导读:本文包含了人端粒酶催化亚基论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:端粒,链式反应,逆转录,基因治疗,内皮,细胞,猪血。
人端粒酶催化亚基论文文献综述
张思春[1]（2012）在《人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原介导的猪血管内皮细胞永生化研究》一文中研究指出血管内皮细胞（EC）指血管内表面形成的单层扁平细胞，它们在多种生理过程中发挥着重要的作用。猪的血管内皮细胞是猪瘟病毒（CSFV）的主要靶细胞，其感染CFSV后可引起严重的广泛性出血，是导致病猪死亡的主要原因之一。因此EC是研究CSFV感染及致病机制的良好细胞模型。原代EC作为一种终末分化的细胞，在体外的培养时间有限，传代10次左右就会进入衰老期而不能再继续增殖。反复分离原代EC不仅费时费力，而且各批次细胞间存在差异，不能保持各种细胞生理指标的稳定性。为了在CSFV感染与致病机制的研究过程中拥有稳定的、充足的细胞材料，我们拟建立能在体外无限培养的永生化猪EC细胞系。本研究首先采集新生小猪脐带，分离出静脉血管，灌注0.1%的I型胶原酶溶液，在37℃水浴消化10min后收集并培养血管内皮细胞。从共计200多条脐静脉中分离获得了大量的猪脐静脉血管内皮细胞（SUVEC）。这些细胞呈单层铺路石样排列生长，2～3d能长满单层，von Willbrand factor阳性，并能大量摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-Ac-LDL），证明这些细胞为血管内皮细胞。前2～6代的SUVEC生长速度较快，可用于CSFV感染研究，之后细胞生长速度逐渐减慢，总共可培养10代左右。为了提高基因重组效率，本研究使用重组逆转录病毒介导的基因转导来将人端粒酶催化亚基（hTERT）基因或SV40大T抗原（SV40LT）基因分别转移进入SUVEC中。重组逆转录病毒载体pBABE-neo-hTERT和pBABE-puro-SV40LT分别与pVSV-G质粒共转染到GP2-293细胞中，收集假病毒液并感染SUVEC，利用G418或嘌呤霉素筛选出阳性克隆，并进行传代研究和细胞形态学及表型鉴定。获得的两个稳定的猪血管内皮细胞系分别命名为SUVEC-hT（携带hTERT基因）和SUVEC-ST（携带SV40LT基因）。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长，具有高度的增殖活性，生长速度比原代血管内皮细胞快，能稳定地传代培养而不表现衰老细胞的特征，迄今已培养至第120代和第115代，细胞生长仍然稳定，形态正常。利用RT-PCR及Western Blotting检测到SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT，SUVEC-ST细胞系持续表达SV40T抗原。SUVEC-hT细胞还表达特异的内皮细胞标志CD31、CD34和von Willebrand factor，并能摄取Dil-Ac-LDL。SUVEC-ST细胞系持续表达CD31和CD34分子，并能摄取Dil-Ac-LDL。核型分析表明，两种细胞系均保持与SUVEC相同的染色体数目和形态，含有38条染色体及正常的核型。细胞保持贴壁依赖性、接触抑制性，并且不能在软琼脂中生长。细胞增殖能力研究表明，这两个细胞系保持血清依赖性，它们不能在无血清培养基中生长；细胞增殖速度随着血清浓度的增加而加快，在血清浓度为10%时达到最大值，更高的血清浓度及内皮细胞生长支持物对细胞的生长没有进一步的促进作用。CSFV感染结果表明，两个细胞系保持了对CSFV的敏感性。以上研究表明，本研究在成功分离培养SUVEC的基础上，通过转录病毒转导的方法利用hTERT或SV40LT基因成功地建立了永生化的猪血管内皮细胞系SUVEC-hT及SUVEC-ST。它们保留了EC的主要生物学特征，并且是正常的而非转化的细胞。这些细胞将有助于出血性疾病病毒如CSFV的致病机理研究。(本文来源于《吉林大学》期刊2012-06-01）
张思春,余乐,李素,涂长春[2]（2012）在《人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞》一文中研究指出为建立稳定的猪血管内皮细胞系,用于猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型,本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),通过G418或嘌呤霉素筛选阳性克隆,并进行细胞传代研究和细胞形态学及表型鉴定。分别获得了两种方法建立的永生化猪血管内皮细胞系SUVEC-hT和SUVEC-ST。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长,具有高度的增殖活性,在传代70代后不表现任何衰老细胞的特征,并保持接触生长抑制。SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT、CD31、CD34和von Willebrand factor,并能摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)。SUVEC-ST细胞系持续表达SV40 LT、CD31和CD34,并能摄取Dil-Ac-LDL。两个细胞系均保持正常的核型并对CSFV敏感。结果表明通过表达外源的hTERT或SV40 LT,SUVEC已被永生化,并且保留了血管内皮细胞的主要生物学特征。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2012年02期）
彭智,贾振华,唐红伟,黄海华,郭晓瑞[3]（2012）在《人端粒酶催化亚基反义RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定》一文中研究指出背景:人端粒酶催化亚基与c-myc在喉鳞状细胞癌中有密切的相关性。目的:构建含有c-myc启动子的人端粒酶催化亚基的重组腺病毒载体,观察人端粒酶催化亚基在细胞中表达后对细胞增长的影响。方法:按照人工合成中反向转录的方法设计基因合成引物,用复式PCR获得目的片段ashTERT(322bp)。将片段ashTERT克隆到pUC57(2.7kb)克隆载体,然后热激转化到E.coli感受态细胞中,菌检、PCR、鉴定阳性克隆后,菌液放大培养,提取质粒pUC57-ashTERT,然后对质粒进行测序。将目的基因片段亚克隆到穿梭载体pshuttle-CMVneo上,然后构建重组腺病毒质粒pAd-ashTERT。转入293细胞中进行病毒包装、鉴定和滴度测定。结果与结论:提取质粒pUC57-ashTERT,测序符合序列要求。质粒pUC57-ashTERT转入293细胞后,成功构建了有较强感染能力的含人端粒酶催化亚基基因的重组腺病毒载体。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年02期）
江国昌,钱晓彬,成静[4]（2011）在《联合干扰人端粒酶催化亚基对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响》一文中研究指出目的探讨基因的联合干扰对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法将转染细胞分为共四组:psi-control对照组(A组)、psi-端粒酶催化亚基(hTERT)1组(B组)、psi-hTERT1和psi-hTERT2共转染组(C组)、psi-hTERT1和psi-端粒酶调节相关蛋白(TRAP)1共转染组(D组)。采用RT-PCR及Western blot分别检测hTERT mRNA和蛋白表达,端粒重复序列扩增-PCR法检测端粒酶活性,MTT法检测SGC-7901细胞增殖。结果与A组相比,B组、C组hTERT mRNA和蛋白表达、端粒酶活性降低(P<0.05),细胞增殖减慢,细胞凋亡增加;而D组各指标与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合干扰的效果可能与剂量和目的基因有关。(本文来源于《江苏医药》期刊2011年13期）
贺小英[5]（2011）在《利用重组腺病毒介导人端粒酶催化亚基（hTERT）制备牛乳腺细胞体外模型的研究》一文中研究指出乳腺上皮细胞是制作乳腺生物反应器并且评估乳腺特异性表达载体功能的靶细胞。由于乳腺细胞体外培养较为困难,到目前为止,能够用于乳腺特异表达载体功能检测的细胞系并不多见。此外,大量研究表明许多细胞系存在细胞异质性、基因变异等异常现象,因此,乳腺细胞系似乎更适合作为癌症模型的研究。而建立安全有效的乳腺细胞体外研究模型是解决乳腺生物反应器制备转基因动物的关键。因此,本研究首先优化了牛乳腺细胞体外培养条件,在此基础上,利用腺病毒介导人端粒酶催化亚基(hTERT)感染牛乳腺上皮细胞(bMGEs),获得阳性细胞株hTERT-bMGEs,并进一步对其进行细胞生物学特性及功能鉴定,获得如下主要结果:1.利用二次组织贴壁法纯化细胞效果较好(即贴壁的乳腺组织通过显微镜观察,将有直接迁出bMGEs的组织重新分离贴壁),此法获得的细胞纯化彻底,形态良好,生物学特征稳定,细胞增殖迅速。2.通过比较不同的生长因子对bMGEs体外增殖的影响,结果发现DMEM/F12基础培养液+10%胎牛血清+2 mM谷氨酰胺+10 ng/mL表皮生长因子+10μL/mL ITS +5μg/mL胰岛素+5μg/ mL氢化可的松是bMGECs体外培养最适液。3.构建了融合表达载体pEGFP-hTERT并检测体外培养bMGEs的转染效率,结果表明利用二次组织贴壁法获得的原代bMGEs能显着提高转基因的效率,最高转基因效率能够达到33%以上。4.构建了含hTERT基因的重组腺病毒载体Ad-hTERT,并包装重组病毒rAd-hTERT,初始病毒滴度为3×10~7 pfu/mL,扩增后病毒滴度为2.3×10~(10) pfu/mL,感染bMGEs的MOI为10～20。5.实验比较了质粒载体(pEGFP-hTERT, pCI-neo-hTERT)和腺病毒介导的hTERT(Ad-hTERT)转染bMGEs的转染效率、阳性克隆率,结果表明Ad-hTERT感染bMGEs的效率是76±1%,pEGFP-hTERT转染bMGEs的效率仅有33±2%;经6-8次重复试验Ad-hTERT阳性克隆率50%,pEGFP-hTERT和pCI-neo-hTERT阳性克隆率为0。结果表明:重组腺病毒Ad-hTERT和质粒载体相比,具有高的转染效率和阳性克隆率。6.利用流式细胞仪、免疫荧光、实时定量PCR、Western blot、细胞增殖实验、TRAP-PCR等方法证实重组腺病毒介导的hTERT不仅能够刺激能bMGEs的体外增殖,而且维持了bMGEs的原始特性。尽管由于腺病毒不整合宿主染色体使得hTERT在bMGEs仅能够维持表达不到15代,但hTERT-bMGEs体外存活延长40代以上。7.通过Southern blot检测发现, hTERT-bMGEs中第5代,12代,18代,27代的端粒平均长度(TRF)为17.73 kb±0.80 kb,对照组第4代bMGEs中TRF为16.43 kb,第13代bMGEs的TRF仅为13.4 kb,结果表明端粒酶通过延长端粒长度来维持处于增殖旺盛的早期hTERT-bMGEs的寿命,在后期,p21WAF1-p53信号通路发生变化,表明端粒酶可能引发一些抑癌基因和转录因子的下调,从而促进后期没有端粒酶活性的hTERT-bMGEs的增殖。8.利用人溶菌酶乳腺特异性表达载体转染hTERT-bMGEs ,结果表明hTERT-bMGEs能够提高乳腺特异性表达载体的转染效率和阳性克隆率,在激素刺激下人溶菌酶在hTERT-bMGEs能够有效分泌表达。结果表明hTERT-bMGEs能够有效地用于评估乳腺特性表达载体的功能。9.以hTERT-bMGEs作为供核细胞,观察核移植重构胚的发育情况及胚胎质量,通过第18代和28代的hTERT-bMGEs比较结果发现不同代数的核供体细胞对核移植胚胎的发育率无显着影响,但是相比较第10代bMGEs,第28代的hTERT-bMGEs具有高的囊胚发育率和较高胚胎质量,结果证明hTERT-bMGEs可以作为体细胞核移植的供核细胞。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2011-04-01）
王有为,韩之波,康健,孟磊,韩忠朝[6]（2010）在《人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品的构建》一文中研究指出目的:构建用于检测人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品。方法:通过逆转录PCR扩增得到目的片段后连接至pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞。分别经PCR和测序验证重组质粒的正确性。分光光度计测量重组质粒的吸光值,换算成拷贝数浓度后作梯度稀释制得质粒标准品。10倍梯度稀释质粒标准品后进行实时荧光定量PCR分析。结果:人端粒酶催化亚基(hTERT)基因片段成功克隆至pMD18-T载体之中,重组质粒序列完全正确。实时荧光定量PCR分析10倍梯度稀释的质粒标准品所得标准曲线良好。结论:成功构建了人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2010年08期）
贾振华,唐红伟,彭智,梁杰[7]（2009）在《人端粒酶催化亚基肿瘤相关性研究》一文中研究指出人端粒酶催化亚基(hTERT)基因转录的从头激活是端粒酶活化的主要限速步骤,受到多种癌基因或抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体,使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达,有望用于肿瘤基因治疗。(本文来源于《医学综述》期刊2009年16期）
吕红兵,王捍国,吴甘茶,闫福华[8]（2009）在《人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞向永生化细胞的转变》一文中研究指出背景:颅神经嵴干细胞可以作为颌面部各种组织和器官分化研究的重要细胞来源,如何使其获得永生化具有重要意义。人类细胞自发永生化的频率非常低,而一些永生化的基因可以显着增加这种频率。目的:观察人端粒酶催化亚基基因在大鼠颅神经嵴干细胞永生化过程中的作用。设计、时间及地点:观察性实验,于2007-09/2008-06在解放军第四军医大学完成。材料:选择清洁级孕8.5dSD大鼠3只,6周,体质量180g;先天性细胞免疫缺陷动物雄性Balb/c裸小鼠,体质量18~21g,均由解放军第四军医大学实验动物中心提供。质粒PCIneo-hTERT由解放军第四军医大学口腔医院牙体牙髓科提供。方法:原代培养大鼠颅神经嵴干细胞后,将含有人端粒酶催化亚基基因的质粒PCIneo-hTERT转入大鼠颅神经嵴干细胞,经G418筛选后扩增,并连续培养。采用免疫细胞化学法观察转染细胞内人端粒酶催化亚基基因和颅神经嵴干细胞的特异标志物P75的表达,检测细胞的端粒酶活性,绘制细胞生长曲线观察其增殖能力,并通过裸鼠移植实验了解转染细胞的特性。主要观察指标:细胞克隆、特异性蛋白P75表达、端粒酶活性、增殖能力及致瘤性实验结果。结果:①质粒PCIneo-hTERT转染细胞后24h,有少量细胞死亡。加G418后48h,细胞逐步开始大量死亡。12d后出现抗性细胞克隆,共有3个细胞克隆生长良好。分别命名为克隆1、2、3。克隆1和克隆2经过20~25代的传代后,细胞发生衰老、死亡;而克隆3在体外长期培养条件下生长状态良好,稳定表达人端粒酶催化亚基和P75。经转染后颅神经嵴干细胞的端粒酶活性明显升高,且能持续表达。②人端粒酶催化亚基基因转染后,3个细胞克隆在初期的增殖能力较强,随后克隆1、2的增殖速度逐渐变慢,出现死亡,克隆3越过衰老期,且无致瘤性。结论:人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞后,细胞得以永生化,其表型稳定,可作为颅颌面部细胞分化和组织工程研究的种子细胞。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2009年23期）
陈文辉[9]（2005）在《胃癌组织人端粒酶催化亚基hTERT mRNA的原位杂交检测》一文中研究指出目的:研究胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性。方法:采用原位杂交法检测了68例胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活性表达。结果:68例胃癌组织中端粒酶阳性表达61例(89.7%),癌旁组织为17例(33.3%),远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。结论:端粒酶是特异性较强的恶性肿瘤基因标志,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。(本文来源于《工企医刊》期刊2005年06期）
罗春丽,蔡晓钟,邹琳,唐敏,胡宏波[10]（2005）在《人端粒酶催化亚基启动子联合mad1基因体外抑制膀胱癌细胞的研究》一文中研究指出目的探讨人端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子联合mad1基因对膀胱癌细胞T24和EJ细胞的生长抑制作用及机制。方法采用细胞计数、电子显微镜、流式细胞术、RT-PCR及免疫组化等方法,观察hTERT启动子联合mad1基因表达质粒转染T24和EJ细胞后的膀胱肿瘤细胞的增殖能力、生长周期、细胞超微结构的变化以及hTERT和TGF-β1mRNA基因和蛋白表达影响。结果转染hTERT启动子联合mad1基因后对T24和EJ细胞生长有明显抑制作用、出现凋亡小体和细胞周期相的改变,S期细胞明显减少,G0/G1期细胞明显增多,下调T24和EJ细胞hTERT和TGF-β1的mRNA表达,并能抑制hTERT和TGF-β1蛋白表达。结论hTERT启动子联合mad1基因能够抑制膀胱肿瘤细胞的增殖能力,可望为膀胱癌基因治疗提供新思路。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2005年13期）
人端粒酶催化亚基论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为建立稳定的猪血管内皮细胞系,用于猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型,本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),通过G418或嘌呤霉素筛选阳性克隆,并进行细胞传代研究和细胞形态学及表型鉴定。分别获得了两种方法建立的永生化猪血管内皮细胞系SUVEC-hT和SUVEC-ST。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长,具有高度的增殖活性,在传代70代后不表现任何衰老细胞的特征,并保持接触生长抑制。SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT、CD31、CD34和von Willebrand factor,并能摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)。SUVEC-ST细胞系持续表达SV40 LT、CD31和CD34,并能摄取Dil-Ac-LDL。两个细胞系均保持正常的核型并对CSFV敏感。结果表明通过表达外源的hTERT或SV40 LT,SUVEC已被永生化,并且保留了血管内皮细胞的主要生物学特征。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人端粒酶催化亚基论文参考文献
[1].张思春.人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原介导的猪血管内皮细胞永生化研究[D].吉林大学.2012
[2].张思春,余乐,李素,涂长春.人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞[J].中国预防兽医学报.2012
[3].彭智,贾振华,唐红伟,黄海华,郭晓瑞.人端粒酶催化亚基反义RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定[J].中国组织工程研究.2012
[4].江国昌,钱晓彬,成静.联合干扰人端粒酶催化亚基对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响[J].江苏医药.2011
[5].贺小英.利用重组腺病毒介导人端粒酶催化亚基（hTERT）制备牛乳腺细胞体外模型的研究[D].西北农林科技大学.2011
[6].王有为,韩之波,康健,孟磊,韩忠朝.人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品的构建[J].中国卫生检验杂志.2010
[7].贾振华,唐红伟,彭智,梁杰.人端粒酶催化亚基肿瘤相关性研究[J].医学综述.2009
[8].吕红兵,王捍国,吴甘茶,闫福华.人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞向永生化细胞的转变[J].中国组织工程研究与临床康复.2009
[9].陈文辉.胃癌组织人端粒酶催化亚基hTERTmRNA的原位杂交检测[J].工企医刊.2005
[10].罗春丽,蔡晓钟,邹琳,唐敏,胡宏波.人端粒酶催化亚基启动子联合mad1基因体外抑制膀胱癌细胞的研究[J].第叁军医大学学报.2005
论文知识图
