支原体污染通过耗竭L-精氨酸降低HEK-293细胞中质粒DNA转染效率（英文）

论文摘要

目的:明确支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并从支原体对细胞精氨酸代谢的角度探究其机制。创新点:支原体是细胞培养中的常见污染源。HEK-293是目前常用的生产蛋白、包装病毒的常用细胞系。然而,目前支原体污染对于质粒DNA转染效率的影响未见报道。本研究首次报道支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并揭示其机理。方法:采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）和聚合酶链反应（PCR）方法鉴定HEK-293细胞中的支原体污染情况以及支原体抗生素Plasmocin对支原体污染的清除效果。通过聚乙烯亚胺（PEI）方法对支原体污染的HEK-293细胞及支原体清除后的HEK-293细胞转染质粒,比较转染效率差异。通过高效液相色谱法（HPLC）分析支原体污染的和支原体清除后的HEK-293细胞的细胞裂解产物和细胞上清中的L-精氨酸、瓜氨酸含量变化。在支原体污染的HEK-293细胞中补充L-精氨酸,观察质粒转染效率的改变情况。结论:支原体污染能大大降低HEK-293细胞中质粒DNA的转染效率,且其原因与支原体能耗竭细胞中的L-精氨酸有关。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: Zi-fei YIN,Ya-ni ZHANG,Shu-fang LIANG,Sha-sha ZHAO,Juan DU,Bin-bin CHENG

关键词: 支原体,质粒,转染效率,精氨酸,细胞

来源: Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology） 2019年12期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: Department of Traditional Chinese Medicine, Changhai Hospital, Second Military Medical University,Graduate School of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

基金: Project supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81803929),the Changhai Hospital Fund for Young Scholars(No.CH201810),China

分类号: Q813.1

页码: 1021-1027

总页数: 7

文件大小: 1530K

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