体壁水解酶论文_刘征东

导读:本文包含了体壁水解酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:海参,水解酶,收率,果胶,多糖,相关性,蛋白。

体壁水解酶论文文献综述

刘征东[1](2015)在《海参α-糖苷键水解酶与海参体壁自溶相关性研究》一文中研究指出海参营养价值丰富,然而海参的自溶现象使海参营养流失严重,即使在热加工过的海参在贮存、销售中也存在体壁劣化问题,因此寻找海参体壁自溶的影响因素成为研究热点。本文则探究海参体壁中α-糖苷键多糖水解酶(以果胶酶为重点研究对象)及其与海参体壁自溶的相关性。首先比较了用于多糖水解酶活力测定的还原端基测定法,如DNS法、PAHBAH法和MBTH法,结果表明,叁种方法测得的标准曲线线性关系良好,其灵敏度MBTH法最高,PAHBAH法次之,DNS法最低。由于PAHBAH法的显色产物稳定性较差,不适合酶活力的大批量测定,而DNS法灵敏度过低,因此,选择MBTH法用于海参体壁多糖水解酶活力的微量测定。其次以仿刺参(Apostichopus japonicus)为实验材料,利用机械匀浆、缓冲液浸提、硫酸铵盐析、透析等分离方式从海参体壁中得到粗酶,发现具有果胶酶活力、淀粉酶活力、甘露聚糖酶活力,其中果胶酶活力最高。偏碱性条件浸提更易得到较高的果胶酶活力。以果胶为底物,研究粗酶中果胶酶的部分酶学性质,结果发现,在pH7.0时,果胶酶活性最高,在pH3.0-10.0条件下保存4hr后,果胶酶活性均略有升高,表明一定离子强度对果胶酶活力具有激活作用,且该酶耐酸碱性良好;在90。C时,果胶酶活力最高;在90。C条件下保温20mmin前后活力无显着性变化,说明该果胶酶耐强热,这对研究经热加工过的海参体壁在贮藏期内的体壁劣化机理具有重要意义。为了对上述所得粗酶进一步纯化,通过测定粗酶液的总带电情况,发现大部分蛋白的等电点集中在pH4.40,因而选择阴离子交换柱层析,结果表明,当使用DEAE-52弱阴离子填料时,果胶酶比活较高点集中在0.1M、0.2M的低NaCl浓度交换洗脱峰中。为收集更多的果胶酶,改用Q-Fast Flow强阴离子填料,流动相pH从7.0提高至8.0,但并没有收集到更多果胶酶,表明两种方法均可用于分离果胶酶。电泳图的结果比较表明,海参体壁中的果胶酶分子量可能为280-288kDa。分别研究了离子峰1(0.1M NaCl洗脱峰)和离子峰2(0.2M NaCl洗脱峰)的酶学性质,结果表明,在酶解温度为90。C和酶解pH为7.0时,离子峰1组分中果胶酶活力最高,1 00℃C保温20min后仍具有40%的活力,Ba2+、K+对该酶有明显的激活作用,Fe3+、Mg2+、Zn2+对该酶有明显的抑制作用,Ca2+、Mn2-对该酶具有微弱的抑制作用,EDTA对可强烈抑制该酶的活性,表明该酶具备金属酶的性质。在酶解温度为80℃C和酶解pH为7.0时,离子峰2组分中果胶酶活力最高,在100℃C条件下保温20min,活力非降反升至原来的150%, Ba2+、Fe3+、C a2+对离子峰2中的果胶酶有明显的激活作用,Mg2+、Mn2+、K+对该酶有明显的抑制作用,Zn2+对该酶基本没有抑制效果,EDTA可强烈抑制该酶的活性,表明该酶也具备金属酶的性质。强热使其活力非降反升的原因有待于更深入的研究。最后研究海参体壁果胶酶与海参自溶的相关性,以灭过酶的海参体壁组织为底物分别以透析粗酶液、Q-Fast Folw阴离子交换洗脱酶液进行该底物的水解敏感性研究,结果表明,上述具有果胶酶活力的酶液均可使海参体壁释放还原性物质;经过强热处理的酶溶液不仅可提高果胶酶活力还可提高海参体壁还原性物质的增加速率,而并不存在蛋白酶活力,即该酶水解海参体壁的能力与果胶酶活力的增加呈正相关,而与蛋白酶活力无关。(本文来源于《青岛科技大学》期刊2015-06-09)

程袁芬[2](2015)在《蒸煮海参体壁多糖水解酶的分离纯化及性质研究》一文中研究指出海参的营养价值十分丰富,但自溶问题严重影响了海参的养殖、加工、储存、运输及营养保持。传统干制海参的加工造成了大量营养物质流失,而经过蒸煮等工艺热处理的即食海参保留了海参的原始形态以及口感而深受消费者的青睐。但即食海参在储存期间同样会发生自溶现象。目前对海参体壁蛋白酶、多糖水解酶等的研究均是以新鲜海参为研究对象,尚且没有以蒸煮过的海参体壁为原材料提取粗酶进行研究。其中对多种体壁蛋白酶的研究结果表明,此类酶的热稳定性不高,80℃以上强热即会使其失活,因此本课旨在寻找强热抗逆性酶,并在本课题组所发现的鲜活海参体壁所存在的果胶酶基础上,以蒸煮过得海参体壁为实验材料,探寻该酶的存在,并对其进行分离纯化和酶学性质研究,并研究该酶与海参自溶的相关性,为海参体壁劣化提供理论和实践依据。(1)本文首次以蒸煮海参体壁为原料提取粗酶液,以果胶为底物对蒸煮海参体壁粗酶液进行了酶学性质探讨。确定了最佳浸提pH为6.0,反应离子强度为0.15mol/L,反应温度为40℃。在此条件下所得粗酶液中存在最适pH为6.0的果胶酶,将该酶在90℃、95℃、100℃分别保温30min仍能保留43.6%、62.7%、53.9%的残留活力,说明该酶为强热抗逆性酶。(2)在探究蒸煮海参体壁多糖水解酶与海参体壁劣化相关性研究中发现:以蒸煮海参体壁为原料所提取的粗酶可水解果胶,说明粗酶液中存在果胶酶活力;可水解灭酶后的海参体壁并显示多糖水解酶活力,但无蛋白酶活力。因此可推断,海参体壁的劣化很可能与多糖水解酶(果胶酶)有关。另外对海参体壁进行不同蒸煮时间及不同灭菌时间的处理,通过对所得相应酶液的电泳分析和果胶酶活力的测定,发现高温虽导致蛋白降解,但仍存在果胶酶活力,说明果胶酶具有良好的热抗逆性,进一步佐证了海参体壁劣化极有可能与蒸煮海参体壁多糖水解酶(果胶酶)有关。(3)利用Q-Fast flow强阴离子交换层析、Sephacryl S-300 HR凝胶层析、超滤管、SDS-PAGE对即食海参自溶液进行分离纯化,结果表明,即食海参粗酶液线性洗脱峰中存在热抗逆性的果胶酶,选取线性洗脱果胶酶活力较高的管149、150151、152、153、154号管对其进行热稳定性实验。将酶液在金属浴上90℃加热处理15min后发现酶液残留活力依次为59.6%、89.7%、47.2%、130.8%、72.0%、50.2%,其中,第152管的酶存在强热激活现象。另外,新鲜海参、即食海参、蒸煮海参粗酶液等电点的测定中,各自pH变化率的极大值点基本一致,说明叁种粗酶液中蛋白质所带电荷情况基本一致。这对于进一步研究该酶的强热激活机理及其与海参体壁劣化的相关性奠定了实验基础。(本文来源于《青岛科技大学》期刊2015-04-16)

刘海梅,王苗苗,左为民,王雷,赵芹[3](2013)在《单环刺螠体壁肌酶解工艺参数的研究——动物蛋白水解酶》一文中研究指出烟台海肠即单环刺螠,为国家地理标志农产品,以其体壁肌为原料进行酶解工艺参数研究。采用动物蛋白水解酶进行酶解,研究发现酶的添加量、pH、酶解时间、酶解温度对氮收率和水解度均具有极显着影响,此酶的适宜添加量为2%,pH为7.0,酶解时间为4h,酶解温度为50℃。在此适宜条件下,单环刺螠体壁肌的氮收率和水解度分别达到94.45%和48.17%,体壁肌中的蛋白质几乎被完全水解到水解液中。(本文来源于《中国调味品》期刊2013年09期)

体壁水解酶论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

海参的营养价值十分丰富,但自溶问题严重影响了海参的养殖、加工、储存、运输及营养保持。传统干制海参的加工造成了大量营养物质流失,而经过蒸煮等工艺热处理的即食海参保留了海参的原始形态以及口感而深受消费者的青睐。但即食海参在储存期间同样会发生自溶现象。目前对海参体壁蛋白酶、多糖水解酶等的研究均是以新鲜海参为研究对象,尚且没有以蒸煮过的海参体壁为原材料提取粗酶进行研究。其中对多种体壁蛋白酶的研究结果表明,此类酶的热稳定性不高,80℃以上强热即会使其失活,因此本课旨在寻找强热抗逆性酶,并在本课题组所发现的鲜活海参体壁所存在的果胶酶基础上,以蒸煮过得海参体壁为实验材料,探寻该酶的存在,并对其进行分离纯化和酶学性质研究,并研究该酶与海参自溶的相关性,为海参体壁劣化提供理论和实践依据。(1)本文首次以蒸煮海参体壁为原料提取粗酶液,以果胶为底物对蒸煮海参体壁粗酶液进行了酶学性质探讨。确定了最佳浸提pH为6.0,反应离子强度为0.15mol/L,反应温度为40℃。在此条件下所得粗酶液中存在最适pH为6.0的果胶酶,将该酶在90℃、95℃、100℃分别保温30min仍能保留43.6%、62.7%、53.9%的残留活力,说明该酶为强热抗逆性酶。(2)在探究蒸煮海参体壁多糖水解酶与海参体壁劣化相关性研究中发现:以蒸煮海参体壁为原料所提取的粗酶可水解果胶,说明粗酶液中存在果胶酶活力;可水解灭酶后的海参体壁并显示多糖水解酶活力,但无蛋白酶活力。因此可推断,海参体壁的劣化很可能与多糖水解酶(果胶酶)有关。另外对海参体壁进行不同蒸煮时间及不同灭菌时间的处理,通过对所得相应酶液的电泳分析和果胶酶活力的测定,发现高温虽导致蛋白降解,但仍存在果胶酶活力,说明果胶酶具有良好的热抗逆性,进一步佐证了海参体壁劣化极有可能与蒸煮海参体壁多糖水解酶(果胶酶)有关。(3)利用Q-Fast flow强阴离子交换层析、Sephacryl S-300 HR凝胶层析、超滤管、SDS-PAGE对即食海参自溶液进行分离纯化,结果表明,即食海参粗酶液线性洗脱峰中存在热抗逆性的果胶酶,选取线性洗脱果胶酶活力较高的管149、150151、152、153、154号管对其进行热稳定性实验。将酶液在金属浴上90℃加热处理15min后发现酶液残留活力依次为59.6%、89.7%、47.2%、130.8%、72.0%、50.2%,其中,第152管的酶存在强热激活现象。另外,新鲜海参、即食海参、蒸煮海参粗酶液等电点的测定中,各自pH变化率的极大值点基本一致,说明叁种粗酶液中蛋白质所带电荷情况基本一致。这对于进一步研究该酶的强热激活机理及其与海参体壁劣化的相关性奠定了实验基础。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

体壁水解酶论文参考文献

[1].刘征东.海参α-糖苷键水解酶与海参体壁自溶相关性研究[D].青岛科技大学.2015

[2].程袁芬.蒸煮海参体壁多糖水解酶的分离纯化及性质研究[D].青岛科技大学.2015

[3].刘海梅,王苗苗,左为民,王雷,赵芹.单环刺螠体壁肌酶解工艺参数的研究——动物蛋白水解酶[J].中国调味品.2013

论文知识图

半定量RT-PCR分析基因表达水平Figure...金黄色葡萄球菌中LytSR双组份信号系统6-3加热前后果胶酶活力Fi.6-...6-1加热后粗酶离子交换层析Fig...昆虫病原真菌侵染宿主的过程

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体壁水解酶论文_刘征东
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