基于双球信号放大的大肠杆菌O157:H7免疫HCR检测方法

论文摘要

快速准确的检测大肠杆菌O157:H7对食品安全及食源性疾病的早期诊治具有重要意义,免疫学检测方法具有特异性好、操作简便等优点成为最常见的快速检测方法之一,然而灵敏度低限制了其在食源性致病菌检测中的应用。研究将免疫学与HCR相结合建立一种免疫HCR方法检测大肠杆菌O157:H7,并采用双球策略规避了由于抗体与引发链同时标记在同一乳胶微球上存在相互干扰的问题,降低了抗体（mAb）对引发链的干扰,提高引发效率和检测方法的灵敏度。与基于单球的免疫HCR的灵敏度(2.7×103CFU·mL-1)相比,本方法中基于双球的免疫HCR的灵敏度(4.8×102CFU·mL-1)提高了5.6倍。

论文目录

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

1.2 核酸序列HCR的电泳验证

1.3 HCR核酸序列的荧光验证

1.4 Initiator-LNPs探针的制备

1.5 Initiator-LNPs-mAb探针的制备

1.6 C-Initiator-LNPs-mAb探针的制备

1.7 Initiator实际标记量测定

1.8 Initiator-LNPs探针与Initiator-LNPs-mAb探针引发效率对比

1.9 实验条件优化

1.10 双球免疫HCR放大方法性能评价

1.10.1 基于双球的免疫HCR信号放大方法标准曲线的建立

1.10.2 基于单球的免疫HCR信号放大方法标准曲线的建立

1.10.3 特异性分析

1.10.4 准确度和精密度分析

2 结果与讨论

2.1 核酸序列的验证

2.1.1 核酸序列的电泳验证

2.1.2 核酸序列的荧光验证

2.2 实验条件的优化

2.3 LNPs、Initiator-LNPs探针和Initiator-LNPs-mAb探针的表征和比较

2.3.1 SEM的表征

2.3.2 Initiator-LNPs探针和Initiator-LNPs-mAb探针的实际标记量和引发效率的比较

2.4 基于双球的免疫HCR检测大肠杆菌O157:H7的性能评价

2.4.1 标准曲线的建立

2.4.2 特异性评价

2.4.3 准确度和精密度

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李国强,熊智娟,黄艳梅,山珊,黄鹤,刘成伟,刘道峰

关键词: 免疫,大肠杆菌,检测,信号放大

来源: 南昌大学学报(理科版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西师范大学,江西省疾病预防控制中心江西省食源性疾病诊断溯源重点实验室

基金: 国家自然科学基金资助项目(31772066),江西省重点研发计划基金资助项目(20192BBGL70053,20192BBG70069),江西省重点实验室计划基金资助项目(20171BCD40021),江西省卫健委科技计划基金资助项目(20196001)

分类号: TS207.4

DOI: 10.13764/j.cnki.ncdl.2019.06.011

页码: 569-576

总页数: 8

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基于双球信号放大的大肠杆菌O157:H7免疫HCR检测方法

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