优选人参的提取工艺研究

优选人参的提取工艺研究

福建省立医院药学部350001

【摘要】目的研究优选人参多糖最佳提取工艺。方法以多糖提取率、糖醛酸提取率和相对分子质量作为指标,对比三种提取方法的下的提取效率,最终选出最佳的提取工艺。结果最好的人参多糖提取工艺是加入15倍的水量,在100℃水浴下提取3次,一次提取时间为3h。结论这一工艺的操作比较简便,具有一定的稳定性,能够被运用在产业化生产过程中。

【关键词】优选人参;提取工艺;相对分子量;人参多糖;糖醛酸;正交试验

人参是五加科植物人参干燥的根以及根茎,其具备良好的补元气,复脉固脱、补脾益肺等功效【1】。人参富含皂苷类、蛋白质、糖类、黄酮类、维生素、挥发性成本和多种微量元素。当前的药理研究显示,人参多糖具有提高人体免疫力、抵抗肿瘤、延缓衰老和抵抗辐射等多种显著功效,且其中的酸性多糖存在很好的增强免疫及抵抗肿瘤的效果【2】。当前植物多样的提取方法主要为有水提取法、酸提取法、酶提取等,其中最经常使用的是水提法、酸提法和碱提法【3】。本次研究中就以上方法来对人参多糖进行提取,以多糖、糖醛酸提取率、多糖相对分子质量为指标,将提取结果和提取率作出对比,通过正交试验来选取最佳提取工艺,找出最可靠的人参多糖提取方法。

1.使用仪器及材料

本次研究中所使用的仪器和材料情况见下表1:

2.提取方法及结果

2.1三种提取方法介绍

2.1.1水提法精密称得10g人参药材,平行分为3份,放置在圆底烧瓶的底部,在其中加入20倍的水后,浸泡2小时,放置在90℃的水浴内提取3小时,提取1次,滤过,滤液经500r/min,10min离心,获取上清液,在其中加入95%的乙醇,实现乙醇体积分数调剂到75%,醇沉过夜、抽滤,沉淀分别运用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤,干燥并称定质量。

2.1.2酸提法人参取药及分类方式同水提法,加入20倍量的0.3mol/L盐酸,浸泡2小时,在90℃水浴内提取3小时,1次提取后,滤过,滤液在5000r/min,10min条件下离心,得到上清液,在1.0mol/LnaOH溶液将试剂的pH值调整至6~7,离心,在上清液中加入95%乙醇并且达到75%体积分数后,醇沉过夜、抽滤、随后称定质量。

2.1.3碱提法精密称取试验材料10g,平分为3份,置于圆底烧瓶底部,加20倍量0.3mol/LNaOH溶液,浸泡2h,随后在于水浴90℃提取3h,经过提取和过滤后滤液于10min,5000r/min离心获取上清液,采用1.0mol/LHcL溶液将pH值到6~7,离心后得到上清液,加95%乙醇至体积分数为75%,醇沉过夜、抽滤后,分别使用无水乙醇、丙酮、乙醚进行洗涤,干燥后称定质量。

2.2测定多糖

2.2.1对照溶液取干燥10mg的D-无水葡萄糖当做对照,用100mL量瓶盛装定容,配置成100μg/mL储备液备用。

2.2.2制备供试品溶液精密称得10mg干燥粗多糖,放于100mL量瓶中定容,配制出100μg/mL供试品溶液备用。

2.2.3标准曲线取对照溶液,分别将其剂量分配为0.1、······0.8、1.0mL,并分别放置于具塞试管中,加入蒸馏水补足1.0mL后,在其中加入6%的1.0mL苯酚溶液,以及5.0mL的浓硫酸,摇匀后放置在沸水中水浴15min,放置于冰水浴内10min后在室温下放置15min,并且在490nm处对吸光度A值进行测定,将A值当做纵坐标,质量浓度为横坐标,实行线性回归,获得对应回归方程,基于D-无水葡萄糖10.023~100.25μg/mL区间具有良好的线性关系

2.2.4精密度取0.8mL对照品溶液,用具塞试管盛装,依据2.2.3中的方法对A值进行测定,重复测定的次数共为6次,最终测得的A值RSD是0.093%。

2.2.5稳定性试验取1.0mL供试品溶液用具塞试管盛装,依据2.2.3中的方法来对A值进行测定,且测定一次的间隔时间是半小时,最终测定出的A值RSD是0.807%,这一结果显示了供试品溶液在3h内是比较稳定的。

2.3糖醛酸测定法

2.3.1对照溶液取10mg干燥恒定质量D-半乳糖醛酸作对照,称取后放置在100mL的量瓶中定容,配置为100μg/mL的储备液,作为备用液。

2.3.2制备供试品溶液取10mg干燥粗多糖,置于100mL量瓶定容,随后配置100μg/mL储备液备用。

2.3.3标准曲线分别量取0.1······0.8、1.0mL对照溶液置于具塞试管中,加入蒸馏水至1.0mL,在冰水浴内加入四硼酸钠-浓硫酸溶液6.0mL,摇匀后放置半小时,在525nm位置测定A值,将A值作为纵坐标,质量浓度作为横坐标进行线性回归,得出回归方程,D-半乳糖醛酸于9.846~98.43μg/mL区间线性关系表现为良好。

2.3.4试验精密度取0.5mL剂量的对照溶液,用具塞试管盛装,并加水至1.0mL,依据2.3.3项内的方法对A值进行测定,重复测定6次,最终得到结果A值RSD是0.121%。

2.3.5稳定性试验精密称取1.0mL的供试品溶液后,放置于具塞试管内,结合2.3.3方法测定A值,结果A值RSD为0.885%,体现出供试品溶液于2h内是保持稳定的。

2.4相对分子质量

2.4.1色谱条件若色谱柱是Polysep-GFC–P4000;流动相为0.71%Na2SO4和0.02%NaN3溶液,体积流量是0.5mL/min;柱温35℃,检测仪器是RID-10A,温度是35℃;进样量是20μL。

2.4.2线性关系分析将不同相对分子质量右旋糖酐做对照,采用流动相实现对10mg/mL溶液的配置,进样20μL,对相应保留时间并实行记录,横坐标是保留时间t,纵坐标是相对分子质量的对数,实行线性回归后获得线性方程。

2.4.3测定样品中多糖的相对分子质量精密称取2.1项中所制备出的三种适量干燥粗多糖,配置得到10mg/mL多糖溶液,结合

2.4.1来测定,进而计算出相应的多糖相对分子质量。

2.5结果

水提、酸提、碱提法提取多糖量从表1可知,相对分子质量色谱的分布图可见图1,水提多糖提取率高于酸提与碱提要高,酸提糖醛酸提取率和另外两种方法比较明显较高。水提粗多糖保留时间是11~25min,相对分子质量180~1.8×106,它具有比较广的范围,酸提粗多糖保留17~25min,相对分子质量是180~1.0×105,可能是由于酸环境破坏了试剂内的大分子多糖,碱提粗多糖大致和水提保留时间一致,水提多糖和酸提比较的相对分析质量范围要更广,且信息也更全面。在基础性研究后可知,将提取率高且信息全面的方法作为最佳提取法。结合多糖、糖醛酸、多糖相对分子量等情况,其中选择水作为提取溶剂。

3.讨论

在本次试验中,在对提取溶剂进行选择中,考察了0.1~0.5mol/L的盐酸溶液和0.1~0.5mol/L的氢氧化钠溶液提取结果,最终得知酸和碱浓度比较高的情况下对提取的浓度比较深,该种方法下的多糖提取率低,可能是在浓酸或是浓碱状态下被破坏掉了【4~6】。进而使得大分子分解为小分子的单糖、多糖,无法被75%这一浓度的乙醇沉淀,当浓度是0.1~0.3mol/L的时候,提取液的颜色会更深,相应的多糖提取率也会逐渐升高【7~8】。因而本次试验分别使用0.3mol/LHcl和NaOH溶液当做酸提和碱提溶液。

综上可知,人参多糖最佳提取方法是使用15倍水量,100℃水浴实施提取3次,一次提取时间为3h。这一工艺的操作比较简便,具有一定的稳定性,能够被运用在产业化生产过程中。

参考文献:

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作者简介:

李彩景(1978-10),男,汉族,福建连江人,本科学历,福建省立医院药学部,职称:主管药师,主要从事药物研究工作。

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