导读:本文包含了牙周韧带干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:BMP4,SCX,核定位,hPDLSCs
牙周韧带干细胞论文文献综述
李艺红[1]（2015）在《rhBMP4促进多潜能的人牙周韧带干细胞成腱分化的实验研究》一文中研究指出研究目标:干细胞为基础的牙周再生是治疗牙周疾病引起的组织破坏的一项新颖而有效的治疗策略。牙周韧带干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs)是牙周再生理想的细胞来源。已知骨形态发生蛋白4(Bone morphogenetic protein-4,BMP4)具有维持牙周干细胞干性和多向分化潜能的潜能。然而,骨形态发生蛋白4在诱导牙周干细胞向肌腱/韧带方向分化上的功能犹未可知。研究方法:1.本研究采用酶消化法体外培养h PDLSCs。细胞的干性检测:反转录PCR检测干性指标CD-146、c-Myc、Nanog和Oct-4A,流式细胞术鉴定牙周韧带干细胞标志物STRO-1和CD146的比例。细胞分化能力检测:茜素红染色鉴定成骨分化能力,反转录PCR检测分析细胞韧带/肌腱标记物SCX、Six1、Six2和TNC。2.在体外培养的h PDLSCs中添加rh BMP4蛋白、BMP4过表达质粒或rh Noggin蛋白,接着Real-time PCR检测过表达或抑制BMP4信号通路对h PDLSCs成骨分化转录因子Runx2以及肌腱发育的标志基因Tenascin C(TNC)、Collagen 1α1(COL1α1)和Collagen 1α2(COL1α2)转录水平的变化,Western Blot检测其Runx2和TNC的变化。3.随后通过对肌腱特异性转录因子Scleraxis(SCX)mRNA和蛋白质表达水平以及细胞免疫荧光对表达位置的分析,结合搜索STRING数据库中BMP4与SCX的关系,同时利用VISTA软件分析SCX启动子上是否有Smad的结合位点。研究结果:1.h PDLSCs细胞表达干细胞标记基因、腱性标记物以及具有骨向分化潜能:第叁代h PDLSCs中CD146和STRO-1阳性表达百分比分别为65.26%和7.14%。内源性干性基因RT-PCR显示c-MYC和OCT-4A表达量与CD146接近,Nanog荧光较低。h PDLSCs经过叁周成骨诱导液诱导和茜素红染色可见明显的钙化结节。内源性成腱基因的RT-PCR显示其较高表达SCX和Six2,而Six1和TNC表达较弱。2.rh BMP4增加h PDLSCs中Runx2 m RNA和蛋白的表达:rh BMP4(10ng/ml,100ng/ml)对Runx2 m RNA表达的促进呈时间依赖关系,处理后第一天开始出现,第叁天变化明显,而第七天未见明显差异。rh Noggin(BMP4的拮抗剂)(1拮抗剂gg)处理后的第一天对Runx2的表达水平没有明显影响,在第叁天降低了表达水平。更进一步地,蛋白质定量分析实验同样证明了rh BMP4(10ng/ml)处理1天后促进h PDLSCs细胞核内Runx2蛋白水平的表达。3.BMP4促进h PDSCs中TNC的表达并依赖于细胞外基质浓度:rh BMP4(10ng/ml,100 ng/ml)处理之后的第一天,TNC m RNA的表达水平明显增加。同样地,利用lipofectamine 2000包裹BMP4过表达质粒p NL-BMP4-IRES2-EGFP转染h PDLSCs一天后,也在蛋白质水平上增加TNC的表达。Westernblot的分析结果表明,高浓度的CollagenⅤ促进h PDLSC中TNC蛋白的表达水平,BMP4在高浓度的CollagenⅤ(3mg/ml)环境下对TNC的表达水平有明显促进作用。BMP4在低浓度的CollagenⅤ(1.25mg/ml)环境下,对TNC蛋白的表达水平没有促进作用。4.BMP4维持h PDLSCs细胞外基质胶原蛋白基因的表达:反转录PCR的结果显示,在BMP4和Noggin处理后的第一天,Col Iα1和Col Iα2两个基因的表达水平都没有明显变化。但是在处理之后第叁天,对照组,高浓度BMP4组(100 ng/ml)和Noggin组(1 ng/ml),Col Iα1和Col Iα2的表达水平都降低,只有低浓度BMP4(10 ng/ml)组还维持着可见的Col Iα1和Col Iα2维持着基因表达.5.BMP4增加h PDLSCs中SCX m RNA和蛋白的表达:BMP4蛋白对SCX的促进成时间依赖关系,在处理之后第一天开始出现,处理之后第叁天变化明显,处理之后第七天变化不明显。Noggin(1ug/ml)处理之后的第一天对SCX的表达水平没有明显影响,在处理之后的第叁天降低SCX的表达水平。更进一步地,蛋白质的定量分析实验同样证明了BMP4蛋白促进h PDLSCs细胞核内SCX蛋白的表达。6.BMP4蛋白诱导SCX的核向定位:低浓度BMP4(10 ng/ml)处理之后6小时的h PDLSC中,SCX在细胞核内的定位显着增加,细胞质内的定位减少。量化结果显示,对照组中核内SCX蛋白占总量的43%,BMP4使SCX的核内定位提高到72%。7.STRING数据库和VISTA软件分析表明SCX转录起始位点上游存在有Smad和Smad3的结合位点。研究结论:rh BMP4能瞬时地诱导SCX的核内定位,增加肌腱相关基因和/或蛋白SCX,Tenascin C,Collagen 1α1和Collagen1α2的表达,初步揭示BMP4促进h PDLSCs成腱分化的可能机制。(本文来源于《福建医科大学》期刊2015-06-01）
蔡志宇[2]（2015）在《冲击波对人牙周韧带细胞增殖、粘附、迁移、炎症反应、成骨分化及干细胞标志物表达的影响》一文中研究指出目的通过体外细胞学实验观察不同强度、次数冲击波对人牙周韧带细胞增殖、粘附、迁移、炎症因子表达、向成骨细胞分化及表面干细胞标志物表达等生物学行为的影响。方法实验一:(1)根据接受冲击波不同强度、次数将人牙周韧带细胞分为9组,冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,冲击次数采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。采用MTT法及CCK-8法检测细胞在接受冲击处理24、48、72h时的增殖情况。(2)根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。利用细胞附着实验检测细胞在接受冲击后1、2、4及8h时细胞附壁情况;q RT-PCR检测细胞在冲击处理1、2、4、8、24h后ICAM-1 m RNA表达;细胞划痕伤口愈合实验观察细胞受到冲击后72h内细胞迁移情况;采用细胞迁移小室观察冲击处理细胞18h后细胞迁移情况;采用实时监测显微镜下观察细胞120h内运动情况。实验二:根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。q RT-PCR检测细胞接受冲击处理1、2、4、8、24h后IL-6,IL-8,MCP-1,TNF-αm RNA表达。ELISA检测细胞在1、2、4、8、24h后IL-6,IL-8蛋白表达。实验叁:根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。检测冲击处理后3~9d细胞碱性磷酸酶活性。10、16、21d后茜素红染色观察钙结节形成情况。q RT-PCR检测细胞接受冲击处理6、7、8、9、10d后BMP2、ALP、OPG、VEGF、RUNX2、COL1A1的m RNA表达。实验四:根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。检测冲击处理h PDLCs干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105及CD146表达情况。结果实验一:采用强度为0.05、0.10、0.19m J/mm2,次数为100、300及500次的冲击波对h PDLCs细胞增殖无明显影响。强度在0.05~0.19m J/mm2,冲击次数在100~500之间的冲击波可降低h PDLCs的早期附壁能力,但可促进其后期的附壁能力;冲击强度与h PDLCs的附壁能力正相关,而冲击次数的变化对细胞附壁能力影响不明显。冲击波可在初期抑制h PDLCs细胞ICAM-1 m RNA表达,而在后期(8~24hr)可上调h PDLCs细胞ICAM-1 m RNA表达。所有接受冲击处理的细胞其迁移能力均明显增强。实验二:在冲击处理后的早期h PDLCs细胞IL-6,IL-8,MCP-1,TNF-αm RNA表达水平均受到抑制,在冲击处理的后期细胞炎症相关因子m RNA表达水平与接收冲击的次数及强度相关。实验叁:冲击波对h PDLCs成骨方向分化作用不明显。冲击波在观测期的大部分时间点均抑制ALP及OPG m RNA表达;在前期抑制COL1A1 m RNA表达,而在后期促进其表达;同样,冲击波在前期下调VEGF m RNA表达而在后期可上调其表达。冲击波对BMP-2 m RNA表达影响不明显。实验四:冲击波能明显影响h PDLCs细胞表面干细胞标志物CD73、CD90、CD105及CD146的表达水平,其作用与冲击波强度及次数均有明显关系。低次数(100次)、低能量(0.05m J/mm2)冲击波对促进h PDLCs细胞CD73、CD90及CD146表达效果最佳。结论本实验条件下不同强度及次数冲击波对细胞增殖无明显影响。冲击波可降低h PDLCs的早期附壁能力,但可促进其后期的附壁能力;冲击波可促进细胞迁移;冲击波对h PDLCs成骨方向分化作用不明显。低强度、低次数冲击波可明显促进h PDLCs干细胞表面标志物表达。(本文来源于《福建医科大学》期刊2015-04-01）
张玉峰,程祥荣[3]（2006）在《转化生长因子重组腺病毒转染人牙周韧带干细胞的研究》一文中研究指出目的从成体人牙周组织中分离培养牙周韧带干细胞,转染转化生长因子β1(TGFβ1)后,观察其分化情况．方法选取年轻患者的正畸牙,采用组织块培养法得到牙周韧带细胞,再用有限元稀释法进行单细胞克隆,筛选牙周韧带干细胞(PDLSC)。体外构建携带 TGFβ1基因的重组腺病毒,并感染 PDLSC,通过 RT-PCR、免疫组织化学和酶联免疫吸附法检测 TGFβ1在转染细胞内的转录、表达和细胞外分泌情况；同时体外将感染后细胞采用离心管聚集体诱导法进行培养, 在光镜下观察诱导细胞形态学的改变,甲苯胺蓝染色、免疫组化、RT-PCR 等方法检没胶原和糖蛋白的体外表达情况。结果腺病毒介导 TGFβ1基因转染 PDLSC 后可以获得有效的转录及表达。体外离心管聚集体诱导培养3周后,实验组呈白色半透明状,甲苯胺蓝染色显示在外周区域有大量软骨基质成分沉积,组织学显示有较为明显的软骨陷窝．免疫组化及 RT-PCR 检测到Ⅱ型胶原表达,H 型胶原染色呈强阳性。对照组细胞团块逐渐收缩、崩解,组织学检测无软骨陷窝结构,Ⅱ型胶原免疫组化结果阴性．结论腺病毒可安全、有效地转染 PDLSC,TGFβ1基因转染的 PDLSC 可有效表达具有生物活性的 TGFβ1蛋白,在体外能够分化成软骨细胞,为牙周组织工程的应用莫定了实验室基础．(本文来源于《FDI世界口腔医学大会论文摘要汇编》期刊2006-09-01）
张玉峰,程祥荣,施斌,徐东选[4]（2006）在《诱导成体人牙周韧带干细胞向软骨细胞分化的实验研究》一文中研究指出目的从成体人牙周组织中分离培养牙周韧带干细胞,研究其分化为软骨细胞的可行性。方法选取10~15岁的年轻患者因正畸拔除的健康牙齿,刮取根中1/3的牙周膜,采用组织块培养法得到牙周韧带细胞,待细胞达一定量后用有限元稀释法进行单细胞克隆,筛选牙周韧带干细胞(PDLSC),体外采用离心管聚集体诱导法进行软骨化诱导培养,光镜下观察诱导细胞形态学的改变,甲苯胺蓝染色、免疫组化、RT-PCR等方法检测胶原和糖蛋白的体外表达情况。结果体外离心管聚集体诱导培养3周后,实验组呈白色半透明状,甲苯胺蓝染色显示在外周区域有大量软骨基质成分沉积,组织学显示有较为明显的软骨陷窝。免疫组化及RT-PCR检测到Ⅱ型胶原表达,Ⅱ型胶原染色呈强阳性。对照组细胞团块逐渐收缩、崩解,组织学检测无软骨陷窝结构,Ⅱ型胶原免疫组化结果阴性。结论从成体人牙周组织中可分离培养出干细胞,在体外能有效增殖且保持低分化状态,具有作为软骨组织工程种子细胞来源的可能,也为牙周组织工程的应用奠定了实验基础。(本文来源于《中华口腔医学杂志》期刊2006年04期）
刘琼,谢昊[5]（2005）在《牙周韧带细胞与成体干细胞》一文中研究指出成体干细胞是目前研究的热点,人们陆续在多种组织中找出了成体干细胞。但是牙周韧带中成体干细胞及其与牙周韧带细胞的关系,目前尚无统一认识。本文将对该方面的研究现状作一综述。(本文来源于《国外医学.口腔医学分册》期刊2005年06期）
张玉峰,程祥荣,杨雪超,蓝菁[6]（2005）在《成人牙周韧带干细胞分离培养及其定向分化的实验研究》一文中研究指出干细胞(stem cell)是指具有高度增殖和自我更新能力,及多向分化潜能的细胞。在机体发育过程中,可存在处于不同分化等级的干细胞。我们对牙周韧带干细胞进行分离、培养,并进行脂肪化及矿化诱导,为进一步研究提供实验依据。1.资料和方法:选取年轻患者因正畸拔(本文来源于《中华口腔医学杂志》期刊2005年05期）
牙周韧带干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的通过体外细胞学实验观察不同强度、次数冲击波对人牙周韧带细胞增殖、粘附、迁移、炎症因子表达、向成骨细胞分化及表面干细胞标志物表达等生物学行为的影响。方法实验一:(1)根据接受冲击波不同强度、次数将人牙周韧带细胞分为9组,冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,冲击次数采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。采用MTT法及CCK-8法检测细胞在接受冲击处理24、48、72h时的增殖情况。(2)根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。利用细胞附着实验检测细胞在接受冲击后1、2、4及8h时细胞附壁情况;q RT-PCR检测细胞在冲击处理1、2、4、8、24h后ICAM-1 m RNA表达;细胞划痕伤口愈合实验观察细胞受到冲击后72h内细胞迁移情况;采用细胞迁移小室观察冲击处理细胞18h后细胞迁移情况;采用实时监测显微镜下观察细胞120h内运动情况。实验二:根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。q RT-PCR检测细胞接受冲击处理1、2、4、8、24h后IL-6,IL-8,MCP-1,TNF-αm RNA表达。ELISA检测细胞在1、2、4、8、24h后IL-6,IL-8蛋白表达。实验叁:根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。检测冲击处理后3~9d细胞碱性磷酸酶活性。10、16、21d后茜素红染色观察钙结节形成情况。q RT-PCR检测细胞接受冲击处理6、7、8、9、10d后BMP2、ALP、OPG、VEGF、RUNX2、COL1A1的m RNA表达。实验四:根据接受冲击波不同强度、次数将细胞分为5组,冲击次数采用100次时冲击波强度分别采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,冲击波强度采用0.05 m J/mm2时冲击次数分别采用100、300及500次。未接受冲击波处理的细胞作为空白对照组。检测冲击处理h PDLCs干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105及CD146表达情况。结果实验一:采用强度为0.05、0.10、0.19m J/mm2,次数为100、300及500次的冲击波对h PDLCs细胞增殖无明显影响。强度在0.05~0.19m J/mm2,冲击次数在100~500之间的冲击波可降低h PDLCs的早期附壁能力,但可促进其后期的附壁能力;冲击强度与h PDLCs的附壁能力正相关,而冲击次数的变化对细胞附壁能力影响不明显。冲击波可在初期抑制h PDLCs细胞ICAM-1 m RNA表达,而在后期(8~24hr)可上调h PDLCs细胞ICAM-1 m RNA表达。所有接受冲击处理的细胞其迁移能力均明显增强。实验二:在冲击处理后的早期h PDLCs细胞IL-6,IL-8,MCP-1,TNF-αm RNA表达水平均受到抑制,在冲击处理的后期细胞炎症相关因子m RNA表达水平与接收冲击的次数及强度相关。实验叁:冲击波对h PDLCs成骨方向分化作用不明显。冲击波在观测期的大部分时间点均抑制ALP及OPG m RNA表达;在前期抑制COL1A1 m RNA表达,而在后期促进其表达;同样,冲击波在前期下调VEGF m RNA表达而在后期可上调其表达。冲击波对BMP-2 m RNA表达影响不明显。实验四:冲击波能明显影响h PDLCs细胞表面干细胞标志物CD73、CD90、CD105及CD146的表达水平,其作用与冲击波强度及次数均有明显关系。低次数(100次)、低能量(0.05m J/mm2)冲击波对促进h PDLCs细胞CD73、CD90及CD146表达效果最佳。结论本实验条件下不同强度及次数冲击波对细胞增殖无明显影响。冲击波可降低h PDLCs的早期附壁能力,但可促进其后期的附壁能力;冲击波可促进细胞迁移;冲击波对h PDLCs成骨方向分化作用不明显。低强度、低次数冲击波可明显促进h PDLCs干细胞表面标志物表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牙周韧带干细胞论文参考文献
[1].李艺红.rhBMP4促进多潜能的人牙周韧带干细胞成腱分化的实验研究[D].福建医科大学.2015
[2].蔡志宇.冲击波对人牙周韧带细胞增殖、粘附、迁移、炎症反应、成骨分化及干细胞标志物表达的影响[D].福建医科大学.2015
[3].张玉峰,程祥荣.转化生长因子重组腺病毒转染人牙周韧带干细胞的研究[C].FDI世界口腔医学大会论文摘要汇编.2006
[4].张玉峰,程祥荣,施斌,徐东选.诱导成体人牙周韧带干细胞向软骨细胞分化的实验研究[J].中华口腔医学杂志.2006
[5].刘琼,谢昊.牙周韧带细胞与成体干细胞[J].国外医学.口腔医学分册.2005
[6].张玉峰,程祥荣,杨雪超,蓝菁.成人牙周韧带干细胞分离培养及其定向分化的实验研究[J].中华口腔医学杂志.2005