究[D].山东农业大学.2005
[7].芮玉奎,王保民,李召虎,段留生,田晓莉.转基因抗虫作物中豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)酶联免疫检测方法的建立[J].中国农业科学.2004
[8].吕玲玲,雷建军,宋明,曹必好,陈国菊.豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化花椰菜的研究[J].华南农业大学学报.2004
[9].伍晓丽,朱祯,李晚忱,潘光堂,曹墨菊.农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)在玉米中的遗传转化[J].作物学报.2004
[10].杨朝辉,何凤田,宋明,江渝,彭家和.根癌农杆菌介导的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜的研究[J].西南农业学报.2004
论文知识图
