导读:本文包含了原核表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,蛋白,李斯特,基因,新西兰,正交,可溶性。
原核表达载体论文文献综述
陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰[1]（2019）在《山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化》一文中研究指出山葡萄苯丙胺酸解氨酶(PAL)是苯丙烷途径的关键酶,在果皮着色中能够调控花色苷合成途径。构建PAL基因原核表达重组质粒pET28a-PAL,并对重组蛋白表达条件进行优化,以山葡萄DNA扩增PAL并连接到p MD18-T,筛选得到阳性克隆后连接到pET28a原核表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21后经不同浓度的IPTG、不同诱导温度、不同诱导时间处理,通过DPS设计正交试验优化重组蛋白的表达条件,并将重组蛋白纯化。结果显示,正交试验不同处理下的蛋白表达差异显着(P<0.05),诱导因素的影响程度从强到弱分别为IPTG浓度、温度和时间。IPTG诱导浓度对其影响最显着(P=0.015<0.05),且IPTG浓度为0.6mmol·L-1,诱导温度为22℃,诱导时间为5h时,诱导重组蛋白PAL的效果最佳。成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达,为探究PAL蛋白的表达提供参考。(本文来源于《安徽农业大学学报》期刊2019年05期）
李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜[2]（2019）在《人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用》一文中研究指出目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2019年11期）
陈桂华,李翔辉,郁川[3]（2019）在《TAT-Apoptin基因原核表达载体的构建及其表达鉴定》一文中研究指出为得到TAT-Apoptin融合蛋白,以pMD-19T-Apoptin为模板PCR扩增出TATApoptin基因,构建重组载体pET-32a-TAT-Apoptin,并对TAT-Apoptin蛋白进行表达。PCR和测序表明,成功构建重组载体pET-32a-TAT-Apoptin,进一步对其进行蛋白表达,发现该蛋白能与Apoptin多抗发生特异性结合。以上结果证明,TAT-Apoptin基因原核表达载体构建成功,并能在Rosetta中进行分泌性表达。(本文来源于《现代农业研究》期刊2019年11期）
陈月桃,陈谋通,吴清平,张菊梅,程健恒[4]（2019）在《单核细胞增生李斯特菌ladR基因在两种原核表达载体中的克隆表达及纯化分析》一文中研究指出利用特异性引物扩增ladR基因序列,分别构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)ladR基因的两种原核表达载体,即含有6个His标签的pET-28a-ladR表达载体和含有GST标签的pGEX-4T-ladR表达载体。通过诱导时间、温度和浓度优化两种表达载体的蛋白表达条件,比较分析两种表达载体的LadR蛋白可溶性表达水平,利用Western-Blot进行LadR蛋白表达验证。本研究成功构建了pET-28a-ladR和pGEX-4T-ladR表达载体,在大肠杆菌BL21中分别表达出His-LadR和GST-LadR融合蛋白。通过凝血酶切除GST标签,纯化后得到LadR蛋白。在最佳表达条件IPTG为0.5 mmol/L,22℃诱导过夜下,pGEX-4T-ladR表达载体中LadR的表达量比pET-28a-ladR(IPTG为1.0 mmol/L,22℃诱导过夜)中His-LadR蛋白的表达量高4.48倍。本研究结果表明,GST标签有利于ladR基因的可溶性表达,为后续的LadR蛋白的功能分析和转录调控机理研究奠定了良好基础。(本文来源于《现代食品科技》期刊2019年10期）
加尔肯,库来汗·巴依多拉,冉多良,艾海提·亚森,布力布力汗[5]（2019）在《马疱疹病毒1型ORF30基因原核表达载体的构建》一文中研究指出马疱疹病毒1型(Equid herpesvirus 1, EHV-1)是引起孕马流产的主要病原体之一,也与死胎、新生幼驹死亡、青年马鼻肺炎以及一种名为马疱疹病毒性脑脊髓病(Equine herpesvirus myeloencephalopathy,EHM)的神经系统疾病有关。近些年来,EHM出现的频率越来越高,对养马业和赛马业的危害很大。最新研究结果显示,神经致病性毒株与编码病毒DNA聚合酶催化亚基的ORF30基因单核苷酸点突变有着很高的相关性。为了获得马疱疹病毒1型DNA聚合酶,并制备DNA聚合酶的多克隆抗体,本研究以EHV-1-XJ2015毒株基因组DNA为模板,扩增ORF30基因编码区,并连接于pMD19-T载体上,用BamHI和HindIII双酶切后,将酶切产物插入表达pET-28a(+)中,转化入大肠杆菌DH5感受态细胞,构建ORF30基因的原核表达载体pET-28a(+)-ORF30。通过酶切、PCR扩增和测序等方法对阳性重组质粒进行了鉴定。结果表明,构建的重组质粒pET-28a(+)-ORF30经BamhⅠ和HindⅢ双酶切后,经1%琼脂糖凝胶电泳,电泳结果与预期相符,表明目的片段成功插入载体pET28a(+)中。通过采用特异性引物对重组质粒pET28a (+)-ORF30进行PCR鉴定,产物经1%琼脂糖凝胶电泳观察,得到一条大小约1074bp的清晰条带,与目的基因大小相符,表明重组质粒pET28a(+)-ORF30构建成功。本研究为进一步探讨马疱疹病毒1型ORF30基因遗传变异对DNA聚合酶功能的影响奠定了基础。(本文来源于《草食家畜》期刊2019年04期）
邓小亮,马文康,付欣,洪玮,谭茵[6]（2019）在《新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达载体构建及在E.coli表达》一文中研究指出为了研究新西兰兔SOD1蛋白分子的结构与功能,设计了一对特异性引物,通过RT-PCR方法克隆得到了该基因编码序列。将该编码序列克隆到分泌型原核表达载体PET-25b,经菌落PCR、双酶切和测序鉴定证实成功构建了重组表达载体。将重组质粒转化大肠杆菌表达菌株E.coli BL21(de3) PlysS,建立了分泌型原核表达系统。IPTG诱导培养重组菌后收集样品检测,经SDS-PAGE、Western blot鉴定,证实在培养物上清中检测到了SOD1蛋白的表达。至此,成功建立了新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达系统,实现了蛋白的可溶表达,为进一步研究该蛋白的结构与功能打下了基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年08期）
李向茸,马瑞仙,李倩,王兴陇,李生军[7]（2019）在《人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达》一文中研究指出目的构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A_(600nm)值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性。结果重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A(登录号:BC021277.2)的核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为100%。重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A_(600nm)值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A_(600nm)值为0.6～0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达。结论成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年07期）
童文艳,胡孟可,徐林娜,乔慧聪,李芬[8]（2019）在《烟草NtTkr尾部T_(1084)缺失和替换突变原核表达载体的构建及诱导表达》一文中研究指出已知烟草驱动家族新成员NtTkr尾部第3个卷曲螺旋(Coiled-coil, CC3)第1 084位苏氨酸(T_(1084))对靶蛋白的结合至关重要,通过对NtTkr尾部的酵母双杂交筛选得到多个与Ntkr互作的候选蛋白。为确定T_(1084)缺失(T_(1084d))或替换(T1084A)突变对NtTkr与这些候选蛋白体外互作的重要性,首先以pBI121-NtTkr为模板,通过重迭延伸PCR扩增得到烟草NtTkr尾部T_(1084d)、T1084A片段并将其克隆入质粒pUC19,经蓝白斑筛选、SmaⅠ-BamHⅠ双酶切鉴定后送去测序,获得正确的T_(1084)缺失和替换的NtTkr尾部;然后将重组的pUC19-T_(1084d)、pUC19-T1084A与pMXB10进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切,回收目的片段和载体片段并连接,连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选得到重组子,进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切鉴定,最终成功构建pMXB10-NtTkr-T1084A和pMXB10-NtTkr-T_(1084d)原核表达载体;最后将原核表达载体pMXB10-T_(1084d)和pMXB10-T1084A转入BL21(DE3)中,分别经0.05,0.06 mmol/L IPTG浓度诱导,12%SDS-PAGE电泳检测蛋白质表达情况,结果证明获得了NtTkr-T_(1084d)-1317和NtTkr-T1084A-1320的成功表达,且IPTG浓度大于0.06 mmol/L时,均可高效表达约77 ku的NtTkr-T1084A-1320和76.2 ku的NtTkr-T_(1084d)-1317蛋白量。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年03期）
王德利,杨华,汤海峰,王宇石[9]（2019）在《Annexin A2原核表达载体的构建及表达纯化》一文中研究指出在真核生物中,存在一类由钙离子介导的的膜磷脂结合蛋白——膜联蛋白Annexin家族,酵母和原核生物中未发现存在。Annexin最早是在劳什肉瘤病毒转化的鸡胚细胞中发现的。已发现的Annexin家族成员归为五类:A类为脊椎动物膜联蛋白;无脊椎动物膜联蛋白属于B类;真菌和部分单细胞真核生物被归为C类;D类为植物膜联蛋白;原核生物的膜联蛋白家族属于E类;另外还有40余种膜联蛋白仍待归类~([1])。现已鉴定出人体内12种膜联蛋白家族成员(Annexin A1-A11,A13),广泛分布于胎盘滋养细胞、内皮细胞、巨噬细胞、肿瘤(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2019年06期）
周婷婷,张景洲[10]（2019）在《金黄色葡萄球菌SrtA Δ N59基因的克隆及原核表达载体构建》一文中研究指出金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是一种人畜共患的病原菌,主要引起败血症、肺炎、脑膜炎、心内膜炎及肠炎等细菌感染性疾病~([1,2])。SA对环境的适应性较强,对临床应用的抗生素易产生耐药性~([3])。在临床中可供选择的药物种类不多,通过基因水平分析其耐药性,寻找抗菌靶点将成为治疗SA引起特异性感染的一条重要途径。转肽酶A(Sortase A,SrtA)是金黄色葡萄球菌管家基因,在金黄色葡萄球菌致病过程中发挥着关键性作(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2019年04期）
原核表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原核表达载体论文参考文献
[1].陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰.山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化[J].安徽农业大学学报.2019
[2].李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜.人IgEFc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用[J].中国皮肤性病学杂志.2019
[3].陈桂华,李翔辉,郁川.TAT-Apoptin基因原核表达载体的构建及其表达鉴定[J].现代农业研究.2019
[4].陈月桃,陈谋通,吴清平,张菊梅,程健恒.单核细胞增生李斯特菌ladR基因在两种原核表达载体中的克隆表达及纯化分析[J].现代食品科技.2019
[5].加尔肯,库来汗·巴依多拉,冉多良,艾海提·亚森,布力布力汗.马疱疹病毒1型ORF30基因原核表达载体的构建[J].草食家畜.2019
[6].邓小亮,马文康,付欣,洪玮,谭茵.新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达载体构建及在E.coli表达[J].畜牧与兽医.2019
[7].李向茸,马瑞仙,李倩,王兴陇,李生军.人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达[J].基础医学与临床.2019
[8].童文艳,胡孟可,徐林娜,乔慧聪,李芬.烟草NtTkr尾部T_(1084)缺失和替换突变原核表达载体的构建及诱导表达[J].华北农学报.2019
[9].王德利,杨华,汤海峰,王宇石.AnnexinA2原核表达载体的构建及表达纯化[J].中国实验诊断学.2019
[10].周婷婷,张景洲.金黄色葡萄球菌SrtAΔN59基因的克隆及原核表达载体构建[J].中国实验诊断学.2019
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