大肠杆菌整合宿主因子的表达与纯化

论文摘要

[目的]构建大肠杆菌整合宿主因子两亚基的共表达载体并对其表达纯化条件进行探索。[方法]PCR扩增himA和hip基因,重叠PCR连接起来后利用重组酶连接到表达载体p ET-duet1中,筛选阳性重组子,转化Rosetta（DE3）表达菌,调整诱导时IPTG的浓度及诱导时间,确定最佳诱导条件,最后通过himA基因C端的6×His标签与镍的结合,进行蛋白纯化。[结果]成功扩增himA和hip基因;重组表达载体p ET-duet-himAhip经PCR和DNA测序鉴定构建成功; SDS-PAGE检测到大小约为11. 1 k Da和10. 7 k Da的目的蛋白,IHF的表达成功; 37℃,A600=0. 6～0. 8时,在IPTG终浓度分别为0. 2 mmol/L、0. 5 mmol/L条件下诱导2 h、4 h,目的蛋白的表达量没有明显区别。[结论]成功构建IHF两个亚基的共表达载体,在37℃诱导条件下简单快速得到等比例的可溶性IHF-α和IHF-β,为后续研究奠定基础。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

1.1.2 试剂

1.1.3 仪器

1.1.4 培养基

1.2 方法

1.2.1 重组质粒pET-duet-himAhip的构建

1.2.1. 1 引物设计与合成

1.2.1. 2 目的基因的获取

1.2.1. 3 himA+Ligation+hip片段的获取

1.2.1. 4 himA+Ligation+hip片段与线性化pET-duet1载体连接

1.2.2 IHF的试表达及表达条件的筛选

1.2.3 IHF的大量表达与纯化

2 结果与分析

2.1 重组质粒pET-duet-himAhip的构建

2.1.1 目的基因的获取

2.1.2 重组质粒pET-duet-him Ahip的鉴定

2.2 重组表达质粒试表达及表达条件筛选

2.3 IHF的大量表达与纯化

3 讨论

4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 梁小珍,余艳红

关键词: 整合宿主因子,共表达

来源: 生物技术 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 南方医科大学南方医院妇产科

分类号: Q78

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.03.0039

页码: 220-223+239

总页数: 5

文件大小: 215K

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