王春艳, 崔进, 聂志[1]2006年在《念珠菌碱溶性多糖升白细胞作用的药效学研究》文中进行了进一步梳理目的研究念珠菌碱溶性多糖(CAAP)对白细胞生成作用的影响.方法将成熟的雄性ICR小鼠随机分为5组:空白对照组、阴性对照组、阳性对照组A、阳性对照组B、CAAP组.空白对照组未施加任何处理,其它4组每天腹腔注射环磷酰胺(CTX)100mg/(kg·d)体重,连续3d,造成白细胞减少模型.实验第4天起,阴性对照组小鼠以1mg/(kg·d)静脉注射0.9%NaCl注射液6d,阳性对照组A小鼠以30μg/(kg·d)静脉注射G-CSF6d,阳性对照组B小鼠以1mg(kg·d)静脉注射白色念珠菌多糖(CAP)6d,CAAP组小鼠以2mg/(kg·d)静脉注射CAAP6d.所有动物均于实验前及给予CTX结束后的第1、3、5、7天尾静脉取血计外周血白细胞数.结果CAAP在促进白细胞生成方面的作用优于CAP、G-CSF.从而可以推测出CAP中的有效成分可能是CAAP,是一种很有前途的生物反应调节剂,值得临床推广应用.
王春艳[2]2004年在《念珠菌碱溶性多糖升白细胞作用的药效学研究》文中提出本研究旨在研究念珠菌碱溶性多糖(CAAP)对白细胞生成作用的影响。成熟的雄性ICR小鼠随机分为五组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组A、阳性对照组B、CAAP组。空白对照组未施加任何处理，其它四组每目腹腔注射环磷酰胺(CTX)100mg／kg·d~(-1)体重，连续叁天，造成白细胞减少模型。实验第4天起，阴性对照组小鼠以1 mg／kg·d~(-1)静脉注射0.9％NaCl注射液6天，阳性对照组A小鼠以30μg／kg·d~(-1)静脉注射G-CSF 6天，阳性对照组B小鼠以1 mg／kg·d~(-1)静脉注射白色念珠菌多糖(CAP)6天，CAAP组小鼠以2 mg／kg·d~(-1)静脉注射CAAP 6天。所有动物均于实验前及给予CTX结束后的第1、3、5、7天尾静脉取血计外周血白细胞数。结果表明CAAP在促进白细胞生成方面的作用优于CAP、G-CSF。从而可以推测出CAP中的有效成分可能是CAAP，是一种很有前途的生物反应调节剂，值得临床推广应用。
研究生, 宁莉, 导师, 崔进[3]2008年在《白色念珠菌细胞壁β-葡聚糖升白细胞作用的药效学研究(摘要)》文中研究表明目的白色念珠菌作为医学上常见的条件致病真菌,有关其细胞壁多糖成分的生物活性研究报道甚少.本实验通过培养白色念珠菌,提取细胞壁主要多糖成分
宁莉[4]2005年在《白色念珠菌细胞壁β-葡聚糖（β-glucan）升白细胞作用的药效学研究》文中进行了进一步梳理白色念珠菌作为医学上常见的条件致病真菌,有关其细胞壁多糖成分的生物活性研究报道甚少。本实验通过培养白色念珠菌,提取细胞壁主要多糖成分—β-葡聚糖,来研究叁种性质的β-葡聚糖,即白色念珠菌碱溶性β-葡聚糖(Candida albicans basic β-glucan,CABBG)、白色念珠菌酸溶性β-葡聚糖(Candida albicans acidic β-glucan,CAABG)和白色念珠菌不溶性β-葡聚糖(Candida albicans insoluble β-glucan,CAIBG)对小鼠白细胞生成的影响。 实验中自制提取白色念珠菌β-葡聚糖,通过急性毒性学实验,摸索出叁种性质β-葡聚糖的LD_(50)值,观察毒性靶器官和摸索药效学给药剂量。雄性昆明种小鼠72只随机分为六组:空白对照组、阴性对照组、阳性对照组和实验组(CABBG、CAABG、CAIBG叁组)。空白对照组不施加任何处理,其它五组每日腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide,endoxan,cytoxan,CTX)100mg/kg·d~(-1),连续叁天,造成白细胞减少模型。实验第4天起,阴性对照组小鼠1mg/kg·d~(-1)。尾静脉注射灭菌注射用水6天,阳性对照组小鼠以30μg/kg·d~(-1)尾静脉注射rhG-CSF6天,叁个实验组分别静脉注射CABBG 2.5mg/kg·d~(-1)、CAABG 6.0mg/kg·d~(-1)和CAIBG 51.2mg/kg·d~(-1)6天。所有动物均于实验前及造模后的第1、3、5、7天静脉取血计数外周血白细胞总数和分类数;动物随机处死后计算脾脏、胸腺指数并进行组织病理学检查。 结果表明所有实验组β-葡聚糖均对CTX所致的白细胞减少有回升作用,不溶性β-葡聚糖组作用更为明显。白色念珠菌β-葡聚糖尤其是不溶性β-葡聚糖是一种很有前途的免疫调节剂,值得进一步研究。
侯震波[5]2003年在《念珠菌多糖升白细胞作用的药效学研究》文中指出本研究首在评价白色念珠菌多糖(CAP)对环磷酰胺(CTX)所致白细胞减少小鼠的升白细胞药效学作用。成熟的雄性ICR小鼠随机分为四组：正常对照组、阴性对照组、阳性对照组、CAP组。正常对照组未施加任何处理，其它叁组每日腹腔注射环磷酰胺100mg／kg，共3天，造成白细胞减少模型。阴性对照组小鼠每日以0.1ml／10g体重静脉注射注射用水，共6天。阳性对照组小鼠以30μg／kg·d~(-1)静脉注射G-CSF，共3天。CAP组小鼠以1mg／kg·d~(-1)静脉注射CAP，共6天。所有动物均于实验前及给予环磷酰胺后第1、3、5、7天取血计数外周血白细胞数。同时，动物处死后计数骨髓有核细胞数及脾脏、胸腺指数。结果表明CAP与G-CSF在促进白细胞生成方面作用相似，是一种有前途的生物反应调节剂，具有良好的应用开发前景，值得进一步探讨。
侯震波, 崔进, 杨继红[6]2004年在《念珠菌多糖升白细胞作用的药理学研究》文中研究说明目的 :评价白色念珠菌多糖 (CAP)对环磷酰胺 (CTX)所致白细胞减少小鼠的升白细胞药效学作用 .方法 :成熟的雄性ICR小鼠随机分为四组 :正常对照组、阴性对照组、阳性对照组 (G -CSF)、CAP组 .正常对照组未施加任何处理 ,其它叁组每日腹腔注射环磷酰胺 1 0 0mg/kg,共 3d ,造成白细胞减少模型 .阴性对照组小鼠每日以 0 1mL/1 0g静脉注射注射用水 ,共 6d.阳性对照组小鼠以 3 0 μg/(kg d)静脉注射G -CSF ,共 3d CAP组小鼠以 1mg/(kg·d)静脉注射CAP ,共 6d .所有动物均于实验前及给予环磷酰胺后第 1 ,3 ,5 ,7天取血计数外周血白细胞数 .同时 ,动物处死后计数脾脏指数及胸腺指数 .结果 :给予CTX后 ,各组白细胞数均明显下降 ,阴性对照组在第 6天后逐渐回升 .G -CSF组及CAP组在第 4天开始出现回升 ,第 8天CAP组恢复至原水平以上 ,G -CSF组恢复至原水平 .结论 :CAP对CTX作用小鼠外周血白细胞减少具有明显的改善作用 ,与G -CSF在促进白细胞生成方面作用相似 ,是一种有前途的生物反应调节剂 ,具有良好的应用开发前景 ,值得进一步探讨 .
叶丽娟[7]2007年在《白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖（β-glucan）诱导小鼠脾脏TNF-α mRNA的表达》文中认为【目的】白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖(CAIBG)是一类生物反应调节剂(BRM)，具有升白细胞、抗肿瘤、抗病毒等广泛的生物学活性，本研究前期实验已经成功地从白色念珠菌细胞壁中分离出CAIBG，并通过动物实验证实了CAIBG能对抗环磷酰胺(CTX)引起的免疫抑制作用，具有升高小鼠外周血中白细胞数的功能，而且能诱导外周血中IL-1β、TNF-α的升高，但其作用机理仍不十分清楚。本实验从白色念珠菌细胞壁提取不溶性β-葡聚糖(Candida albicans insolubleβ-glucan，CAIBG)，观察CAIBG对小鼠脾脏TNF-αmRNA表达的影响，探讨其促进细胞因子分泌的机制及与升高外周血白细胞的相关性。【方法】首先从白色念珠菌细胞壁提取不溶性β-葡聚糖，小鼠腹腔内注射CAIBG后，分别于3小时、6小时、9小时、12小时、24小时检测小鼠脾脏TNF-αmRNA的表达，以确认小鼠脾脏TNF-αmRNA升高的高峰及衰退的时间点。雄性昆明种小鼠80只，随机分成四组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、CAIBG组。其中空白组不加任何处理，其它叁组每天腹腔注射CTX 100mg／kg．d~(-1)，连续叁天，造成白细胞减少模型。从第四天开始，阴性对照组小鼠每天腹腔注射灭菌注射用水0.1ml／10g，阳性对照组小鼠每天腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子(瑞白)30μg／kg．d~(-1)，CAIBG组每天腹腔注射自制CAIBG51.2mg／kg．d~(-1)。每组小鼠分别于给药后第1、3、5、7天脱颈处死(每天给药后6小时)，取脾脏约70g，加入无RNA酶的裂解液，用研钵磨碎冻存于-70℃冰箱中备用，解冻后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-αmRNA。所有动物均于实验前、造模后第1天、第3天及处死前尾静脉取血计数外周血白细胞总数；动物处死后称重，计算脾脏、胸腺指数并常规进行病理学检查。【结果】CAIBG组小鼠外周血白细胞数较其它叁组均显着升高；各组小鼠给药后，脾脏指数均增加，但CAIBG组脾脏指数较阳性对照组增加时间早，且给药第3天与阳性对照组有显着性差异(P＜0.05)，从第5天开始，CAIBG组与阳性对照组差异无显着性(P＞0.05)；CAIBG组胸腺指数与空白对照组相比，胸腺指数减少，胸腺明显萎缩；与其它叁组相比，差异无显着性(P＞0.05)；CAIBG给药后6小时，小鼠脾脏TNF-αmRNA表达明显增强，在给药第1、3、5、7天，CAIBG组较空白组、阴性对照组和阳性对照组均有明显增高(P＜0.05)；组织病理学检查示CAIBG组脾脏有髓外造血现象。【结论】CAIBG可能是通过诱导小鼠脾脏TNF-αmRNA在转录水平上的表达，升高外周血中TNF-α的含量，从而刺激机体白细胞的产生，这可能是白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖升高白细胞的重要机制之一，从而提示CAIBG是一种很有前途的生物反应调节剂，值得进一步研究和开发。
李静[8]2013年在《锦囊升白冲剂对放化疗后骨髓抑制再生的分子机制研究》文中研究说明目的：全球癌症病人发病率及死亡率呈逐年上升趋势，手术、放疗和化疗仍是临床上治疗肿瘤的叁大主要手段，而晚期癌症病人及非实体瘤病人大多只能选择放、化疗治疗。骨髓抑制是放、化疗最常见的毒副反应，主要表现为白细胞减少，甚至可使全血细胞减少，严重影响了患者的治疗效果。因此，如何有效增强骨髓抑制后再生是临床上肿瘤治疗中决定成败的一个焦点问题。临床上常用的升白细胞药物有两大类。西药有以粒细胞集落刺激因子(G-CSF)为主的一类药。国家药监局已批准上市的中药类有：地榆升白片、复方皂矾丸、升白合剂等十余种。因其各有弊端使它们在临床的应用中受到局限。锦囊升白冲剂系齐锦生教授多年临床随访观察经验总结，疗效显着，总有效率可达94%。是耐受放、化疗治疗极具临床开发前景的升白细胞新药。骨髓抑制后再生的细胞基础是造血干细胞（Hematopoietic stemcell,HSC），HSC通过不断的自我更新，不仅维持自身数量的恒定，且通过分化成各系祖细胞满足外周血造血需求。近年来研究发现一些内在因素对HSC自我更新具有强大的调控能力，如经典的WNT信号途径、NOTCH信号途径、同源盒(HOX)转录因子家族等可以调控HSC的自我更新能力。目前认为，NOTCH和WNT信号通路之间存在相互联系和协调平衡，WNT信号通路的高度活化是造血祖细胞增殖的重要条件，NOTCH通路对于维持造血祖细胞的未分化状态和休眠是必须的。HOX基因是同源盒基因(homeobox gene)家族中的一员，是一类在进化上高度保守的基因，HOX基因不仅调控正常造血增殖分化过程，其异常表达与白血病密切相关。此外一些小分子介质，如前列腺素E2(PGE2)，在调节HSC自我更新上起着重要化学调节作用，PGE2和WNT信号通路相互作用，通过活化WNT信号通路促进HSC的自我更新。在锦囊升白冲剂安全有效的临床应用基础上，本研究通过检测大量受辐射后白细胞减少的小鼠饮用锦囊升白冲剂后，外周血白细胞的变化，证明其有显着升高白细胞作用后；采用PCR和Western blotting技术筛查各组小鼠骨髓单个核细胞调节造血信号通路的基因：β-Catenin、NOTCH1、JAGGED1、HOXB4、COX2的mRNA水平和蛋白含量的变化，以探求白细胞减少症模型小鼠饮用锦囊升白冲剂后外周血白细胞升高的机制。本实验还应用PGE2合成酶COX2的特异性抑制剂celecoxib(塞来昔布)，通过抑制PGE2的合成，以探求锦囊升白冲剂在促进小鼠造血功能恢复过程中，是否是通过PGE2作用于WNT信号通路而发挥主要作用。为了进一步探求锦囊升白组方的有效成份亦或存在起效的单体成份，对该组方进行了分离纯化，这对阐明该药物作用分子机制和开发有重要意义。第一部分锦囊升白冲剂对放化疗后骨髓抑制再生的分子机制研究方法：1动物分组与取材健康雄性小鼠(20±5g)140只，昆明种，随机分为五组：地榆升白组、锦囊升白组、塞来昔布+锦囊升白组(塞+锦组)、病理对照组、正常对照组。正常对照组小鼠20只，余四组每组30只。前四组共120只小鼠(1%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，直线加速器Ｘ线照射小鼠后肢双侧股骨，距离100cm，总剂量为4Gy，照射后1天检测白细胞，白细胞降至5×109.L-1以下为造模成功)，造模成功后小鼠80只，每组20只。以上五组正常饮食喂养，病理对照组和正常对照组自由饮水，前叁组(地榆升白组给予地榆升白片、锦囊升白组给予锦囊升白冲剂、塞+锦组给予锦囊升白冲剂+塞来昔布胶囊)按人与动物单位体重折算的等效剂量计算小鼠的每日用药量，以小鼠每天的生理需水量溶解，配成相应浓度的药液给小鼠饮用，连续给药8天。2小鼠外周血细胞的检测和血清中PGE2值检测小鼠在室温20-25℃下喂养，给药第4天、第8天，每组取20只小鼠以内眦取血法采集小鼠抗凝血20μl，用血细胞分析器检测外周血细胞数值，同时在给药第8天每组取20只小鼠以内眦取血法，每只小鼠采抗凝血200μl，室温自然凝固后取血清测PGE2值。3骨髓单个核细胞β-Catenin、NOTCH1、JAGGED1、HOXB4、COX2的转录水平的检测实验结束后颈椎脱臼分组处死小鼠后，用淋巴细胞分离液分离骨髓单个核细胞，收集细胞后用于提取总RNA和蛋白用于PCR和Westernblotting等分子生物学检测。Trizol法提取骨髓单个核细胞中总RNA，用β-actin做内参，PCR法检测β-Catenin、NOTCH1、JAGGED1、HOXB4、COX2的mRNA表达。4骨髓单个核细胞β-Catenin、JAGGED1、HOXB4、COX2的蛋白含量用Lowry法测定蛋白含量，Western blotting检测骨髓中β-Catenin、JAGGED1、HOXB4、COX2的蛋白含量。随后对锦囊升白组方进行进一步分离纯化，再用各分离纯化得到的组分给造模成功后的小鼠饮用，观察各组分的有效性，从而寻求该中药组方的有效作用部位。并用分离纯化后得到的有效组份进行二极管阵列检测器和蒸发光检测器检测，通过定性分析以求明确其有效成份。结果：1小鼠的一般表现，锦囊升白冲剂对小鼠外周血白细胞和状态的影响给药第4天，地榆升白组(6.8±2.84)、锦囊升白组(5.47±1.79)较病理对照组(4.82±2.11)外周血白细胞数显着升高(P<0.05)。锦囊升白组较地榆升白组小鼠活动性强，被毛顺滑更有光泽。塞+锦组(3.85±0.79)与病理对照组(4.82±2.11)相比白细胞计数无统计学差异。塞+锦组(3.85±0.79)和病理对照组一般状态最差，动物开始活动减少，精神萎靡，闭目，尾、耳颜色苍白，被毛粗乱、蓬松且无光泽，体重随饮食量减少而下降。给药第8天地榆升白组(8.0±3.01)、锦囊升白组(7.99±2.75)较病理对照组(4.74±2.36)外周血白细胞数有显着差异(P<0.05)。塞+锦组(3.77±1.74)与病理对照组(4.74±2.36)相比白细胞计数无统计学差异。2小鼠血清PGE2浓度检测ELISA法检测小鼠血清PGE2浓度结果：锦囊升白组、地榆升白组和病理对照组相比PGE2浓度明显增高(P<0.05)。塞+锦组与病理对照组无明显统计学差异。3骨髓单个核细胞β-Catenin、NOTCH1、JAGGED1、HOXB4、COX2转录水平的变化地榆升白组COX2的mRNA表达(0.1194±0.00795)和锦囊升白组COX2的mRNA表达(0.0953±0.01274)相对病理对照组(0.0377±0.00564)均明显增高。锦囊升白组的JAGGED1mRNA表达(0.2628±0.01855)相对病理对照组(0.0429±0.00704)明显增高。锦囊升白组β-Catenin的mRNA表达(0.3935±0.12128)相对病理对照组(0.423±0.0186)，无明显统计学差异。锦囊升白组HOXB4的mRNA表达(0.0795±0.01407)相对正常对照组(0.0757±0.0135)，无明显统计学差异。4骨髓单个核细胞β-Catenin、JAGGED1、HOXB4、COX2蛋白含量的变化地榆升白组COX2的蛋白表达(0.7963±0.099)和锦囊升白组COX2的蛋白表达(0.7074±0.0842)相对病理对照组(0.2697±0.0324)有显着差异(P<0.01)。锦囊升白组(0.4901±0.0308)、塞+锦组(0.2433±0.0129)的JAGGED1的蛋白表达相对病理对照组(0.1017±0.0078)有显着差异(P<0.01)。地榆升白组的β-Catenin蛋白表达(0.8366±0.1143)和锦囊升白组β-Catenin的蛋白表达(0.4268±0.0352)相对病理对照组(0.0979±0.0151)，有显着差异(P<0.01)。锦囊升白组的HOXB4蛋白表达(0.203±0.013)相对正常对照组(0.2249±0.0193)无明显统计学差异。第二部分锦囊升白组方有效成份的分离方法：1锦囊升白组方有效成份的分离、纯化中药水煎后水相部分加有机溶剂萃取，药渣部分用适量95%乙醇浸泡24小时后药液倒出留用，药渣部分再用同等量95%乙醇浸泡10小时，两次的药液为乙醇相，乙醇相60-65℃悬蒸浓缩2小时，再用水浴锅干燥后放入烤箱80℃进一步干燥为粉末。有机溶剂萃取：第一步：加常压下沸程为60-90℃石油醚萃取两次，石油醚相40-45℃悬蒸浓缩2小时，再用水浴锅干燥后放入烤箱80℃进一步干燥为粉末。第二步：石油醚萃取后水相部分加沸点为61℃的氯仿萃取两次，氯仿相40-45℃悬蒸浓缩2小时，再用水浴锅干燥后放入烤箱80℃进一步干燥为粉末。第叁步：氯仿萃取后水相部分加乙酸乙酯萃取两次，乙酸乙酯相40-45℃悬蒸浓缩2小时，再用水浴锅干燥后放入烤箱80℃进一步干燥为粉末。第四步：乙酸乙酯萃取后水相部分用正丁醇萃取两次，正丁醇相70-78℃悬蒸浓缩2小时，再用水浴锅干燥后放入烤箱80℃进一步干燥为粉末。正丁醇萃取后水相部分用水浴锅干燥后放入烤箱80℃进一步干燥为粉末。2实验动物和分组健康雄性小鼠(20±5g)230只，昆明种，随机分为八组：石油醚组、氯仿组、乙酸乙酯组、正丁醇组、水相组、乙醇组、病理对照组、正常对照组。正常对照组每组20只，余七组每组30只。前七组共210只小鼠（1%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，直线加速器放射源照射小鼠后肢双侧股骨，距离100cm，总剂量为4Gy，照射后1天检测白细胞，白细胞降至5×109.L-1以下为造模成功）。造模成功后前七组每组选取小鼠20只，以上八组正常饮食喂养，病理对照组和正常对照组自由饮水，前六组(石油醚组、氯仿组、乙酸乙酯组、正丁醇组、水相组、乙醇组)按人与动物单位体重折算的等效剂量计算小鼠的用药量，以小鼠每天的生理需水量溶解，配成相应浓度的药液给小鼠饮用，连续给药8天。3小鼠外周血细胞的检测给药第8天每组取20只小鼠采内眦静脉抗凝血20μl，用血细胞自动计数仪检测外周血细胞变化。4液相色谱检测器检测已分离物质取氯仿相、乙酸乙酯相、水相组叁相物质用二极管阵列检测器检测是否存在紫外吸收的化合物，用蒸发光检测器检测没有紫外吸收的有机物质。结果：1小鼠的一般表现，锦囊升白组方各分离成份对小鼠外周血白细胞和状态的影响给药第8天，氯仿组(11.97±4.65)、乙酸乙酯组(12.44±5.13)、水相组(17.39±6.38)较病理对照组(4.27±2.12)外周血白细胞数上升差值显着升高(P<0.05)。氯仿组、乙酸乙酯组、水相组较病理对照组小鼠活动性强，被毛顺滑更有光泽。石油醚组(6.61±1.96)、正丁醇组(5.29±1.79)、乙醇初提组(7.2±2.78)与病理对照组(4.27±2.12)相比白细胞计数无统计学差异，这几组动物开始活动减少，精神萎靡，闭目，尾、耳颜色苍白，被毛粗乱、蓬松且无光泽，体重随饮食量减少而下降。2药物分离纯化后成分的定性分析二极管阵列检测器(选200—400波长)检测表明：氯仿、乙酸乙酯、水相叁个组无明显区别，波型类似，不存在紫外吸收物质。蒸发光检测器515X2(alteeh)检测不挥发分子，确定不存在紫外吸收物质(多糖无紫外吸收）；醇沉为5000以上大分子，沉的不多，其大部分物质为5000以下的小分子量多糖。结论：1锦囊升白冲剂使骨髓抑制后的小鼠外周血白细胞数显着升高。2锦囊升白冲剂升白细胞的机制是：活化COX2，产生高浓度PGE2，作用于WNT信号通路的β-Catenin，促进HSC增殖。3锦囊升白冲剂使骨髓单个核细胞JAGGED1表达增加，提示其能活化NOTCH信号通路促进造血恢复。4锦囊升白组方药物分离定性分析表明，其有效药物成份为5000以下的小分子量多糖。
郝婷[9]2008年在《白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖（β-glucan）诱导外周血单核细胞TNF-α的表达》文中进行了进一步梳理【目的】白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖(CAIBG)是一类生物反应调节剂(BRM),具有升白细胞、抗肿瘤、抗病毒等广泛的生物学活性,本研究前期实验已经成功地从白色念珠菌细胞壁中分离出CAIBG,并通过动物实验证实了CAIBG能对抗环磷酰胺(CTX)引起的免疫抑制作用,具有升高小鼠外周血中白细胞数的功能,而且能诱导外周血中TNF-α的升高。本实验从白色念珠菌细胞壁提取不溶性β-葡聚糖(Candida albicans insolubleβ-glucan,CAIBG),观察CAIBG对人外周血单核细胞(PBMC)的细胞活性以及TNF-α表达的影响,探讨其促进细胞因子分泌的情况及与抗肿瘤的相关性。【方法】首先从白色念珠菌细胞壁提取不溶性β-葡聚糖。常规培养PBMC,在培养液中加入不同浓度的CAIBG用改良MTT法检测12h、24h、36h时CAIBG对PBMC活性的影响,同时在加入不同浓度CAIBG后,分别作用不同时间用ELISA法检测TNF-α的含量,以确认PBMC中TNF-α与药物的量效关系和时效关系。培养宣威肺腺癌细胞,PBMC为效应细胞,人肺腺癌细胞系为靶细胞,设5∶1、10∶1和20∶1叁个效靶比,随机分成四组:空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、CAIBG组,观察各组PBMC对肺腺癌细胞的细胞毒作用,以及TNF-α的分泌情况。【结果】CAIBG浓度62.5ug/ml和125ug/ml作用与细胞12h、24h和36h时,PBMC活性明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。CAIBG对PBMC能有效的促进TNF-α的分泌,并且有明显的时间依赖性,给药后随着时间的延长TNF-α的含量有所升高,在给药后第18h时TNF-α含量升高最明显,差异有统计学意义(P＜0.05)。CAIBG对PBMC分泌TNF-α有明显的剂量依赖性,给与不同的药物浓度后18h时TNF-α的含量均有所升高,但给药浓度为62.5ug/ml组TNF-α的含量升高最明显,差异有统计学意义(P＜0.05)。当效应细胞:靶细胞的比例为5∶1、10∶1和20∶1时,给与药物CAIBG浓度为62.5ug/ml的组PBMC毒作用高于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);而CAIBG组与顺铂组比较差异没有统计学意义(P＞0.05)。叁种不同的效靶比时,给与药物CAIBG浓度为62.5ug/ml的组分泌TNF-α的含量与空白对照组、阴性对照组比较,差异均有非常显着性(P＜0.01);与顺铂组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。【结论】CAIBG可能是通过诱导PBMC产生TNF-α,从而杀伤肿瘤细胞,这可能是CAIBG抗肿瘤的重要机制之一,从而提示CAIBG是一种很有前途的生物反应调节剂,值得进一步研究和开发。
戚燕[10]2009年在《白色念珠菌不溶性β-葡聚糖抗小鼠S180肿瘤的实验性研究》文中认为【目的】白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖(Candida albicans insolubleβ-glucan,CAIBG)是一类生物反应调节剂(biological response modifiers,BRM),具有抗肿瘤、升白细胞、抗病毒等广泛的生物学活性。本课题组前期实验已经成功地从白色念珠菌细胞壁中分离出不溶性β-葡聚糖,并通过动物实验证实了CAIBG能对抗环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)所致的外周血白细胞减少,具有快速升高小鼠外周血白细胞数的功能,而且能诱导小鼠外周血中TNF-α、IL-β的升高以及小鼠脾脏中TNF-αmRNA的表达水平升高,并在基因、分子水平研究了CAIBG的升白细胞作用机理。前期体外抗肿瘤实验证实,CAIBG对B16恶性黑色素瘤细胞、SGC-7901胃腺癌细胞和XW-05肺腺癌细胞具有不同程度的体外生长抑制作用,CAIBG也可以激活人外周血单核细胞分泌TNF-α。本实验使用S180荷瘤小鼠,研究CAIBG体内抗肿瘤的作用,以及CAIBG对S180荷瘤小鼠生存期的影响。【方法】首先提取白色念珠菌不溶性β-葡聚糖。抑瘤率实验取ICR荷瘤小鼠120只,雌雄各半,分两批,均分为6组,每组10只,建立S180荷瘤小鼠模型后,分为阴性对照组、溶媒对照组、实验组、阳性对照组、同等对照组和联合用药组。腹腔注射,阴性对照组NS10ml/kg,溶媒对照组1%吐温80 10ml/kg,实验组CAIBG100mg/10ml/kg,阳性对照组CTX30mg/10ml/kg,同等对照组薄芝糖肽20mg/10ml/kg,联合用药组第一批实验AIBG100mg/10ml/kg+CTX30mg/10ml/kg,隔天给药;第二批实验CAIBG100mg/10ml/kg+CTX20mg/10ml/kg,上午给CTX,下午给CAIBG,连续10天,第12天解剖小鼠,剥离肿瘤,取胸腺脾脏,称重,计算脾脏胸腺指数并常规进行病理学检查。生存期实验取ICR小鼠85只,雄性,分两批,第一批实验分为5组,每组5只,建立S180荷瘤小鼠模型后,分为阴性对照组、溶媒对照组、实验组、阳性对照组和联合用药组,腹腔注射,阴性对照组NS10ml/kg,溶媒对照组1%吐温80 10ml/kg,实验组CAIBG100mg/10ml/kg,阳性对照组CTX30mg/10ml/kg,联合用药组CAIBG100mg/10ml/kg与CTX30mg/10ml/kg,连续10天,其中联合用药组是隔天给CAIBG和CTX,10天后观察小鼠生存期;第二批实验分为6组,每组10只,建立S180荷瘤小鼠模型,分为阴性对照组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、阳性对照组、联合用药组,腹腔注射,阴性对照组NS10ml/kg,实验低剂量组CAIBG50mg/10ml/kg,实验中剂量组CAIBG100mg/10ml/kg,实验高剂量组CAIBG150mg/10ml/kg,阳性对照组CTX30mg/10ml/kg、联合用药组CAIBG100mg/10ml/kg+CTX20mg/10ml/kg,连续给药16天,其中联合用药是每天上午给CTX,下午给CAIBG,16天后观察小鼠生存期,共观察40天。【结果】CAIBG组、阳性对照组、同等对照组、联合用药组的肿瘤均减小,与阴性对照组和溶媒对照组相比,有统计学差异(P＜0.05),CAIBG组、联合用药组、同等对照组、阴性对照组、溶媒对照组的胸腺、脾脏指数均比CTX组的胸腺、脾脏指数高,有显着性统计学差异(P＜0.01)。生存期实验结果表明,给药10天后,CAIBG组、阳性对照组和联合用药组的生存时间均延长,与NS组和1%吐温80组相比较,有统计学差异(P＜0.05),其中,CAIBG组和联合用药组的存活天数比阳性对照组长,差异有统计学意义(P＜0.05)。给药16天后,CAIBG高中低剂量组,阳性对照组和联合用药组的生存时间均延长,与阴性对照组相比较,有统计学差异(P＜0.01),其中,CAIBG高中低剂量组和联合用药组的存活天数比阳性对照组长,差异有显着性意义(P＜0.01)。【结论】CAIBG具有良好的抗小鼠S180肿瘤的作用,能够有效延长其生存时间,与CTX联合使用,不仅有协同抗肿瘤作用,而且能够对抗CTX引起的小鼠免疫抑制作用,从而提示CAIBG是一种很有前途的生物反应调节剂,值得进一步研究和开发。
参考文献：
[1]. 念珠菌碱溶性多糖升白细胞作用的药效学研究[J]. 王春艳, 崔进, 聂志. 昆明医学院学报. 2006
[2]. 念珠菌碱溶性多糖升白细胞作用的药效学研究[D]. 王春艳. 昆明医学院. 2004
[3]. 白色念珠菌细胞壁β-葡聚糖升白细胞作用的药效学研究(摘要)[J]. 研究生, 宁莉, 导师, 崔进. 昆明医学院学报. 2008
[4]. 白色念珠菌细胞壁β-葡聚糖（β-glucan）升白细胞作用的药效学研究[D]. 宁莉. 昆明医学院. 2005
[5]. 念珠菌多糖升白细胞作用的药效学研究[D]. 侯震波. 昆明医学院. 2003
[6]. 念珠菌多糖升白细胞作用的药理学研究[J]. 侯震波, 崔进, 杨继红. 昆明医学院学报. 2004
[7]. 白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖（β-glucan）诱导小鼠脾脏TNF-α mRNA的表达[D]. 叶丽娟. 昆明医学院. 2007
[8]. 锦囊升白冲剂对放化疗后骨髓抑制再生的分子机制研究[D]. 李静. 河北医科大学. 2013
[9]. 白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖（β-glucan）诱导外周血单核细胞TNF-α的表达[D]. 郝婷. 昆明医学院. 2008
[10]. 白色念珠菌不溶性β-葡聚糖抗小鼠S180肿瘤的实验性研究[D]. 戚燕. 昆明医学院. 2009