陈静波[1]2003年在《牛妊娠期黄体形态结构及卵母细胞体外胚胎生产的研究》文中研究表明本研究首次采用已知妊娠天数的母牛卵巢样品，揭示了母牛妊娠期不同阶段卵巢卵母细胞体外生产胚胎的效果，并对不同妊娠时间d14～d280母牛卵巢和黄体的形态和母牛卵巢黄体的显微组织学及超微结构进行了研究。 158头春季出生的海福特与荷斯坦杂交的青年母牛，用CIDR做同期发情处理后，发情的母牛随机实施人工授精或胚胎移植，然后分批对母牛定期屠宰，剖腹摘取每头母牛的子宫和卵巢，记录定时屠宰母牛的妊娠天数、妊娠状态、卵巢状态和黄体侧。对卵巢大、中、小卵泡的分布等多项指标进行了观测；从妊娠正常的母牛采集黄体样品进行形态学观察与测定，采用常规方法观察测定母牛妊娠不同阶段两侧卵巢黄体的发育变化情况，包括外部形态、黄体腔的大小、内部血管、间质的发育和分布；测定卵巢的长、宽、厚、重量、黄体色泽、黄体重量和体积(d0～d90)；黄体的长和宽、黄体的血管发育等情况。同时利用妊娠母牛不同阶段卵巢获得的卵母细胞，采用成熟的SOF培养系统和细胞体外培养技术，进行母牛妊娠期不同阶段(d14～d256)卵巢卵母细胞体外生产胚胎的试验，观察卵子体外培养的受精分裂率和囊胚率等结果，评定妊娠期卵巢卵母细胞生产胚胎的能力。用Excel软件建立数据库，用SPSS 11统计分析程序统计计算不同妊娠时间数据指标的平均数，标准差和方差，并进行显着性检验和相关与回归分析。 从母牛妊娠期不同阶段，黄体解剖和形态学及卵巢卵泡分布研究得出如下结论：1、妊娠母牛卵巢的长宽厚增加至d26之后基本恒定，长度仍有缓慢增加的趋势，厚度减少，高度稳定。2、妊娠母牛的卵巢重量在妊娠3个月以后下降，黄体的重量也略有下降；黄体占卵巢的比率妊娠初期和末期相对较低，其他时期基本恒定，母牛妊娠期间卵巢重量的下降主要是黄体以外的其它组织的减少。3、空怀母牛或妊娠母牛的黄体中部在2个月之前有液体腔是正常情况，妊娠母牛的黄体腔直径小，空怀牛的直径大，妊娠2个月以后逐渐消失，被白色结缔组织填充。4、妊娠母牛黄体的颜色，内部和外部的血管网系统、内部的间质组织和表面突起在妊娠的前中后期表现不同，有可能根据黄体的形态学大致推断卵巢所处的妊娠时期，辅助采用黄体显微和超微结构特征判断更准确。5、妊娠母牛的卵巢表面在整个妊娠期有较稳定的卵泡分布，每个卵巢平均有20个2mm以上的卵泡，小卵泡占卵泡数的86.62％，是卵母细胞的主要来源，为体外生产胚胎提供了丰富的卵源。6．妊娠牛卵巢普遍存在8mm以上的大卵泡，占试验牛总数的牛妊娠期黄体形态结构及卵母细胞体外胚胎生产的研究92.31%(192/208)。妊娠3个月后，大卵泡数量有下降趋势，卵泡直径变小，大卵泡数与小卵泡数呈负相关(P<0 .05)。妊娠母牛卵巢的中小卵泡数与牛妊娠天数呈显着相关(P<0.05)。中小卵泡数与卵母细胞数，卵母细胞的级别和体外受精的各项指标呈强相关(P<0.01)。母牛卵巢状态和繁殖生理状态对卵巢卵泡数量和分布无影响(P>0.05)。 从母牛妊娠期不同阶段卵巢黄体显微和超微结构研究得出如下结论:l、LLC在妊娠前期即有空泡，并随妊娠日数增加逐渐增多，妊娠4个月时多数LLC有空泡结构，妊娠8个月时，空泡又多又大。2、LLC凋亡在d35发生，此后各采样期都有发生。妊娠d189明显增多，黄体细胞明显退化，从母牛黄体显微组织学变化看，在细胞形态结构、数量、直径等几方面均表明从妊娠6个月开始黄体组织及细胞呈现明显的退性行变化。3、牛妊娠不同时期黄体超微结构研究结果表明，在妊娠d35前黄体细胞的细胞器处于发育增殖阶段，母牛妊娠2~5月黄体细胞结构完善，为黄体细胞功能旺盛时期，妊娠6个月黄体细胞开始退化，妊娠7一8月时，各类细胞器明显进入退行性变化时期。 利用妊娠期不同时间卵巢卵母细胞体外生产胚胎的结果证明:1、在良好的饲养管理和环境条件下，妊娠各期母牛的卵巢卵母细胞都可用于胚胎生产，平均可用胚率达到30%，与空怀牛组和对照牛组无差异(P>0 .05)。2、母牛妊娠期不同时间卵母细胞的数量及级别的分布情况无显着差异(P>0 .05)。妊娠母牛繁殖状态、生理状态、黄体侧对体外生产胚胎的效果无影响(P>0 .05)。3、整个妊娠期仅有一个大卵泡存在对妊娠不同天的体外生产胚胎的结果无显着影响(P>0.05)。但是，随母牛个体大卵泡数的增加，可用卵母细胞的数量呈下降的趋势(P<0.05)。大卵泡数超过1个以上时，体外生产胚胎的各项指标下降。黄体侧卵巢与对侧卵巢体外生产胚胎的效果无差异(P>0.05)。 本研究的结果表明，母牛卵巢黄体的形态、显微结构和超微结构在妊娠期呈规律性变化，各期都有特征。妊娠6个月后母牛黄体细胞明显表现退行性变化。妊娠不同时间母牛的卵母细胞可获得正常的体外生产胚胎结果。
王荣祥[2]2009年在《马卵母细胞ICSI后体外发育能力及妊娠后期卵巢黄体组织超微结构的研究》文中研究表明马胚胎移植及卵母细胞胞质内精子注射技术在国外均已取得突破性进展,我国为养马大国,肉马、乳马和赛马业市场虽然广阔,但良种马数量缺口很大,利用新繁殖技术如胚胎移植、体外受精是解决马繁殖率低和加速品种改良的有效途径。本试验从屠宰场采集马卵巢,系统研究妊娠和空怀卵巢,以及不同卵巢状态对卵巢重量、形态和卵泡分布的影响。用采集到的卵母细胞为材料,评估卵丘形态(松散型或致密型)、成熟培养体系(TCM199或NCSU23)、体外成熟时间(34h或38h)以及离子霉素结合6-DMAP激活对马卵母细胞胞质内精子注射(ICSI)后体外发育能力的影响。本试验还对妊娠后期(7月～9月)马卵巢黄体的超微结构进行了研究。非繁殖季节马卵巢形态及卵泡分布的研究结果表明:(1)妊娠和空怀马卵巢的重量和形态,以及大、中、小卵泡数均无显着差异(P>0.05);(2)卵巢状态对马卵巢重量无显着影响(P>0.05);(3)有1个大卵泡的马卵巢的中卵泡数显着高于无大卵泡卵巢(P<0.05)。大卵泡数与小卵泡数呈负线性相关(r=-0.255,P=0.000);(4)马非繁殖季节有20mm以上大卵泡的卵巢占所有卵巢数的19.02%,平均每个卵巢共有4.65个卵泡,大、中、小卵泡分别占卵巢总卵泡数的9.00%、24.18%和66.82%。马妊娠后期黄体组织超微结构的研究结果表明:(1)大黄体细胞呈群状或索状分布,细胞多呈圆形或椭圆形,体积较大。小黄体细胞呈梭形或多边形,体积小;(2)细胞间质存在丰富的胶原纤维。可观察到部分分泌颗粒,脂滴较多,线粒体、内质网、溶酶体较少;(3)黄体细胞质内多数细胞器崩解,黄体细胞呈现明显的退化,孕激素水平的维持不再依靠黄体;(4)在3000×的五个视野内,LLC占黄体细胞的26.06%,SLC占黄体细胞的73.94%;(5)LLC的细胞长径平均为6.45μm,短径平均为3.29μm,SLC的细胞长径平均为3.67μm,短径平均为1.67μm;(6)LLC的核长径平均为5.06μm,核短径平均为2.64μm,SLC的核长径平均为3.51μm,核短径平均为1.59μm。马卵母细胞ICSI后体外发育能力的研究结果表明:(1)马松散型卵母细胞成熟率显着高于致密型卵母细胞(P<0.05,分别为61.09%和41.24%),但ICSI后36h分裂率无显着差异(P>0.05,分别为47.34%和44.92%);(2)两种培养体系对马松散型或致密型卵母细胞成熟率以及ICSI后36h分裂率无显着影响(P>0.05),但相同成熟体系培养松散型卵母细胞成熟率均显着高于致密型卵母细胞(P<0.05),然而ICSI后36h分裂率差异不显着(P>0.05);(3)卵母细胞38h成熟率显着高于34h成熟率(P<0.05),分别为44.43%～68.87%和34.52%～58.90%),松散型卵母细胞在TCM199体系中成熟34h进行ICSI后36h分裂率显着高于松散型或致密型卵母细胞在NCSU23体系中成熟38h后进行ICSI的分裂率(P<0.05);(4)ICSI后用离子霉素结合6-DMAP激活对马卵母细胞ICSI后36h分裂无显着影响(P>0.05)。
参考文献：
[1]. 牛妊娠期黄体形态结构及卵母细胞体外胚胎生产的研究[D]. 陈静波. 西北农林科技大学. 2003
[2]. 马卵母细胞ICSI后体外发育能力及妊娠后期卵巢黄体组织超微结构的研究[D]. 王荣祥. 新疆农业大学. 2009
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