张玲妮[1]2004年在《猪链球菌2型MRP单克隆抗体的制备及血清抗体的检测》文中研究指明应用0.8％甲醛灭活的猪链球菌2型9801全菌作为抗原，免疫BABL／C小鼠，待抗体水平达到1：100000时，取脾细胞并与对数期生长良好的SP2／0进行融合。应用亲和层析纯化的原核表达的溶菌酶释放蛋白(MRP)为抗原建立了间接ELISA筛选阳性克隆，将阳性克隆多次有限稀释(每孔约0.5～1个细胞)得到MRP阳性单克隆细胞8株。将10~5～10~7个细胞注射到BABL／C小鼠腹腔制备腹水，效价约1：10000，并用Westen-blot鉴定此单抗。应用兔源全菌抗体和MRP单抗建立双夹心间接ELISA，用于检测猪链球菌2型，试验结果证实可以区分猪链球菌2型与A群、B群、C群、D群链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等菌株。 应用甲醛灭活的猪链球菌2型9801菌株作为标准菌株建立了检测猪链球菌2型抗体的菌体包被间接ELISA，并应用该菌的荚膜多糖提取物建立了荚膜多糖包被间接ELISA。并对两种间接ELISA方法进行了比较。试验结果显示，利用荚膜多糖包被的间接ELISA检测猪链球菌抗体虽然非特异性低，但试验结果阳性血清OD值偏小，试验方法的灵敏度降低，荚膜多糖作为包被抗原对ELISA板的要求很高，国产普通ELISA板包被效果很差；而应用菌体包被间接ELISA进行猪链球菌抗体检测，非特异性比用荚膜多糖包被间接ELISA高，但比超声波抗原的非特异性低，非特异性随着抗体稀释度的增加而逐渐减小，试验可以找到一个灵敏度与特异性均较高的稀释度，因而适用于猪链球菌2型抗体的检测。与毒力因子作为包被抗原的间接ELISA相比，菌体包被间接ELISA进行猪链球菌抗体检测还具有全面准确的特点。菌体作为包被抗原时对ELISA板的要求不高，可以降低检测的成本，在-20℃可保存一年半以上。菌体包被间接ELISA优于荚膜多糖包被间接ELISA，可用于猪链球菌的抗体监测，便于推广应用。 应用猪链球菌2型9801株菌体包被间接ELISA分别对70份阳性血清和70份阴性血清进行1：100、1：200、1：400、1：800稀释检测，制作了不同稀释度下阳性血清和阴性血清的OD值与出现频率的正态分布图，以及血清不同稀释倍数的检测结果的ROC曲线，利用血清流行病学原理对检测结果进行分析，确定了检测方法的最佳单一稀释度1：400，以及判定阳性血清和阴性血清的OD值：以OD值≥0.6为检测阳性，以OD值≤0.3为检测阴性，0.3＜OD值＜0.6为检测可疑值。并应用建立的方法及阳性摘要血清和阴性的判定标准，对1 997年采集的江苏地区的猪血清进行了检测.阳性率高达48%，尤其是双甸马塘地区，阳性率高达7 2.4%.而杭体阳性率高的地区也正是1998年至1 999年间江苏省首先幕发猪健球菌2型的地区，推测在98年猪链球菌大爆发的前期，有的猪场已经存在猪链球菌病感染，可能由于自身抵抗力和杭生素的作用，没有在当时就一下基发，因而及时对杭体监控是预防控制该病的重要措施.
高地[2]2012年在《猪链球菌2型免疫磁珠夹心ELISA方法的建立》文中研究指明猪链球菌(Streptococcus suis, SS)是一种严重影响养猪业发展的病原,共分为33种血清型,其中与疾病最为相关的是猪链球菌2型(SS2),也是临床分离率最高的血清型。同时,猪链球菌还是一种重要的人畜共患病病原。病原的分离鉴定是诊断疾病和开展病原学研究的前提,经典的方法是在分离培养的基础上,开展病原的鉴定,由于猪链球菌比较容易失活,导致病料中活细菌的数量较少,分离率较低,影响和限制了有关病原菌的深层次探索和研究。建立快速、敏感和特异的检测方法,对该病的诊断及研究具重要意义。为建立一种新型检测方法,本实验作了如下探索。用纯化的重组MRP蛋白抗原免疫Balb/c小鼠,制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞系融合,经间接ELISA检测方法筛选和有限稀释法克隆化,获得2株能稳定分泌抗MRP蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为7H1和3B11,抗体亚类均为IgG2bκ,诱生腹水的抗体效价均为106。间接ELISA检测特异性表明,2株单克隆抗体与其他不同血清型菌株无交叉反应；免疫印迹(western blot)分析,只有7H1能与重组MRP蛋白和HA9801菌体均产生特异性蛋白条带,而3B11只能与重组MRP蛋白产生特异性蛋白条带。纯化后的重组MRP蛋白纯度较高,达到筛选要求。表达的MRP筛选的阳性单克隆抗体不仅可以与重组表达的MRP反应,而且可与菌体反应,便于今后检测应用。制备了纯度和特异性较高的猪链球菌2型HA9801多克隆抗体。以猪链球菌2型MRP蛋白单克隆抗体为捕获抗体包被磁珠,以多克隆抗体为检测抗体,检测猪链球菌2型抗原。试验确定单抗和多抗的最佳工作浓度分别为5μg/mL和6.25μg/mL,抗原捕获及多抗作用时间均为30min,酶标二抗最佳稀释度为1：15000,制备好的免疫磁珠保存期为5个月,最终确立了猪链球菌2型磁珠夹心ELISA方法。该方法特异性较高,检测实验室保存的存在抗原交叉性的菌株时不出现阳性反应。敏感性尚可,最低可在抗原量103CFU/mL时显示阳性反应。对人工感染病料的检测结果与PCR检测的符合率为69.23%,但敏感性与PCR方法有一定差距。
王海丽[3]2006年在《SS2叁种毒力相关蛋白的克隆、表达及MRP与EF单克隆抗体的制备》文中研究指明猪链球菌2型(Streptococcus suis 2，SS2)可以导致猪脑膜炎、关节炎、败血症、浆膜炎、心内膜炎、多发性关节炎等，对从业人员带来严重的威胁，可以导致人的脑膜炎、心内膜炎及中毒性休克综合症等严重疾患。目前国内外对SS的研究主要集中在SS2毒力相关因子上，目前公认的毒力相关因子有溶菌酶释放蛋白(muramidasereleased protein, MRP)、胞外蛋白因子(extracellular factor protein, EF)、溶血素(suilysin,本文简称sly)、荚膜多糖(capsular polysaccharide, CPS)等。由于对SS2毒力因子的了解较少限制了SS疫苗的研究及猪链球菌病的治疗与控制。本试验对1998年江苏海安病人分离株Habb MRP进行研究；对2005年四川资阳病人分离株分别进行EF和sly的研究。制备了MRP及EF单克隆抗体，并摸索MRP ELISA检测方法。 克隆及表达SS2人源分离株Habb mrp基因片段，构建原核表达质粒pGEX4T-2-mrp。在大肠杆菌中诱导带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的融合蛋白MRP-GST表达；经亲和层析法纯化后，用凝血酶酶切去除重组蛋白中的GST，制备纯化的MRP抗原。序列分析表明，获得的mrp基因长957bp；原核表达的融合蛋白MRP-GST的分子量约61kD；凝血酶处理的MRP抗原的分子量约为35kD。Western blot分析显示，MRP-GST、MRP蛋白均可与MRP多克隆抗血清发生特异性反应。成功地克隆人源分离株Habb的mrp基因片段，并在原核系统实现高效表达，制备的纯化抗原MRP具有良好的抗原性，为开展相关免疫学研究奠定了基础。 SS2 MRP单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。以纯化的MRP-GST蛋白为免疫原，常规免疫BALB／c小鼠，采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，并以经凝血酶酶切去除GST标签的MRP筛选细胞，经反复筛选和多次克隆化培养，筛选出特异分泌鼠抗MRP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用Western blot对单抗进行生物学特性的鉴定。成功获得6株持续、稳定分泌鼠抗MRP单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为1G1、1B6、288、3G9、2C3及3E5。 用表达纯化的MRP抗原、HRP标记的MRP抗原和一株MRP单抗腹水、以及ZY05719全菌兔多抗血清及猪多抗血清，建立检测猪链球菌MRP抗原及SS MRP抗体的ELISA方法。SS MRP抗血清的检测采用纯化的MRP抗原或灭活ZY05719细菌
马清霞[4]2004年在《猪链球菌病PCR诊断技术及SS2毒力因子单克隆抗体的研制》文中认为马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型是我国猪链球菌病的两种主要病原。马链球菌兽疫亚种主要引起猪的化脓性关节炎和败血症，而猪链球菌2型不仅可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎和突然死亡，还可以感染相关人员并致死，是一种重要的人畜共患病病原。所以猪链球菌2型在世界很多国家均受到重视，对它的研究主要集中在与毒力相关蛋白的研究上。猪链球菌2型主要的致病因子有荚膜、溶血素、溶菌酶释放蛋白(muraminidase-released protein，MRP)和胞外蛋白因子(extracellular protein factor，EF)等．根据MRP和EF等毒力相关蛋白的存在与否，猪链球菌2型可分为以下几种表现型：MRP~+EF~+、MRP~-EF~-、MRP~+EF~*、MRP~*EF~-、MRP~-EF~+、MRP~+EF~-、MRP~-EF~*等。对我国江苏地区的流行病学调查显示，来自疫区的2型菌株均为对猪有强毒力的MRP~+EF~+表现型。所以检测MRP、EF的有无和进一步的研究MRP、EF的致病机理，对猪链球菌2型引起的链球菌病的诊断，防治和根除具有很重要的意义。本实验的主要目的就是检测MRP和EF，分别建立多重PCR和制备MRP和EF的单抗。最后结合我国猪链球菌病的实际情况，设计了两重PCR，同时检测马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型。 首先结合我国实际，马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型是猪链球菌病的主要病原。本实验在在鉴定猪链球菌2型的基础上，根据马链球菌兽疫亚种的一种重要的型特异性抗原一类M蛋白，设计一对特异性引物，建立了分群PCR。PCR结果显示它能快速的从混合培养物和混合感染的病料中鉴别出这两种病原，所以此方法可以用于猪链球菌病的实验室诊断和流行病学调查。 其次研制鉴定致病性猪链球菌2型的多重PCR试剂盒。猪链球菌2型中存在强毒力、弱毒力和无毒力等菌株，而且在我国，两种毒力因子MRP和EF与强毒力具有相关性。所以检测MRP和EF的有无，可以鉴定猪链球菌2型的强弱。本实验在2型分型PCR的基础上，分别设计MRP和EF的引物，通过优化PCR反应条件和体系，建立了一个多重PCR检测试剂盒，它能在鉴定2型的基础上，检测MRP、EF以及EF~*，鉴定毒力的强弱。与细菌分离方法相比，它检测时间短，方便易行，而且敏感高，特异性好，为猪链球菌2型的流行病学调查提供了一个很好的方法。 最后，在鉴定为强毒力的菌株中，研究其毒力因子的功能，为此，本实验首先制全文摘要备了MRP和EF的单杭.通过优化培养基和硫酸氮分级沉淀等方法纯化EF;利用阴离子交换层析和凝胶层析等方法纯化MRP，分别制备M即和EF杭原，免疫BALB/c小鼠，细胞融合后，筛选阳性杭体的细胞克隆，多次有限稀释得到杭MRP和EF的单克隆细胞株，免疫印迹鉴定后，分别制备腹水杭体.并对MRP的一株单杭初步应用，将腹水单杭初步纯化后，用FITC进行标记，建立直接荧光法，检测和区分MR卫+株和MRP一株.
董亚青[5]2007年在《猪链球菌2型强毒株srtA基因缺失株的构建及其毒力分析》文中指出猪链球菌2型(Streplococcus suis type 2，SS2)是危害养猪业的重要病原菌，同时也给从业人员带来严重的威胁。根据荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)抗原性的不同，可将其分为35个血清型(1～34，1／2)。主要致病血清型为SS1、SS2、SS1╱2、SS7、SS9和SS14，其中以SS2流行最广、致病性最强。已知的与致病性相关的毒力因子主要有荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白(muraminidase releasedprotein，MRP)、胞外因子(extracellular factor，EF)、溶血素(suilysin，Sly)等，但该菌致病机制不明，新的毒力因子有待发掘。本实验对普遍存在于革兰阳性菌中的重要膜转运蛋白Sortase进行了初步功能研究，证实Sortase编码基因srtA及其类似蛋白在SS2中的存在；同时构建了srtA基因的缺失株，通过动物实验证实缺失株毒力与野毒株相比有所下降；成功克隆并原核表达了05ZYH33的Sortase蛋白，重组蛋白具有一定的免疫原性。1猪链球菌2型强毒株srt基因同源序列分析及srtA的表达借助生物信息学软件对SS2人源强毒力株05ZYH33基因组序列进行同源性检索，确定05ZYH33基因组编码Sortase及其相关家族蛋白的数量和分布情况，得到6个与Sortase编码基因同源的序列，其中SrtA及Sortase-like归属sortase家族中的A组，SrtBCD和SrtE属B组，1个sortase-like基因为国内外首次发现。将srtA基因克隆于原核细胞E．coli，DH5α中高效表达，重组表达产物可与SS2的兔多抗血清发生特异性反应。此外，制备Sortase鼠多抗血清，间接ELISA检测的鼠多抗血清效价达1：6400。2猪链球菌srtA基因敲除突变株的构建及其特性研究构建中间为壮观霉素抗性基因，两侧为srtA编码基因上、下游同源序列的基因敲除载体，通过同源重组构建srtA基因缺失的突变株：PCR和Southern杂交鉴定突变株，筛选到1株srtA编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代的突变株05ZYH33△srtA，体外观察突变株05ZYH33△srtA的基本生物学性状，发现其革兰氏染色及溶血性与野毒株相比没有明显变化，动物实验证实srtA缺失株的毒力与野毒株相比有所下降。为进一步探讨猪链球菌2型分子致病机理奠定了研究基础．3猪链球菌2型Sortase蛋白单克隆抗体的制备以表达、纯化去除跨膜区的Sornase蛋白为免疫原，常规免疫BALB／c小鼠，采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，用纯化的Sortase蛋白包被的间接ELIS人方法反复筛选和多次克隆化培养，筛选出1株特异分泌鼠抗Sonase蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D2；Wlestern blot分析显示，该单抗与全菌蛋白可产生两条特异性反应带。
徐公义, 王海丽, 葛长城, 王长军, 唐家琪[6]2009年在《猪链球菌2型人源株MRP的表达及其单克隆抗体的制备与应用》文中研究表明将猪链球菌2型(SS2)人源株Habbmrp基因进行截短修饰后,克隆于pGEX4T-2载体中,转化大肠杆菌诱导表达约61000的融合蛋白MRP-GST,该蛋白经凝血酶作用去除重组蛋白中的GST标签,得到约35000纯化的MRP。Western blotting证实MRP可被SS2阳性血清特异性识别。以纯化的MRP抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA进行筛选获得了6株能稳定分泌抗MRP特异性单抗的细胞株。特异性试验表明该6株单抗与SS2的另外2种蛋白、大肠杆菌均不发生交叉反应。以2B8单抗腹水和SS2多克隆抗血清建立夹心ELISA对71株标准菌株和122株猪链球菌野毒株进行MRP的表征鉴定,标准株检测结果与背景符合率为为97.2%(69/71),其中34株标准血清型菌株检测的符合率为100%。表明该方法可用于猪链球菌的快速诊断和流行病学调查。
高巍[7]2007年在《猪链球菌2型单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立》文中提出猪链球菌2型是一种重要的人畜共患病病原。因而建立高效、灵敏、特异的检测方法对及时控制治疗猪链球菌病具有极其重要的意义。本研究从四川省某发病猪场无菌采集病料,通过对分离菌株形态学观察、培养特性观察、生化试验、PCR检测、动物致病性试验,获得5株猪2型链球菌,并且5株2型菌都有毒力因子MRP和EF,其中S1株、S2株和S5株对BALB/C小鼠有致死性,另2株S3株和S4株对BALB/C小鼠无致病性。利用猪链球菌2型标准株CVCC606全菌作为免疫抗原,经甲醛灭活免疫BALB/C雌性小鼠,取脾进行融合。用提纯的标准菌株CVCC606的荚膜多糖筛选阳性杂交瘤细胞,共筛选出两株抗猪链球菌2型的单克隆抗体G5和C10。单克隆抗体经亚类鉴定,G5和C10均为IgG1型。特异性实验表明G5和C10不与八种猪常见病的细菌性病原体发生交叉反应,但与分离到的5株猪2型链球菌均发生交叉反应。以已制备出的抗猪链球菌2型单克隆抗体G5为基础,建立了双抗夹心间接ELISA法,同时对相关条件进行了优化,并且用此方法对实际样本进行检测,检测出8份血清为阳性,1份血清为阴性。双抗夹心间接ELISA法的建立为猪链球菌2型检测试剂盒的开发奠定了基础。
许崛琼[8]2015年在《猪源PTX3蛋白的真核表达及其对猪链球菌2型的抗菌作用研究》文中进行了进一步梳理猪链球菌(Streptococcussuis,SS)是一种重要的人畜共患病病原菌。目前对于该病的治疗主要采用抗生素疗法,但长期大量使用抗生素必然存在抗生素耐药性的风险;另外针对该病,临床上仍缺乏有效预防猪链球菌的疫苗,故寻求能替代的治疗方案以及抗微生物化合物是备受关注的。PTX3是第一个被确认的长正五聚蛋白,具有结合到某些病原微生物的能力,PTX3也可以促进细胞吞噬功能以及随后病原体的清除。另外,PTX3具有充当调理素的治疗效果,可识别微生物成分,引发炎症反应的放大。本试验首先通过构建原核表达载体PET-32a-ptx3,获得原核表达猪源PTX3蛋白,并制备兔抗原核表达PTX3蛋白血清;随后又构建重组真核表达载体pIRES-EGFP-ptx3,并转染至真核表达宿主CHO细胞中,通过G418(750μg/ml)筛选获得能够稳定、大量表达PTX3蛋白的单克隆细胞株,并采用Ni-NTA亲和层析方法纯化细胞培养上清获得纯度较高、性质稳定的真核表达猪源PTX3蛋白;随后成功构建了重组真核表达载体pVAX-ptx3,将纯化的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠(1OOμg/只),在接种后第1,3,5,7,15,20天取外周血及注射部位肌肉,分别用RT-PCR和Western-blot方法进行检测,在第15天左右均可检测到表达产物,表明该重组质粒可在小鼠组织内进行有效表达。通过研究发现表达的猪源PTX3介导一系列抗菌反应,包括提高猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)对猪链球菌2型的吞噬能力以及抑制猪链球菌2型对Hep-2细胞的粘附。在小鼠模型中,用pVAX-ptx3预先接种的小鼠的死亡率降低,并且血、脾、肺、脑中的猪链球菌的载量显着降低;在仔猪模型中,预先接种pVAX-ptx3的仔猪感染猪链球菌2型后,外周血中的细菌载量显着降低,而IL-6和IL-8的血浆水平则显着升高,与此相反,接种组仔猪外周血中的白细胞(WBC)和中性粒细胞(NEU)则相对降低。以上结果表明猪源PTX3以及pVAX-ptx3表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型有一定的抗菌作用,同时构建的pVAX-ptx3表达载体可以在动物体内稳定无害化表达,这可能为猪链球菌病的预防和治疗提供了一个新的视角。
周俊明[9]2008年在《猪链球菌2型IMPDH单克隆抗体的制备及其识别表位分析》文中认为猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS_2)是我国猪链球菌病的重要病原,不仅可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎和突然死亡,还可感染相关人员并致死,是一种重要的人畜共患病病原。SS2可区分为强毒株、弱毒株和无毒株,在已发现的毒力基因orf2和mrp之间存在一个新的开放阅读框,本课题组通过酶活性染色已证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,本研究为了深入认识猪链球菌2型中IMPDH的免疫学特性,利用原核表达的IMPDH融合蛋白制备出了特异性针对猪链球菌2型IMPDH单克隆抗体并对其识别的表位区域进行了分析。1 SS2中IMPDH单克隆抗体的制备及鉴定利用转化有pET-IMPDH连接质粒的大肠杆菌BL21,诱导表达出分子量为48kDa的融合蛋白。亲和层析柱纯化融合蛋白后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2、2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4株腹水型单克隆抗体的间接ELISA效价分别为100×2~(11)、100×2~(11)、100×2~(10)、100×2~8。经Western-blot分析表明,4株单抗与IMPDH均具有特异性反应,而与空载体表达的硫氧还蛋白没有反应,表明了单克隆抗体具有良好的特异性。2猪链球菌2型IMPDH单克隆抗体识别表位差异性分析利用4种IMPDH全基因分片段缺失表达的融合蛋白,通过Western-blot分析了1A8、1F2、2D2、2D12四株单克隆抗体的表位差异性,结果显示前3株单抗与P-D1、P-D2、P-D3叁种基因缺失表达蛋白均有反应,但与P-D4基因缺失表达蛋白均没有反应,2D12与P-D1、P-D2均有反应,而与P-D3、P-D4没有反应,初步推断1A8、1F2、2D2叁株单抗针对表位的编码基因集中在IMPDH基因片段的627～790bp之间,2D12的表位编码基因集中在IMPDH基因片段的411～790bp之间。继而将这两段基因分别进行原核表达,获得目的蛋白,经过Western-blot分析,结果显示1A8、1F2、2D2、2D12四株单抗均与412～791bp基因片段表达产物有特异性反应,1A8、1F2、2D2叁株单抗与613～809bp基因片段表达产物有特异性反应,而2D12却与613～809bp基因片段表达产物没有反应,与前期实验推断相符,并推断4株单抗识别的表位属于线性表位。
王海丽, 徐公义, 王长军, 唐家琪[10]2008年在《猪链球菌2型人源分离株MRP单克隆抗体的制备与鉴定》文中研究表明为建立一种针对猪链球菌2型(SS2)毒力因子的特异性检测方法,研制了抗SS2溶菌酶释放蛋白(MRP)单克隆抗体(McAb),并对其生物学活性进行了分析。将表达、纯化的SS2菌株MRP免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,以纯化的MRP蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选获得了6株能稳定分泌抗MRP McAb的杂交瘤细胞系2B8、3G5、1G1、3G9、1B6和2C3。经用间接ELISA方法测定,单抗腹水的抗体效价均超过1∶105,杂交瘤细胞培养上清液的效价为1∶128~1∶1 024。Western-blotting鉴定结果表明,6株单抗均具有特异的生物学活性;以2B8单抗腹水和SS2多克隆抗血清建立的夹心ELISA方法可特异地检测MRP。
参考文献：
[1]. 猪链球菌2型MRP单克隆抗体的制备及血清抗体的检测[D]. 张玲妮. 南京农业大学. 2004
[2]. 猪链球菌2型免疫磁珠夹心ELISA方法的建立[D]. 高地. 南京农业大学. 2012
[3]. SS2叁种毒力相关蛋白的克隆、表达及MRP与EF单克隆抗体的制备[D]. 王海丽. 南京农业大学. 2006
[4]. 猪链球菌病PCR诊断技术及SS2毒力因子单克隆抗体的研制[D]. 马清霞. 南京农业大学. 2004
[5]. 猪链球菌2型强毒株srtA基因缺失株的构建及其毒力分析[D]. 董亚青. 南京农业大学. 2007
[6]. 猪链球菌2型人源株MRP的表达及其单克隆抗体的制备与应用[J]. 徐公义, 王海丽, 葛长城, 王长军, 唐家琪. 中国兽医学报. 2009
[7]. 猪链球菌2型单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立[D]. 高巍. 吉林大学. 2007
[8]. 猪源PTX3蛋白的真核表达及其对猪链球菌2型的抗菌作用研究[D]. 许崛琼. 南京农业大学. 2015
[9]. 猪链球菌2型IMPDH单克隆抗体的制备及其识别表位分析[D]. 周俊明. 南京农业大学. 2008
[10]. 猪链球菌2型人源分离株MRP单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 王海丽, 徐公义, 王长军, 唐家琪. 中国兽医科学. 2008
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