导读:本文包含了霍乱毒素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:霍乱,毒素,单位,疫苗,蛋白,荧光,杆状。
霍乱毒素论文文献综述
胡玥,梁昊宇,周富昌,李颖茵,董思国[1]（2019）在《以霍乱毒素B亚单位为载体的甲型副伤寒多糖结合疫苗理化及生物学特性》一文中研究指出目的制备甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特异多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)结合疫苗,并初步探讨其理化及生物学特性。方法 SPA OSP多糖原液(简称OSP多糖)经溴化氰活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亚胺(EDAC)作用下与CTB偶联,结合物经Sepharose4FF柱纯化,获得多糖-蛋白结合物,对其理化指标、血清特异性、免疫原性及血清体外杀菌力进行检测。结果制备的SPA OSP-CTB结合物(简称OSP-CTB结合物)衍化度为(2. 63±0. 13)%、多糖回收率为(74±0. 2)%;鉴别试验显示OSP-CTB结合物与SPA O诊断血清、CTB抗体均有阳性沉淀线产生;免疫小鼠血清中OSP-CTB结合物抗体滴度显着增长,阳转率达100%,血清体外杀菌抗体滴度为1∶64。结论用溴化氰活化多糖制备的SPA OSP-CTB结合物具有良好免疫原性,可进一步进行疫苗研发。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年08期）
齐文静,何黎,王甜,郑雪婷,郭宝平[2]（2019）在《细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合霍乱毒素B亚单位疫苗的构建表达及免疫原性研究》一文中研究指出目的构建和表达细粒棘球绦虫成虫特异表达EgM123基因与霍乱毒素B的融合蛋白(CTB-EgM123);并确定CTB-EgM123蛋白的抗原性。方法将合成EgM123基因序列连接到pET28a/CTB原核表达载体中,并转化至大肠杆菌BL21中。利用IPTG诱导目的基因的表达;用SDS-PAGE及Western-Blotting对表达蛋白进行分析和鉴定;用纯化蛋白免疫小鼠及犬,用ELISA方法对小鼠及犬的血清抗体效价和肠黏液的抗体亚类进行分析。结果 PCR和测序确定CTB-EgM123基因片段长度为804 bp,pET28a/CTB-EgM123原核表达阅读框序列正确。在37℃条件下,经IPTG 0.4 mmol/L诱导5 h,获得CTB-EgM123高表达的包涵体蛋白,分子质量为37 kDa。免疫小鼠结果表明复性CTB-EgM123蛋白具较好免疫原性,抗体效价>320 000;以IgG2a为主。检测免疫犬血清效价,结果发现用融合蛋白免疫后的犬血清抗体效价>64 000,效价高于EgM123免疫组(t=0.0064,P<0.05);且在4周时,抗体呈上升趋势,并能较长时间维持抗体水平。结论原核表达载体pET28a/CTB-EgM123在大肠杆菌中成功表达,纯化蛋白接种小鼠和犬表明具有高的抗原性。表明CTB可以增强蛋白的免疫原性,并刺激小鼠和犬体内产生高水平的体液和黏膜免疫。本研究为研发犬用包虫病疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2019年07期）
李向阳,杨莹,张励才,颜超,孔凡运[3]（2019）在《霍乱毒素B亚单位对小鼠免疫细胞及细胞因子的影响》一文中研究指出目的探讨侧脑室注射霍乱毒素B亚单位(CTB)对小鼠免疫细胞及细胞因子的影响。方法 C57雌性小鼠侧脑室注射CTB,运用流式细胞术检测外周血免疫细胞亚群变化;流式微球捕获芯片技术(CBA)检测血清中细胞因子及趋化因子的变化。结果 CTB能够明显升高单核巨噬细胞、CD4~+T细胞及B细胞的比例;炎症因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-9(IL-9)及趋化因子巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)、B淋巴细胞趋化因子(BLC)、γ干扰素诱导的单核因子(Mig)、调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)也相应升高。结论侧脑室注射CTB能够明显改变小鼠免疫应答状态。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年04期）
徐玉梅,曹士德,朱传刚,张世清[4]（2019）在《日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶抗原表位与霍乱毒素B亚基融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞的表达》一文中研究指出PCR扩增日本血吸虫28 000谷胱甘肽-S-转移酶(Sj28GST)的主要抗原表位与霍乱毒素B亚基(CTB)的融合基因, CTB-Sj28GST经SalⅠ和SphⅠ双酶切后定向克隆至转移质粒pFastBac,构建重组转移质粒pFastBac-CTB-Sj28GST,转化DH10Bac感受态细胞进行基因的同源重组,提取重组病毒,用M13通用引物以及CTB-Sj28GST引物PCR鉴定阳性后转染草地贪夜蛾细胞(Sf9),收集亲代重组病毒反复感染Sf9细胞进行病毒扩增, PCR鉴定重组病毒。重组病毒感染细胞出现病变时,用抗Sj28GST多克隆抗体间接免疫荧光(IFA)鉴定重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)鉴定病毒感染细胞裂解液,分析重组蛋白的抗原性。研究结果表明, Sj28GST含有4个抗原表位,长189 bp,与CTB融合后长519 bp。重组转移质粒pFastBac-CTB-Sj28GST的PCR及序列鉴定与预期一致。Sf9转染细胞获得的重组病毒经PCR鉴定,获得与预期一致的519 bp片段。IFA鉴定表明,重组病毒感染的Sf9细胞呈现绿色荧光,未感染的对照细胞无绿色荧光。Western blotting鉴定在约Mr22 000处有特异性的蛋白条带,与预期目的蛋白大小一致。该重组蛋白能被抗Sj28GST多克隆抗体识别。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2019年03期）
黄春峰[5]（2018）在《霍乱弧菌MARTX毒素RID效应蛋白催化Rho家族小G蛋白长链脂肪酰基化修饰的分子机制》一文中研究指出MARTX毒素广泛存在于多种病原菌中,并在病原菌致病性中承担重要的角色。MARTX毒素由I型分泌系统分泌,插入到宿主细胞质膜上,通过真核细胞特有的InsP6分子激活半胱氨酸蛋白酶CPD,切割并释放MARTX毒素其他效应蛋白到细胞质中。这些效应蛋白调节宿主的多条信号通路。MARTX毒素是霍乱弧菌的主要毒力因子之一。先前有研究报道,RID作为保守的MARTX毒素效应蛋白,破坏宿主细胞肌动蛋白骨架,但其机制仍是未知。在本研究中,我们揭示了 RID通过催化翻译后修饰失活Racl小G蛋白。这种未知的修饰导致Racl在聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现向下的迁移。同时,RID对Racl的修饰扰乱了 Racl在细胞质与细胞膜之间的循环。为了揭示RID的酶学活性,我们进行了结构生物学研究。在多次尝试了不同MARTX毒素来源的RID蛋白后,我们最终解析了来自创伤弧菌的RID全长的晶体叁维结构。通过结构生物学研究,我们发现RID是一个扭曲的“U”型结构。N端膜定位区域特异性地结合PtdIns(4,5)P2。RIDC端催化域的结构与人源酰基转移酶HRASLS3结构相似。通过生物化学实验和质谱分析,我们揭示了 RID是一个酰基转移酶,它以长链脂肪酰基辅酶A为配体,催化Racl C端赖氨酸残基脂肪酰基化。RID修饰Racl时必须识别Racl C末端异戊烯化修饰。RID具有脂肪酰基化Rho家族其他小G蛋白的能力,如RhoA和Cdc42,但是更倾向于修饰Racl。同时我们也发现RID对Racl的脂肪酰基化抑制不同类型的鸟苷酸交换因子对Rac的激活。Racl的脂肪酰基化,还抑制了 Racl下游激酶PAK1的激活。在细菌感染过程中,RID抑制了由Rho家族小G蛋白介导的细胞进程,如细胞吞噬、活性氧的产生、细胞迁移。总的来说,RID是一个长链脂肪酰基转移酶,修饰Rho家族小G蛋白C端多碱性区域赖氨酸残基。RID的催化域和志贺氏菌叁型分泌系统效应蛋白IcsB、伯克氏菌效应蛋白BopA具有序列相似性。在哺乳动物细胞中,一些细胞因子和组蛋白也存在赖氨酸的长链脂肪酰基化修饰,但催化这种修饰的酶尚未被发现。我们的研究揭示了 RID的分子机制,它代表了病原细菌中一类具有长链脂肪酰基转移酶活性的细菌毒素或效应蛋白。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-03-01）
吴家媛,刘建国,马欣荣,洪献忠,吴志刚[6]（2016）在《变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因转基因黄瓜植株的获得及鉴定》一文中研究指出目的:经农杆菌介导将变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因导入黄瓜,获得转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的研究提供实验基础。方法:利用双元载体pCAMBIA2301构建变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合质粒(PAcA-ctxB)的植物表达载体p2355-PAcA-CTB;电转化法导入农杆菌EHA105;采用叶盘转化法转化黄瓜,转基因植物经过卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测目的基因鉴定。结果:成功得到转基因黄瓜植株,卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测证实目的基因PAcA-ctxB已整合至黄瓜基因组中。结论:获得了含有变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因的转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的进一步研究提供了实验基础。(本文来源于《口腔医学研究》期刊2016年09期）
李图帅,陈瑾,乔绪稳,汪浩,张元鹏[7]（2016）在《利用霍乱毒素B亚单位展示猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白主要抗原表位》一文中研究指出为探讨以霍乱毒素B亚单位为载体制备口蹄疫亚单位疫苗的可行性,利用E.coli表达CTB-GHloop嵌合基因,用SDS-PAGE分析目的基因的表达及表达产物的可溶性,利用神经节苷脂(GM1)为抗原鉴定重组蛋白五聚体的形成。将目的蛋白浓度调整为200μg/ml,以白油佐剂乳化制备疫苗,免疫健康仔猪,免疫后利用ELISA测定特异性抗体水平,评价免疫后体液免疫反应,利用淋巴细胞增殖实验评价细胞免疫水平。结果表明嵌合基因在E.coli中获得高效表达,重组蛋白可溶,并能够形成五聚体;Western-blot结果显示重组蛋白能够与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生反应;以每头仔猪200μg免疫,试验猪产生较高的抗体水平与细胞免疫反应。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2016年03期）
姚飞[8]（2016）在《霍乱毒素B亚单位与荧光金在视网膜神经节细胞逆行示踪中的比较》一文中研究指出目的:比较两种常用逆行示踪剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)与荧光金(Fluoro-Gold,FG)在SD大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)逆行示踪中的异同。方法:选取22只体重210-240g的雌性SD大鼠,分别在每只大鼠的双侧上丘和外侧膝状体内同时注射逆行示踪剂。颅内注射CTB且术后存活1周或2周的大鼠被分别记作CTB-1w组(n=5只,10眼)和CTB-2w组(n=5只,10眼);颅内注射FG且术后存活1周或2周的大鼠被分别记作FG-1w组(n=5只,10眼)和FG-2w组(n=5只,10眼);剩余的2只大鼠颅内注射CTB与FG的等比混合溶液而作为对照组。术后1周或2周后对大鼠处死后取材,将视网膜、视神经和脑组织处理后置于荧光显微镜下观察拍照,用Image-Pro Plus6.0软件对所拍摄的图片进行分析,具体参数包括:RGCs平均密度、RGCs突起平均长度、RGCs突起平均数目、示踪剂的扩散面积。采用IBM SPSS Statistics 22.0软件对所测数据进行统计分析,设定p<0.05为差异有统计学意义。结果:在RGCs平均密度和示踪剂扩散面积上,FG-1w组和FG-2w组均明显大于CTB-1w组和CTB-2w组(p均<0.001),CTB-2w组明显大于CTB-1w组(p均<0.001),但FG-1w组和FG-2w组之间无明显统计学差异(p均>0.05)。至于RGCs突起平均长度和RGCs突起平均数目的统计结果,CTB-1w组与CTB-2w组之间以及FG-1w组与FG-2w组之间均无统计学差异(p均>0.05),但CTB组的RGCs突起平均长度和RGCs突起平均数目无论是在第1周还是第2周都明显的大于FG组(p均<0.001)。同时,研究还发现CTB逆行标记的视神经较FG标记的视神经在形态学上更加清晰。结论:(1)CTB和FG均能够在1周和2周时逆行标记SD大鼠的RGCs;(2)CTB标记的RGCs在形态学上较FG更为清楚,而FG标记的RGCs在数目上较CTB更为全面。(本文来源于《新疆医科大学》期刊2016-05-01）
党东峰,Larena,M[9]（2016）在《霍乱毒素及相关无毒助剂mmCT和dmLT,通过环腺苷酸蛋白激酶A和炎性体依赖白介素-1信号促进Th-17细胞应答》一文中研究指出本文研究了霍乱毒素(CT)和两个新的无毒分子,多点突变的霍乱毒素(mm CT)和双突变体不耐热毒素(dm LT)对人T细胞应答的佐剂效应的分子途径。通过CT、mm CT或dm LT体外刺激人外周单核细胞或者分离出的单核细胞,加上一种多克隆刺激(葡萄球菌肠毒素B)或者是特定细菌抗原,并测定细胞因子和信号分子的表达效果。CT、mm CT和dm LT能够强烈的增强IL-17A并且在较小程度上降(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2016年02期）
周小芬,林卫萍,何华红,李想,张焜[10]（2015）在《不相容双质粒共表达霍乱毒素类似嵌合蛋白》一文中研究指出霍乱毒素由5个B亚基(CTB)和l个A亚基(CTA)(包括CTA1和CTA2)组成。该蛋白结构可帮助有毒的CTA1分子进入细胞。本研究拟利用原核不相容双质粒共表达系统获得霍乱毒素类似嵌合蛋白,用于大分子蛋白质黏膜给药的载体研究。将CTB基因片段克隆至载体p ET-28a中,获得重组质粒p ET-28a-CTB;以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)代替有毒的CTA1,在CTA2序列N端融合穿膜肽(TAT),将EGFP-CTA2-TAT基因克隆至载体p ET-22b(+)中,获得重组质粒p ET-22b-EGFP-CTA2-TAT。利用p ET-28a-CTB和p ET-22b-EGFP-CTA2-TAT二者不同抗性,将双质粒分步转化到大肠杆菌BL21中。表达条件为0.75 mmol/L IPTG、20℃、200 r/min诱导20 h,重组嵌合蛋白能以可溶形式表达。经过Ni-NTA、Sephadex G-75纯化,Western blotting对蛋白质特异性进行鉴定,确定获得(CTB)5/EGFP-CTA2-TAT嵌合蛋白。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2015年07期）
霍乱毒素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建和表达细粒棘球绦虫成虫特异表达EgM123基因与霍乱毒素B的融合蛋白(CTB-EgM123);并确定CTB-EgM123蛋白的抗原性。方法将合成EgM123基因序列连接到pET28a/CTB原核表达载体中,并转化至大肠杆菌BL21中。利用IPTG诱导目的基因的表达;用SDS-PAGE及Western-Blotting对表达蛋白进行分析和鉴定;用纯化蛋白免疫小鼠及犬,用ELISA方法对小鼠及犬的血清抗体效价和肠黏液的抗体亚类进行分析。结果 PCR和测序确定CTB-EgM123基因片段长度为804 bp,pET28a/CTB-EgM123原核表达阅读框序列正确。在37℃条件下,经IPTG 0.4 mmol/L诱导5 h,获得CTB-EgM123高表达的包涵体蛋白,分子质量为37 kDa。免疫小鼠结果表明复性CTB-EgM123蛋白具较好免疫原性,抗体效价>320 000;以IgG2a为主。检测免疫犬血清效价,结果发现用融合蛋白免疫后的犬血清抗体效价>64 000,效价高于EgM123免疫组(t=0.0064,P<0.05);且在4周时,抗体呈上升趋势,并能较长时间维持抗体水平。结论原核表达载体pET28a/CTB-EgM123在大肠杆菌中成功表达,纯化蛋白接种小鼠和犬表明具有高的抗原性。表明CTB可以增强蛋白的免疫原性,并刺激小鼠和犬体内产生高水平的体液和黏膜免疫。本研究为研发犬用包虫病疫苗奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
霍乱毒素论文参考文献
[1].胡玥,梁昊宇,周富昌,李颖茵,董思国.以霍乱毒素B亚单位为载体的甲型副伤寒多糖结合疫苗理化及生物学特性[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].齐文静,何黎,王甜,郑雪婷,郭宝平.细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合霍乱毒素B亚单位疫苗的构建表达及免疫原性研究[J].中国人兽共患病学报.2019
[3].李向阳,杨莹,张励才,颜超,孔凡运.霍乱毒素B亚单位对小鼠免疫细胞及细胞因子的影响[J].安徽医科大学学报.2019
[4].徐玉梅,曹士德,朱传刚,张世清.日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶抗原表位与霍乱毒素B亚基融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞的表达[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2019
[5].黄春峰.霍乱弧菌MARTX毒素RID效应蛋白催化Rho家族小G蛋白长链脂肪酰基化修饰的分子机制[D].浙江大学.2018
[6].吴家媛,刘建国,马欣荣,洪献忠,吴志刚.变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因转基因黄瓜植株的获得及鉴定[J].口腔医学研究.2016
[7].李图帅,陈瑾,乔绪稳,汪浩,张元鹏.利用霍乱毒素B亚单位展示猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白主要抗原表位[J].江苏农业学报.2016
[8].姚飞.霍乱毒素B亚单位与荧光金在视网膜神经节细胞逆行示踪中的比较[D].新疆医科大学.2016
[9].党东峰,Larena,M.霍乱毒素及相关无毒助剂mmCT和dmLT,通过环腺苷酸蛋白激酶A和炎性体依赖白介素-1信号促进Th-17细胞应答[J].微生物学免疫学进展.2016
[10].周小芬,林卫萍,何华红,李想,张焜.不相容双质粒共表达霍乱毒素类似嵌合蛋白[J].基因组学与应用生物学.2015
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