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重组人睫状神经营养因子突变体及其聚乙二醇修饰物的制备及其对ob/ob肥胖小鼠体重、糖脂代谢的影响

2020-12-02阅读(875)

重组人睫状神经营养因子突变体及其聚乙二醇修饰物的制备及其对ob/ob肥胖小鼠体重、糖脂代谢的影响

论文摘要

目的制备重组人睫状神经营养因子（recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF）突变体[rhCNTF(R6315)]及其聚乙二醇修饰物[P-rhCNTF(R6315)]探讨两者对ob/ob肥胖小鼠体重及糖脂代谢的影响。方法采用rhCNTF(R6315)突变体工程菌株E.coli BL21（DE3）表达rhCNTF(R6315)经硫酸铵沉淀、Butyl HP和Q HP纯化后采用PEG修饰剂Y-40KD-MAL-mPEG对其C17游离巯基进行定点修饰,经QH P层析纯化获得P-rhCNTF(R6315)。上述产物进行SDS-PAGE、纯度、修饰率、二级结构表征、修饰位点、体外活性、体内药代动力学检测。将ob/ob小鼠分为P-rhCNTF(R6315)组（0.05、0.1、0.2 mg/kg）、rhCNTF(R6315)组及赋形剂组均采用高脂饲料喂养同时设C57BL/6J组（普通饲料喂养C57BL/6J小鼠）,检测各组小鼠的体重、摄食量及糖脂代谢情况。结果rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315)纯度分别为97.4%和99.3%,平均比活分别为9.5×105和6.9×105IU/mg,相对比活分别为100%和72.6%;rhCNTF(R6315)修饰率达90%以上大多数为单修饰产物PEG修饰未影响rhCNTF(R6315)的二级结构,修饰位点发生在DLCSR肽段的C17上;P-rhCNTF(R6315)经皮下及静脉途径给药的血药浓度均在注射后约72 h降至给药前水平。与赋形剂组比较,P-rhCNTF(R6315) 0.05、0.1、0.2 mg/kg剂量组小鼠在疗程结束时体重组分别减轻了10%、11%和21%（P <0.05） rhCNTF(R6315)组减轻了30%（P <0.01）;治疗后15 d,rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315)各剂量组小鼠摄食量明显降低（P<0.05）,随后逐渐恢复正常水平;P-rhCNTF(R6315)各剂量组从给药后8 d起,小鼠随机血糖有所降低,呈一定的量效关系,rhCNTF(R6315)组从给药后4 d开始有所下降;P-rhCNTF(R6315) 0.2 mg/kg剂量组和rhCNTF(R6315)组的口服糖耐量（oral glucose resistant test,OGTT）曲线下面积(AUC0～2h)及腹腔内脂肪重量显著降低（P<0.05）,rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315)各剂量组小鼠皮下脂肪均显著降低（P<0.01）。结论制备了较高纯度的rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315),两者对ob/ob肥胖小鼠的体重过高、高血糖症体脂重量过高均具有良好的疗效且P-rhCNTF(R6315)更长效。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株及细胞
  •   1.2 主要试剂及仪器
  •   1.3 实验动物
  •   1.4 rhCNTF（R6315）的制备
  •   1.5 P-rhCNTF（R6315）的制备
  •   1.6 rhCNTF（R6315）及P-rhCNTF（R6315）的鉴定
  •     1.6.1 SDS-PAGE分析
  •     1.6.2 纯度
  •     1.6.3 修饰率的测定
  •     1.6.4 二级结构表征的检测
  •     1.6.5 修饰位点的测定
  •   1.7 体外活性的检测
  •   1.8 体内药代动力学检测
  •   1.9 动物分组及给药
  •   1.1 0 体内活性的检测
  •   1.1 1 rhCNTF（R6315）及P-rhCNTF（R6315）对糖代谢影响的检测
  •   1.1 2 rhCNTF（R6315）及P-rhCNTF（R6315）对脂代谢影响的检测
  •   1.1 3 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 rhCNTF（R6315）及P-rhCNTF（R6315）的鉴定
  •     2.1.1 SDS-PAGE分析及纯度
  •     2.1.2 修饰率
  •     2.1.3 二级结构表征
  •     2.1.4 修饰位点
  •   2.2 体外活性检测
  •   2.3 体内药代动力学检测
  •   2.4 体内活性评价
  •     2.4.1 小鼠体重
  •     2.4.2 摄食量
  •     2.4.3 腹围及其脏器重量
  •   2.5 rhCNTF（R6315）及P-rhCNTF（R6315）对糖代谢的影响
  •     2.5.1 随机血糖
  •     2.5.2 OGTT试验
  •   2.6 对小鼠脂肪代谢的影响
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 郑秀玉,柳森,李素贞,张夕燕,晁华,王健

    关键词: 重组人睫状神经营养因子,突变体工程菌,定点聚乙二醇修饰,肥胖,脂肪代谢,糖代谢

    来源: 中国生物制品学杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 有机化工,药学

    单位: 国药中生生物技术研究院有限公司第四研究室

    基金: 北京市科委生物医药与生命科学创新培育研究-创新品种临床前研究专项（z151100003915068）,国药集团新产品开发基金（2011SW02)

    分类号: R945;R965

    DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002914

    页码: 1361-1369

    总页数: 9

    文件大小: 445K

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