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一株产α-半乳糖苷酶的成团泛菌的筛选及酶学性质的研究

2020-12-08阅读(615)

一株产α-半乳糖苷酶的成团泛菌的筛选及酶学性质的研究

论文摘要

α-半乳糖苷酶（α-Galactosidase）是一种通过分解糖分子中非还原性末端的α-1,6-半乳糖苷键从而消除豆类中的抗营养因子,提高营养素利用率的酶,它可以直接水解蜜二糖因此又叫蜜二糖酶。本论文从不同的样品中筛选分离可产α-半乳糖苷酶的微生物,以寻找更多具有不同酶学性质的的α-半乳糖苷酶。从腐乳中分离得到一株可产α-半乳糖苷酶的细菌菌株,并对所得菌株的产酶条件和酶学性质进行研究,主要实验内容及实验结果如下:（1）根据X-α-Gal可在α-半乳糖苷酶的催化下产生蓝色物质的特性,用它做指示剂从豆腐乳中筛选出一株产α-半乳糖苷酶能力较高的菌株,命名为GK。对菌株GK进行16S rDNA、生理生化实验等一系列的鉴定,最终确定其为一株成团泛菌（Pantoea agglomerans）。（2）对菌株GK的生长条件和产酶条件进行研究,发现菌株GK的最适生长pH为6.5、最适生长温度为25℃,而最佳产酶条件为培养基初始pH7.0、装液量250mL/500mL、培养温度20℃、培养时间15h,此时的酶活为14.07U/mL。根据各单因素的实验结果又对温度、pH、装液量做了正交实验来分析各因素之间的交互影响,以期寻找该菌的最佳培养条件及最佳产酶条件。实验结果表明:菌株GK生长因素的影响顺序为温度>pH>装液量;菌株GK产酶因素的影响顺序为温度>装液量>pH。（3）对菌株GK所产的α-半乳糖苷酶的酶学性质进行研究发现:该酶的最适反应pH为7.0,最佳反应温度为43℃,在45℃以下和pH5.08.0的酸碱度条件下酶活都很稳定,5h内基本不变。Zn2+、Cu2+、Ca2+、Ag+对该酶的抑制作用明显,基本完全抑制了酶的活力;K+和Na+对α-半乳糖苷酶的酶活性无明显影响;而EDTA则可明显促进酶活,作用24h后,酶活达到对照酶活的350%。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  •   1.1 α-D-半乳糖苷酶
  •     1.1.1 α-半乳糖苷酶来源及国内外研究现状
  •     1.1.2 α-半乳糖苷酶性质
  •     1.1.3 α-半乳糖苷酶的应用
  •       1.1.3.1 α-半乳糖苷酶在饲料中的应用
  •       1.1.3.2 α-半乳糖苷酶在食品领域上的应用
  •       1.1.3.3 α-半乳糖苷酶在医学方面的应用
  •       1.1.3.4 α-半乳糖苷酶在其他行业的应用
  •   1.2 成团泛菌
  •     1.2.1 成团泛菌的由来
  •     1.2.2 成团泛菌的作用
  •   1.3 本实验的主要内容、目的及创新性
  •     1.3.1 本实验的主要内容
  •     1.3.2 本试验的目的
  •     1.3.3 本研究的创新点
  • 第二章 产α-半乳糖苷酶的成团泛菌的筛选和鉴定
  •   2.1 材料与方法
  •     2.1.1 样品采集
  •     2.1.2 主要实验药品
  •     2.1.3 主要实验仪器
  •     2.1.4 培养基与溶液的配制
  •       2.1.4.1 培养基的配制
  •       2.1.4.2 溶液的配制
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 产α-半乳糖苷酶菌种的分离和纯化
  •     2.2.2 菌株的鉴定
  •       2.2.2.1 菌株16S rDNA鉴定
  •       2.2.2.2 菌株形态学和生理生化特征
  •   2.3 结果与分析
  •     2.3.1 菌株16S rDNA鉴定
  •     2.3.2 菌株形态学和生理生化特征
  •   2.4 结论和讨论
  • 第三章 菌株生长及产酶条件的优化
  •   3.1 实验材料
  •     3.1.1 菌种
  •     3.1.2 主要实验药品
  •     3.1.3 主要实验仪器
  •     3.1.4 培养基及试剂配方
  •   3.2 α-半乳糖苷酶活测定方法
  •     3.2.1 粗酶液的制备
  •     3.2.2 酶活的测定
  •     3.2.3 标准曲线的绘制
  •     3.2.4 胞内酶和胞外酶的判断
  •   3.3 菌株GK的生长和产酶条件优化
  •     3.3.1 温度对菌株生长及产酶的影响
  •     3.3.2 培养基初始pH对菌株生长及产酶的影响
  •     3.3.3 菌株生长及产酶随时间的变化
  •     3.3.4 碳源对菌株生长及产酶的影响
  •     3.3.5 氮源对菌株生长及产酶的影响
  •     3.3.6 不同金属离子及螯合剂对菌株生长的影响
  •     3.3.7 不同接种量对菌株生长及产酶的影响
  •     3.3.8 摇瓶装液量对菌株生长及产酶的影响
  •     3.3.9正交实验
  •   3.4 结果与分析
  •     3.4.1 温度对菌株生长及产酶的影响
  •     3.4.2 初始pH对菌株生长及产酶的影响
  •     3.4.3 菌株生长及产酶随时间的变化
  •     3.4.4 碳源对菌株生长及产酶的影响
  •     3.4.5 氮源对菌株生长及产酶的影响
  •     3.4.6 不同金属离子及螯合剂对菌株生长的影响
  •     3.4.7 不同接种量对菌株生长及产酶的影响
  •     3.4.8 不同摇瓶装液量对菌株生长及产酶的影响
  •     3.4.9 正交优化实验
  •   3.5 结论与讨论
  • 第四章 成团泛菌α-半乳糖苷酶酶学性质研究
  •   4.1 实验材料
  •     4.1.1 菌种
  •     4.1.2 主要实验药品
  •     4.1.3 主要实验仪器
  •     4.1.4 溶液的配制
  •   4.2 试验方法
  •     4.2.1 粗酶液的制备
  •     4.2.2 硫酸铵分级沉淀
  •     4.2.3 透析
  •   4.3 α-半乳糖苷酶酶学性质研究
  •     4.3.1 最适温度及温度稳定性
  •     4.3.2 最适pH及pH稳定性
  •     4.3.3 不同金属离子对酶活性的影响
  •   4.4 结果与分析
  •     4.4.1 硫酸铵分级沉淀
  •     4.4.2 透析
  •     4.4.3 温度对酶活的影响
  •     4.4.4 温度稳定性
  •     4.4.5 最适pH
  •     4.4.6 pH稳定性
  •     4.4.7 金属离子及络合物对α-半乳糖苷酶的影响
  •   4.5 结论与讨论
  • 第五章 结论与展望
  •   5.1 结论
  •   5.2 展望
  • 参考文献
  • 发表论文和参加科研情况说明
  • 致谢

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 侯星

    导师: 伍时华,易弋

    关键词: 半乳糖苷酶,成团泛菌,产酶条件,酶学性质,促进

    来源: 广西科技大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,轻工业手工业

    单位: 广西科技大学

    分类号: TS201.3

    总页数: 63

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