福建省立医院药学部350001
【摘要】目的研究优选人参多糖最佳提取工艺。方法以多糖提取率、糖醛酸提取率和相对分子质量作为指标，对比三种提取方法的下的提取效率，最终选出最佳的提取工艺。结果最好的人参多糖提取工艺是加入15倍的水量，在100℃水浴下提取3次，一次提取时间为3h。结论这一工艺的操作比较简便，具有一定的稳定性，能够被运用在产业化生产过程中。
【关键词】优选人参；提取工艺；相对分子量；人参多糖；糖醛酸；正交试验
人参是五加科植物人参干燥的根以及根茎，其具备良好的补元气，复脉固脱、补脾益肺等功效【1】。人参富含皂苷类、蛋白质、糖类、黄酮类、维生素、挥发性成本和多种微量元素。当前的药理研究显示，人参多糖具有提高人体免疫力、抵抗肿瘤、延缓衰老和抵抗辐射等多种显著功效，且其中的酸性多糖存在很好的增强免疫及抵抗肿瘤的效果【2】。当前植物多样的提取方法主要为有水提取法、酸提取法、酶提取等，其中最经常使用的是水提法、酸提法和碱提法【3】。本次研究中就以上方法来对人参多糖进行提取，以多糖、糖醛酸提取率、多糖相对分子质量为指标，将提取结果和提取率作出对比，通过正交试验来选取最佳提取工艺，找出最可靠的人参多糖提取方法。
1.使用仪器及材料
本次研究中所使用的仪器和材料情况见下表1：
2.提取方法及结果
2.1三种提取方法介绍
2.1.1水提法精密称得10g人参药材，平行分为3份，放置在圆底烧瓶的底部，在其中加入20倍的水后，浸泡2小时，放置在90℃的水浴内提取3小时，提取1次，滤过，滤液经500r/min，10min离心，获取上清液，在其中加入95%的乙醇，实现乙醇体积分数调剂到75%，醇沉过夜、抽滤，沉淀分别运用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥并称定质量。
2.1.2酸提法人参取药及分类方式同水提法，加入20倍量的0.3mol/L盐酸，浸泡2小时，在90℃水浴内提取3小时，1次提取后，滤过，滤液在5000r/min，10min条件下离心，得到上清液，在1.0mol/LnaOH溶液将试剂的pH值调整至6~7，离心，在上清液中加入95%乙醇并且达到75%体积分数后，醇沉过夜、抽滤、随后称定质量。
2.1.3碱提法精密称取试验材料10g，平分为3份，置于圆底烧瓶底部，加20倍量0.3mol/LNaOH溶液，浸泡2h，随后在于水浴90℃提取3h，经过提取和过滤后滤液于10min，5000r/min离心获取上清液，采用1.0mol/LHcL溶液将pH值到6~7，离心后得到上清液，加95%乙醇至体积分数为75%，醇沉过夜、抽滤后，分别使用无水乙醇、丙酮、乙醚进行洗涤，干燥后称定质量。
2.2测定多糖
2.2.1对照溶液取干燥10mg的D-无水葡萄糖当做对照，用100mL量瓶盛装定容，配置成100μg/mL储备液备用。
2.2.2制备供试品溶液精密称得10mg干燥粗多糖，放于100mL量瓶中定容，配制出100μg/mL供试品溶液备用。
2.2.3标准曲线取对照溶液，分别将其剂量分配为0.1、······0.8、1.0mL，并分别放置于具塞试管中，加入蒸馏水补足1.0mL后，在其中加入6%的1.0mL苯酚溶液，以及5.0mL的浓硫酸，摇匀后放置在沸水中水浴15min，放置于冰水浴内10min后在室温下放置15min，并且在490nm处对吸光度A值进行测定，将A值当做纵坐标，质量浓度为横坐标，实行线性回归，获得对应回归方程，基于D-无水葡萄糖10.023~100.25μg/mL区间具有良好的线性关系
2.2.4精密度取0.8mL对照品溶液，用具塞试管盛装，依据2.2.3中的方法对A值进行测定，重复测定的次数共为6次，最终测得的A值RSD是0.093%。
2.2.5稳定性试验取1.0mL供试品溶液用具塞试管盛装，依据2.2.3中的方法来对A值进行测定，且测定一次的间隔时间是半小时，最终测定出的A值RSD是0.807%，这一结果显示了供试品溶液在3h内是比较稳定的。
2.3糖醛酸测定法
2.3.1对照溶液取10mg干燥恒定质量D-半乳糖醛酸作对照，称取后放置在100mL的量瓶中定容，配置为100μg/mL的储备液，作为备用液。
2.3.2制备供试品溶液取10mg干燥粗多糖，置于100mL量瓶定容，随后配置100μg/mL储备液备用。
2.3.3标准曲线分别量取0.1······0.8、1.0mL对照溶液置于具塞试管中，加入蒸馏水至1.0mL，在冰水浴内加入四硼酸钠-浓硫酸溶液6.0mL，摇匀后放置半小时，在525nm位置测定A值，将A值作为纵坐标，质量浓度作为横坐标进行线性回归，得出回归方程，D-半乳糖醛酸于9.846~98.43μg/mL区间线性关系表现为良好。
2.3.4试验精密度取0.5mL剂量的对照溶液，用具塞试管盛装，并加水至1.0mL，依据2.3.3项内的方法对A值进行测定，重复测定6次，最终得到结果A值RSD是0.121%。
2.3.5稳定性试验精密称取1.0mL的供试品溶液后，放置于具塞试管内，结合2.3.3方法测定A值，结果A值RSD为0.885%，体现出供试品溶液于2h内是保持稳定的。
2.4相对分子质量
2.4.1色谱条件若色谱柱是Polysep-GFC–P4000；流动相为0.71%Na2SO4和0.02%NaN3溶液，体积流量是0.5mL/min；柱温35℃，检测仪器是RID-10A，温度是35℃；进样量是20μL。
2.4.2线性关系分析将不同相对分子质量右旋糖酐做对照，采用流动相实现对10mg/mL溶液的配置，进样20μL，对相应保留时间并实行记录，横坐标是保留时间t，纵坐标是相对分子质量的对数，实行线性回归后获得线性方程。
2.4.3测定样品中多糖的相对分子质量精密称取2.1项中所制备出的三种适量干燥粗多糖，配置得到10mg/mL多糖溶液，结合
2.4.1来测定，进而计算出相应的多糖相对分子质量。
2.5结果
水提、酸提、碱提法提取多糖量从表1可知，相对分子质量色谱的分布图可见图1，水提多糖提取率高于酸提与碱提要高，酸提糖醛酸提取率和另外两种方法比较明显较高。水提粗多糖保留时间是11~25min，相对分子质量180~1.8×106，它具有比较广的范围，酸提粗多糖保留17~25min，相对分子质量是180~1.0×105，可能是由于酸环境破坏了试剂内的大分子多糖，碱提粗多糖大致和水提保留时间一致，水提多糖和酸提比较的相对分析质量范围要更广，且信息也更全面。在基础性研究后可知，将提取率高且信息全面的方法作为最佳提取法。结合多糖、糖醛酸、多糖相对分子量等情况，其中选择水作为提取溶剂。
3.讨论
在本次试验中，在对提取溶剂进行选择中，考察了0.1~0.5mol/L的盐酸溶液和0.1~0.5mol/L的氢氧化钠溶液提取结果，最终得知酸和碱浓度比较高的情况下对提取的浓度比较深，该种方法下的多糖提取率低，可能是在浓酸或是浓碱状态下被破坏掉了【4~6】。进而使得大分子分解为小分子的单糖、多糖，无法被75%这一浓度的乙醇沉淀，当浓度是0.1~0.3mol/L的时候，提取液的颜色会更深，相应的多糖提取率也会逐渐升高【7~8】。因而本次试验分别使用0.3mol/LHcl和NaOH溶液当做酸提和碱提溶液。
综上可知，人参多糖最佳提取方法是使用15倍水量，100℃水浴实施提取3次，一次提取时间为3h。这一工艺的操作比较简便，具有一定的稳定性，能够被运用在产业化生产过程中。
参考文献：
[1]宋利华，萧伟，鹿丽丽，王振中，姜华，张怡，朱克近.正交试验优选人参多糖的提取工艺[J].中草药，2012，02：283-287.
[2]孙聪，曾鹏涛，李天一，吴强.正交实验法优选人参总皂苷提取工艺的研究[J].长春中医药大学学报，2012，03：533-534.
[3]金达明，吴俊，赵岩，张连学，翟为.中心组合设计-响应面分析法优选人参中总皂苷的超声提取工艺[J].时珍国医国药，2012，09：2148-2150.
[4]王耀文，孟宪生，包永睿，王帅.人参提取工艺的优化及其有效成分与药效学相关性分析[J].中成药，2012，11：2240-2242.
[5]XieH，CaoY，LiuJ，etal.Optimizationofextractionprocessofwater-solublepolysaccharidesfromseedsmealofginseng[J].Science&TechnologyofFoodIndustry，2014，i（9）：249-253.
[6]薛雅光，潘书洋，谷雨，王晶，于蔷蔷，王振辉，李超生.正交试验优选参杞补气颗粒中人参提取工艺[J].世界科学技术-中医药现代化，2014，06：1417-1421.
[7]肖志伟，乐智勇，朱国雪，梁生旺.人参多糖检测方法及提取工艺优选[J].中国现代中药，2016，01：106-109.
[8]韩宵，朱磊，闫春风，翁慧沥，董海荣.多指标综合加权评分法优选人参醇提工艺[J].中国现代中药，2016，01：110-113+125.
作者简介：
李彩景（1978-10），男，汉族，福建连江人，本科学历，福建省立医院药学部，职称：主管药师，主要从事药物研究工作。