EV713D聚合酶基因体外重组质粒的构建、表达及活性检测

论文摘要

目的构建编码肠道病毒71型（EV71）3D聚合酶基因的重组质粒,表达和纯化3D聚合酶并检测其活性。方法将编码3D聚合酶的基因片段克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,重组质粒转化入大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析、TEV酶酶切、Ni-NTA柱亲和纯化后获得高纯度3D聚合酶蛋白,放射测量法是体外酶活力测定方法中较常见的一种方法,本研究通过测定插入poly（U） RNA放射性标志UMP的量确定3D聚合酶的活性。结果经酶切、PCR、测序鉴定pGEX-4T-3D重组质粒构建成功,3D聚合酶基因片段大小为1 386 bp。与未诱导相比,经IPTG诱导后带有GST标签的3D聚合酶成功表达,表达产物的相对分子质量约为79×103,TEV酶酶切掉GST标签后的相对分子质量约为55×103。纯化的3D聚合酶经体外延伸反应后跑变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳得知,3D聚合酶溶解液DMSO组相比于3D聚合酶强抑制剂EDTA组,在DMSO组中,可以观察到强电泳条带,表明放射性同位素标志程度强,表明反应速率快,即3D聚合酶酶活较好。结论构建了EV71 3D聚合酶基因重组质粒,其表达产物3D聚合酶为以EV71 3D聚合酶为靶点的抗EV71药物筛选奠定基础。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李妮,王海杰,吕诗韵,杜沧浩,孙鸽,魏艳红,胡康洪

关键词: 肠道病毒型,聚合酶,重组质粒构建,蛋白纯化,酶活检测

来源: 中国病原生物学杂志 2019年09期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 湖北工业大学湖北省工业微生物重点实验室中德生物医学中心

基金: 细胞调控与分子药物",111",引智基地青年学者国际合作研究基金资助项目(No.XBTK-2018005),湖北工业大学博士科研启动项目(No.BSQD2015004)

分类号: R373;Q78

DOI: 10.13350/j.cjpb.190903

页码: 1001-1004+1009

总页数: 5

文件大小: 597K

下载量: 107

相关论文文献

• [1].鼠疫菌聚合酶螺旋反应等温扩增方法的建立[J]. 中国国境卫生检疫杂志 2020(02)
• [2].DNA聚合酶和DNA连接酶的辨析[J]. 生物学教学 2009(09)
• [3].流感病毒聚合酶结构功能及其作为抗病毒靶点研究进展[J]. 中国新药杂志 2014(12)
• [4].甲型流感病毒聚合酶作为蝙蝠细胞适应突变位点的研究[J]. 中国畜牧兽医 2014(09)
• [5].口蹄疫病毒3D聚合酶多克隆抗体的制备与特性分析[J]. 中国人兽共患病学报 2010(01)
• [6].重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定[J]. 河南大学学报(自然科学版) 2019(03)
• [7].优化反应体系提升Phanta DNA聚合酶对非处理标本的检测性能[J]. 生物加工过程 2018(02)
• [8].重组酶聚合酶等温扩增技术在动物源性成分鉴定中的应用[J]. 中国农学通报 2020(30)
• [9].食品中空肠弯曲菌荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立[J]. 现代食品科技 2020(05)
• [10].尿液荧光定量聚合酶链法测定人巨细胞病毒的临床价值[J]. 中国当代医药 2014(34)
• [11].诺如病毒聚合酶基因的扩增及其遗传变异研究[J]. 中国病原生物学杂志 2011(10)
• [12].HBV聚合酶研究进展[J]. 肝脏 2008(03)
• [13].重组酶聚合酶扩增技术研究进展[J]. 病毒学报 2020(03)
• [14].重组酶聚合酶扩增技术检测霍乱弧菌[J]. 质量安全与检验检测 2020(05)
• [15].跨损伤合成途径中真核生物DNA聚合酶δ转换机制的研究进展[J]. 生物学杂志 2018(03)
• [16].实时定量聚合酶螺旋反应定量检测变形链球菌方法的建立[J]. 生物技术通讯 2017(04)
• [17].人源DNA聚合酶δ研究进展[J]. 生物学杂志 2013(04)
• [18].乙型肝炎病毒重组酶聚合酶等温扩增闭管可视化检测方法及装置[J]. 医学研究生学报 2020(05)
• [19].塞内加尔病毒特异性重组分析揭示了塞尼卡病毒聚合酶保真性与病毒重组发生的相关性[J]. 中国预防兽医学报 2019(05)
• [20].DNA聚合酶ε的生物学功能研究进展[J]. 国际检验医学杂志 2019(22)
• [21].华中科技大学:首个不需引物的DNA聚合酶[J]. 化工新型材料 2017(07)
• [22].DNA聚合酶含量对目的基因扩增的影响[J]. 陕西医学杂志 2013(02)
• [23].DNA聚合酶γ基因突变研究进展[J]. 医学综述 2012(03)
• [24].北京市健康人群DNA聚合酶δ1的增龄性变化[J]. 中国老年学杂志 2011(03)
• [25].抗KOD聚合酶单克隆抗体的制备(英文)[J]. 化学与生物工程 2010(03)
• [26].细菌RNA聚合酶抑制剂的分子生物学机制研究进展[J]. 浙江大学学报(医学版) 2019(01)
• [27].DNA聚合酶在维持基因组稳定性中的多重功能及其相关疾病[J]. 生命科学 2014(11)
• [28].Taq DNA聚合酶的制备和纯化[J]. 湖南农业科学 2013(13)
• [29].RNA聚合酶——抗流感病毒的新靶点[J]. 生命的化学 2012(01)
• [30].重组Taq DNA聚合酶的表达和纯化鉴定[J]. 江西农业学报 2012(05)

标签：肠道病毒型论文;  聚合酶论文;  重组质粒构建论文;  蛋白纯化论文;  酶活检测论文;