春雷霉素高产菌株选育及其工业生产应用

论文摘要

为了获得适用于工业化生产的春雷霉素高产菌株,从陕西渭南某生物农药厂发酵生产车间不同发酵罐批中分离筛选到5株春雷霉素生产性能优良的小金色链霉菌,以这些菌株为出发菌株,利用递归原生质体融合法,获得了3株遗传稳定的高产春雷霉素重组菌株,其中1株重组菌株K2018S F5-06的春雷霉素产量达到了19.6 g/L.经30吨罐生产验证,平均发酵效价比原始出发菌株K2010 S 17-182春雷霉素产量提高了37.1%.采用自然分离筛选结合递归原生质体融合育种技术能有效提高目标代谢产物的产量,产生巨大经济效益.

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0 引言

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

1.1.2 培养基

（1）斜面培养基及分离培养基:

（2）摇瓶种子培养基:

（3）摇瓶发酵培养基:

（4）种子罐培养基:

（5）发酵罐培养基:

1.1.3 溶液

（1） TPM液:

（2） Tris缓冲液:

（3） EDTA溶液:

（4） MMM缓冲液:

1.1.4 主要试剂

1.1.5 摇瓶, 种子罐和发酵罐等的培养条件

（1）摇瓶培养条件:

（2）种子罐培养条件:

（3）发酵罐培养条件:

1.1.6 仪器

1.2 方法

1.2.1 出发菌株的分离与纯化

1.2.2 原生质体的制备和再生

1.2.3 原生质体的融合方法

1.2.4 基因组shuffling

1.2.5 高产重组菌株的初筛

1.2.6 高效液相色谱的复筛

1.2.7 重组菌株的遗传稳定性测定

1.2.8 春雷霉素的效价测定方法

（1）标准溶液配制

（2）试样溶液的配制

（3）测定

（4）计算

2 结果与讨论

2.1 获得出发菌株

2.2 原生质体的制备与再生

2.3 优化原生质体融合的条件

2.4 基因组shuffling选育高产春雷霉素的菌株

2.5 重组菌株的遗传稳定性测定

2.6 生产罐上发酵结果

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田露,王亮,闵建红,祁晨娟,张志敏,龚国利

关键词: 春雷霉素,递归原生质体融合,小金色链霉菌,工业发酵

来源: 陕西科技大学学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技

专业: 有机化工,植物保护

单位: 陕西科技大学食品与生物工程学院,陕西麦可罗生物科技有限公司,陕西省微生物研究所

基金: 陕西省科技厅重点研发计划项目(2018NY-104,2016NY-116),陕西省教育厅服务地方专项科研计划项目(18JC004),陕西省科学院科研计划项目(2016K-16)

分类号: TQ455

DOI: 10.19481/j.cnki.issn2096-398x.2019.04.010

页码: 52-57

总页数: 6

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