导读:本文包含了哺乳动物细胞表达质粒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:变异链球菌,葡聚糖结合蛋白A,哺乳动物细胞,真核表达
哺乳动物细胞表达质粒论文文献综述
韩琪,刘建国,柴巧学,曲云鹏,管晓燕[1]（2010）在《变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区真核表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达》一文中研究指出目的:构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区的真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1-Gb-pA/GBD,经酶切分析和测序分析鉴定后,通过脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,免疫组化SABC法检测其在细胞中的表达。结果:重组质粒pVAX1-GbpA/GBD经EcoR I和BamH I酶切证实携带1.2kb目的基因片段,经测序分析,目的基因正确插入到预先设计的载体位点处。pVAX1-gbpA/GBD转染的细胞胞质呈褐色染色,pVAX1空载体质粒转染的细胞胞质中无着色。结论:成功构建防龋基因疫苗真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白。(本文来源于《牙体牙髓牙周病学杂志》期刊2010年06期）
郭芬,李月琴,李实骞,罗志文,张欣[2]（2010）在《Prosaposin基因哺乳动物细胞表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立》一文中研究指出目的构建前凋亡因子prosaposin的哺乳动物细胞表达质粒,转染NIH3T3细胞,建立稳定转染prosaposin的细胞系。方法采用PCR方法扩增prosaposin的开放阅读框,酶切后的PCR扩增产物和退火后的人工合成的c-Myc抗原表位标签,共同克隆至pcDNA3.1(+)哺乳动物细胞表达载体中,构建pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒。用脂质体将经过验证、测序的pcDNA-Psap-Myc质粒转染NIH3T3细胞,通过G418筛选建立稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。采用RT-PCR和western blotting方法,检测prosaposin在稳定转染的NIH3T3细胞系中的表达。结果成功构建了pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒,建立了稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。RT-PCR和Western blotting结果表明,构建的稳定细胞系中成功表达prosaposin-Myc融合蛋白。结论Prosaposin哺乳动物细胞表达质粒的成功构建和稳定转染NIH3T3细胞系的建立,为进一步体外研究prosaposin蛋白的功能及其与其他分子间的相互作用奠定了基础。(本文来源于《实用癌症杂志》期刊2010年01期）
蒙学莲,景志忠,房永祥,窦永喜,陈国华[3]（2008）在《猪干扰素-γ哺乳动物细胞重组表达质粒作为疫苗佐剂在小鼠体内的组织分布及环境安全性研究》一文中研究指出重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验,探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒经肌肉途径免疫小鼠,免疫后不同时间迫杀,并取各种组织抽提基因组DNA:一是利用PCR技术检测其在组织内的分布及与细胞基因组发生整合的可能性;二是以PCR技术检测免疫动物现场环境样品,监测pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒中的猪IFN-γ基因、CMV启动子基因和抗性基因是否转移和扩散到环境细菌中。结果表明,免疫24h后在小鼠的各组织中仅注射部位肌肉存在重组表达质粒,免疫5d后仅有1只小鼠注射部位肌肉和血液中存在重组表达质粒,免疫15d后所有动物的各组织中无重组表达质粒存在;同时未发现pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒整合到宿主细胞基因组和转化到环境其他细菌中。因此,认为pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒对动物和环境是安全的。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2008年04期）
陈志欣[4]（2006）在《GFP-亨廷顿蛋白表达质粒的构建、在哺乳动物细胞中的表达及对溶酶体酶的影响》一文中研究指出目的:构建GFP-亨廷顿蛋白表达质粒,观察所构建质粒在哺乳动物细胞中的表达,研究外源性亨廷顿蛋白对细胞溶酶体酶的影响。方法:构建GFP-亨廷顿蛋白表达质粒: pcDNA3-GFP/Htt969-18(代表野生型亨廷顿蛋白N端969个氨基酸,含18个谷氨酰胺)和pcDNA3-GFP/Htt969-100(代表突变型亨廷顿蛋白N端969个氨基酸,含100个谷氨酰胺);采用脂质体转染法转染质粒;应用Western blot、免疫荧光法观察蛋白表达;采用免疫荧光法观察外源性亨廷顿蛋白过表达对细胞溶酶体酶Cathepsin B、D的影响。结果:经限制性内切酶酶切、聚合酶链式反应和测序证明质粒构建成功,并且亨廷顿蛋白表达质粒可以在哺乳动物细胞表达;质粒转染后亨廷顿蛋白过表达可显着增加溶酶体酶Cathepsin B、D水平。结论:外源性亨廷顿蛋白显着增加溶酶体酶Cathepsin B、D水平,提示自噬/溶酶体途径参与了亨廷顿蛋白的加工处理。(本文来源于《苏州大学》期刊2006-05-01）
江渊,古钦民,李瑛,周怀瑜,赵群力[5]（2005）在《含弓形虫复合抗原基因的真核表达质粒在哺乳动物细胞中的表达》一文中研究指出目的研究弓形虫复合抗原真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B在哺乳动物细胞中的表达情况。方法利用脂质体介导的转染技术,将真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B和空载体pcDNA3.1分别转染He-la细胞,400μg/mlG418加压筛选和200μg/mlG418维持筛选,获得稳定转染的Hela细胞。采用SDS-PAGE和West-ern-blot方法对复合基因P30-P22-CTXA2/B的表达产物进行鉴定。结果SDS-PAGE结果显示,重组质粒转染Hela细胞后的表达产物分子质量单位为64ku,Western-blot显示此蛋白条带能被抗P30抗体识别。结论构建的真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B能在哺乳动物细胞中成功表达插入基因所编码的融合蛋白,为进一步动物实验提供了实验依据。(本文来源于《中国寄生虫病防治杂志》期刊2005年04期）
史新昌[6]（2004）在《内源性血管生成抑制剂—Kringle5蛋白在毕赤酵母菌中分泌表达及其哺乳动物细胞分泌表达质粒的构建》一文中研究指出目的：Kringle5(简称K5)蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达、纯化及其质量评价方法研究，以及K5蛋白哺乳动物细胞分泌表达质粒的构建。 方法：首先，用电转化的方法将p819-8αK5质粒转入毕赤酵母菌GS115感受态，通过不同浓度(2mg／ml、4mg／ml和8mg／ml)的G418—YPD平板结合表达量的筛选方法筛选出高效分泌表达K5蛋白的毕赤酵母菌。建立由DEAE离子交换层析和S—100分子筛层析为主体的纯化工艺流程。对纯化的蛋白进行质量评价试验，包括蛋白质的一般性质测定，如分子量、纯度、等电点、含量等以及生物学活性方面的测定，细胞水平：内皮细胞增殖抑制试验、内皮细胞迁移抑制试验；组织水平：鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制试验；整体水平：移植瘤生长抑制试验。其次，通过两步PCR方法按照人的密码子偏爱性合成K5蛋白的DNA序列，克隆至哺乳动物细胞表达载体pDV，并对其生物学活性进行初步研究。 结果：得到了一批具有高效分泌表达K5蛋白能力的毕赤酵母菌株，在诱导茵液上清中，K5蛋白含量在200mg／L以上。初步建立了纯化工艺流程，经纯化后的蛋白纯度在95％以上。测定了K5蛋白的一些理化指标，表观分子量在15％SDS—PAGE胶中表现为17.5KD左右；在等电聚焦电泳中其等电点表现为pH5.2左右。探讨了K5蛋白生物学活性测定方法，细胞水平：在内皮细胞增殖抑制试验中，K5蛋白表现出对内皮细胞增殖有抑制作用；在内皮细胞迁移抑制试验中，表现出对内皮细胞迁移的抑制作用；组织水平：在鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制试验中，表现出对鸡胚绒毛尿囊膜上的微小血管的生成和发育干扰作用；整体水平：在H22鼠源移植瘤生长抑制试(本文来源于《中国药品生物制品检定所》期刊2004-06-01）
苏凌云,吴补领,李福洋,陆群[7]（2004）在《变形链球菌葡聚糖结合蛋白A真核表达质粒pcDNA3.1/GBD在哺乳动物细胞中的表达》一文中研究指出目的 观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法 通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化SABC法检测其在COS_7细胞的表达。结果 pcDAN3 1 GBD质粒转染的细胞质呈棕黄色染色 ,胞核无着色 ,pcDAN3 1空载体转染的细胞质及胞核无着色 ,空白对照组也无着色。结论 质粒pcDAN3 1 GBD转染COS_7后能够在细胞内翻译、表达 ,表达的蛋白质位于细胞质中 ,可与抗GbpA抗体特异性结合 ,具有抗原性 ,可作为基因疫苗(本文来源于《华西口腔医学杂志》期刊2004年01期）
许诚,刘忠荣,王松,孙梅芹,何清[8]（2003）在《干扰素α-8与乙型肝炎病毒-S_2S融合基因真核表达质粒在哺乳动物细胞中的表达》一文中研究指出目的 :构建干扰素 α- 8(IFNα- 8)与乙型肝炎 (HB)病毒 (HBV) - S2 S融合蛋白的真核表达质粒 p VAX1/IFNα- 8- S2 S,作为一种高效能 HB DNA疫苗的备选对象。方法 :以特定引物分别从正常胎肝组织及 HB患者血清中扩增出 IFNα- 8与 HBV- S2 S基因片段 ,克隆至相应载体。再以连接引物扩增出 IFNα- 8与 HBV- S2 S融合基因片段 ,并将该基因片段克隆至真核细胞表达载体 p VAX1,然后扩增目的基因测序 ,确认无误后 ,转染 SP2 / 0细胞 ,并分别检测目的基因 m RNA,了解其短暂表达与稳定表达情况。结果 :所构建的质粒经过酶切电泳后证实分子量与预期相符 ,目的片断 IFNα- 8- S2 S经测序证实 IFNα- 8序列与 Genebank公布的序列相符。HBV- S2 S存在 3处叁联密码子的无义突变。 2处有义突变是 70 3- 70 5位 CCG突变为 CAG,799～ 80 1位 ATA突变为 ATG。表达质粒转染 SP2 / 0细胞后 ,均检测到短暂表达及稳定表达之目的基因 m RNA。结论 :经分析表明 ,HBV- S2 S片段存在的两处有义突变并不影响该蛋白的空间构象及关键抗原决定簇的性质。可以认为本研究完成了真核表达质粒 p VAX1/ IFNα- 8- S2 S的构建 ,并成功检测到目的基因的表达 ,为制造高效能 HB DNA疫苗提供了新的备选对象。(本文来源于《中国中西医结合消化杂志》期刊2003年04期）
郭丽宏,刘天佳,杨锦波[9]（2000）在《变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3/pacA和pcDNA3/pacP在哺乳动物细胞中的表达》一文中研究指出目的 :研究变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP在哺乳动物细胞中的转录及表达情况。方法 :利用脂质体介导的转染技术 ,将真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP分别转染COS 7细胞 ,1mg·ml 1 G418加压筛选获取稳定转染的COS 7细胞之后 ,采用RT PCR法、LSAB法、流式细胞术及Western印迹法 ,对真核表达质粒中插入基因pac A和pac P的转录及表达产物进行检测。结果 :真核表达质粒pcDNA3 pacA及pcDNA3 pacP的插入基因在导入哺乳动物细胞后具有转录和翻译活性 ,表达的蛋白质产物可位于胞内、胞膜及胞外。结论 :构建的真核表达质粒pcDNA3 pacA和pcDNA3 pacP能在哺乳动物细胞中表达插入基因所编码的蛋白质 ,为进一步的动物实验提供了实验依据。(本文来源于《华西口腔医学杂志》期刊2000年06期）
赵建阳,陈静娴,陈强,吴纬,刘爱民[10]（1998）在《hGM-CSF基因在哺乳动物细胞中稳定转染表达质粒的构建和鉴定》一文中研究指出目的：获得具有天然糖基化结构的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）。方法：采用含ｓＲα启动子和新霉素抗性基因的真核细胞表达载体ｐＭＥｎｅｏ，接上ＸｈｏＩ接头，与ＸｈｏＩ酶切ｈＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ片段连接，构建了可在哺乳动物细胞中稳定表达的ｐＭＥｎｅｏ－ｈＧＭ－ＣＳＦ质粒。结果：２２个ｐＭＥｎｅｏ重构载体克隆中，８个含有ｈＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ片段，酶切鉴定插入方向为５个顺式，１个顺式串珠，２个反式。结论：将上述各式以ＤＥＡＥ法转染ＣＯＳ细胞，瞬时表达鉴定，用ＴＦ１细胞ＭＴＴ法测定培养液上清的ｈＧＭ－ＣＳＦ活性，顺式和顺式串珠培养上清活性为１×（１０３～１０４）Ｕ／ｍｌ，反式插入方向培养上清没有活性(本文来源于《中国输血杂志》期刊1998年03期）
哺乳动物细胞表达质粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建前凋亡因子prosaposin的哺乳动物细胞表达质粒,转染NIH3T3细胞,建立稳定转染prosaposin的细胞系。方法采用PCR方法扩增prosaposin的开放阅读框,酶切后的PCR扩增产物和退火后的人工合成的c-Myc抗原表位标签,共同克隆至pcDNA3.1(+)哺乳动物细胞表达载体中,构建pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒。用脂质体将经过验证、测序的pcDNA-Psap-Myc质粒转染NIH3T3细胞,通过G418筛选建立稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。采用RT-PCR和western blotting方法,检测prosaposin在稳定转染的NIH3T3细胞系中的表达。结果成功构建了pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒,建立了稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。RT-PCR和Western blotting结果表明,构建的稳定细胞系中成功表达prosaposin-Myc融合蛋白。结论Prosaposin哺乳动物细胞表达质粒的成功构建和稳定转染NIH3T3细胞系的建立,为进一步体外研究prosaposin蛋白的功能及其与其他分子间的相互作用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
哺乳动物细胞表达质粒论文参考文献
[1].韩琪,刘建国,柴巧学,曲云鹏,管晓燕.变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区真核表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达[J].牙体牙髓牙周病学杂志.2010
[2].郭芬,李月琴,李实骞,罗志文,张欣.Prosaposin基因哺乳动物细胞表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立[J].实用癌症杂志.2010
[3].蒙学莲,景志忠,房永祥,窦永喜,陈国华.猪干扰素-γ哺乳动物细胞重组表达质粒作为疫苗佐剂在小鼠体内的组织分布及环境安全性研究[J].中国预防兽医学报.2008
[4].陈志欣.GFP-亨廷顿蛋白表达质粒的构建、在哺乳动物细胞中的表达及对溶酶体酶的影响[D].苏州大学.2006
[5].江渊,古钦民,李瑛,周怀瑜,赵群力.含弓形虫复合抗原基因的真核表达质粒在哺乳动物细胞中的表达[J].中国寄生虫病防治杂志.2005
[6].史新昌.内源性血管生成抑制剂—Kringle5蛋白在毕赤酵母菌中分泌表达及其哺乳动物细胞分泌表达质粒的构建[D].中国药品生物制品检定所.2004
[7].苏凌云,吴补领,李福洋,陆群.变形链球菌葡聚糖结合蛋白A真核表达质粒pcDNA3.1/GBD在哺乳动物细胞中的表达[J].华西口腔医学杂志.2004
[8].许诚,刘忠荣,王松,孙梅芹,何清.干扰素α-8与乙型肝炎病毒-S_2S融合基因真核表达质粒在哺乳动物细胞中的表达[J].中国中西医结合消化杂志.2003
[9].郭丽宏,刘天佳,杨锦波.变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3/pacA和pcDNA3/pacP在哺乳动物细胞中的表达[J].华西口腔医学杂志.2000
[10].赵建阳,陈静娴,陈强,吴纬,刘爱民.hGM-CSF基因在哺乳动物细胞中稳定转染表达质粒的构建和鉴定[J].中国输血杂志.1998