酵母双杂交系统筛选番茄SlMPK1互作蛋白

酵母双杂交系统筛选番茄SlMPK1互作蛋白

论文摘要

促分裂源活化蛋白激酶(MAPK)在植物生长发育及响应环境胁迫过程中发挥着重要作用。采用酵母双杂交技术,用番茄SlMPK1作为诱饵,从番茄cDNA文库中筛选能与SlMPK1相互作用的蛋白。结果表明:SlMPK1全长序列成功构建至pGBKT7载体,获得诱饵质粒pGBKT7-K1,其对酵母细胞无毒性,且20 mmol·L-1 3-AT能有效抑制其自激活活性。将pGBKT7-K1与含pGADT7-cDNA文库的质粒共转入Y2H Gold酵母中,对阳性克隆进行鉴定,共筛选到155种候选蛋白可能与SlMPK1相互作用,其中SlSPRH1和SlMKK4是已知能与SlMPK1相互作用的蛋白。分析显示,这些蛋白主要参与蛋白折叠、胁迫响应等生物学过程。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 诱饵蛋白表达载体构建
  •   1.3 诱饵蛋白毒性及载体自激活检测
  •   1.4 抑制自激活的3-AT浓度筛选
  •   1.5 cDNA文库筛选互作蛋白
  •   1.6 阳性菌落测序分析
  •   1.7 基因功能聚类(GO)分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 SlMPK1的克隆及诱饵载体的构建
  •   2.2 pGBKT7-K1的毒性检测
  •   2.3 pGBKT7-K1的自激活鉴定
  •   2.4 筛选番茄cDNA文库中与SlMPK1互作的蛋白
  •   2.5 阳性克隆序列分析
  • 3 小结与讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 武媛,何洁,臧栋楠,张吉,杨帆,朱晓红,丁海东

    关键词: 番茄,蛋白激酶,酵母双杂交,互作蛋白

    来源: 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 园艺

    单位: 扬州大学生物科学与技术学院

    基金: 国家自然科学基金资助项目(31101092),江苏省自然科学基金资助项目(BK20191437),扬州大学大学生科创基金项目(X20170816,X20180673,X20180674)

    分类号: S641.2

    DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2019.06.004

    页码: 24-29

    总页数: 6

    文件大小: 1956K

    下载量: 326

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