利用CRISPR/Cas9技术建立敲除JAK2基因K562细胞系

论文摘要

目的:利用CRISPR/Cas9技术对K562细胞系JAK2基因进行编辑,构建JAK2基因敲除的K562细胞系。方法:使用CRISPR在线设计工具,针对JAK2基因设计sgRNA,构建Cas9-sgRNA共表达质粒。使用第二代慢病毒包装系统包装慢病毒并感染K562细胞,提取细胞基因组DNA,Sanger测序和TA克隆检测基因编辑活性。无限稀释法将编辑阳性的细胞接种于96孔板并扩培得到单克隆细胞株,提取基因组DNA,Sanger测序和TA克隆分析敲除JAK2单克隆细胞的基因型。结果:成功构建靶向敲除JAK2基因的lentiCRISPRv2-sgRNA3-1质粒。优化方案得到低细胞毒性高转染效率的感染K562细胞慢病毒量。CRISPR/Cas9系统成功在JAK2基因sgRNA3-1识别位点发挥基因组编辑活性,获得纯合敲除JAK2基因细胞株K562-JAK2-/-（两个等位分别发生移码突变,预期编码没有功能的JAK2蛋白）。结论:CRIAPR/Cas9系统通过慢病毒感染方式获得JAK2基因纯合敲除的K562细胞株,该细胞模型可用于研究在慢性髓系白血病中JAK2基因的作用,为构建K562敲除其他基因细胞系提供实验依据,为探究造血分化机制的研究奠定实验基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 菅璐,黄映辉,梁天亚,王利敏,马洪涛,张婷,李丹阳,王明连

关键词: 系统,基因,细胞,慢病毒

来源: 中国生物工程杂志 2019年07期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 北京工业大学

基金: 北京市自然科学基金面上项目(7182011)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20190706

页码: 39-47

总页数: 9

文件大小: 809K

下载量: 226

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